生物化学简答题新编

1、什么是蛋白质的他主要有哪几种蛋白质的二级结构是指多肽链主链原子的局部空间排布，不包括侧链的构象。它主要有a -螺旋，B -折叠，B -转角和无规则卷曲四种。简述a -螺旋结构特征：1、在a -螺旋结构中，多肽链主要围绕中心轴以右手螺旋方式螺旋上升，每隔3.6个氨基酸残基上升一圈，螺距为0.54nm2、氨基酸残基的侧链伸向螺旋外侧。3、每个氨基酸残基的亚氨基上的氢与第四个氨基酸残基羟基上的氧形成氢键，以维持a -螺旋稳定。简述常用蛋白质分离、纯化方法：盐析、透析、超速离心、电泳、离子交换层析、分子筛层析。简述谷胱甘肽的结构和功能：组成：谷胱甘肽由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸构成的活性三肽，功能基团：

2、半胱氨酸残基中的疏基。功能： 1、作为还原剂清除体内 H2O2,使含疏基的酶或蛋白质免遭氧化，维持细胞膜的完整性。2.具有嗜核特性，与亲电子的毒物或药物结合，保护核酸和蛋白质免遭损害。哪些原因影响蛋白质 a -螺旋结构的形成或稳定？1、一条多肽链中，带有相同电荷的氨基酸彼此相邻，相互排斥，妨碍 a-螺旋的形成。2、含有大侧链的氨基酸残基，彼此相邻，空间位阻较大也会影 响a -螺旋的形成。3、脯氨酸为亚氨基酸，亚氨基酸形成肽键后，没有了游离的氢，不能形成氢键， 因此不能形成a-螺旋。酶的化学修饰的特点是什么：在化学修饰过程中，酶发生无活性和有活性两种形式的互变该修饰时共价键的变化，最常见的是磷酸

3、化和去磷酸化修饰常受激素的调控是酶促反应有放大效应 酶的变构调节特点是什么：细胞内一些中间代谢产物能与某些酶分子活性中心以外的某一部位以非共价键可逆结合，使酶构象发生改变并影响其催化活性，进而调节代谢反应速率，这种现象为变构反应，其特点是变构酶常由多个亚基构成变构效应剂常结合在活性中心以外的调节部位，引起酶空 间构象的改变，从而改变酶的活性变构效应剂与调节部位以非共价键结合酶具有无活性和有活性 两种方式互变不服从米曼氏方程，呈 S型曲线酶和一般催化剂比较有何异同：相同点：反应前后无质和量的改变不改变反应的平衡点只催化热力学允许的反应都是通过降低反应活化能而增加反应速率的不同点酶的催化效率高酶对

4、底物有高度特异性酶活性的可调节性，酶的催化作用多受多种因素调节酶是蛋白质，对反应条件要求严格，如温度、pH 等简述Km和Vmax的意义：Km的意义：Km等于反应速率为最大速率一半时的底物浓度一些酶的 K2>>K3, Km可表示酶和底物的亲和力 Km值是酶的特征性常数，它与酶结构，酶所催化的底物和 反应环境如温度、pH 、离子强度等有关，而与酶浓度无关Vmax 的意义：Vmax 是酶被底物完全饱和时的反应速率 简述何谓酶原与酶原激活的意义：一些酶在细胞合成时，没有催化活性，需要经一定的加工剪切才有活性。这类无活性的酶的前体称为酶原。在合适的条件下和特定的部位，无活性的酶原向有活性的酶

5、转化的过程称为酶原的激活。酶原激活的意义：酶原形式的存在及酶原的激活有重要的生理意义。消化道蛋白酶以酶原形式分泌，避免了胰腺细胞和细胞外间质的蛋白被蛋白酶水解而破坏，并保证酶在特定环境及部位发挥其催化作用。正常情况下血管内凝血酶原不被激活，则无血液凝固发生，保证血流通畅运行。一旦血管破损，凝血酶原激活成凝血酶，血液凝固发生催化纤维蛋白酶原变成纤维蛋白阻止大量失血，起保护机体作用举例说明什么是同工酶，有何意义：同工酶使指催化相同的化学反应，但酶分子结构、理化性质及免疫学性质等不同的一组酶意义：同工酶可存在于不同个体的不同组织中，也可存在于同一个体同一组织中和同一细胞中。它使不同的组织、器官和不同

6、的亚细胞结构具有不同的代谢特征。例如：LDH1和LDH5分别在心肌和肝脏高表达还可以作为遗传标志，用于遗传分析研究。在个体发育的不同阶 段，同一组织也可因基因表达不同而有不同的同工酶谱，即在同一个体的不同发育阶段其同工酶亦有不同同工酶的测定对于疾病的诊断及预后判定有重要意义。如心肌梗死后36小时血中CK2活性升高， 24 小时酶活性到达顶峰，3 天内恢复正常水平金属离子作为辅助因子的作用有哪些：作为酶活性中心的催化基因参加反应，传递电子作为连接酶与底物的桥梁，便于酶和底物密切接触为稳定酶的空间构象中和阴离子，降低反应的静电斥力酶的必需基团有哪几种，各有什么作用：酶的必需基团包括活性中心内的必需

7、基团和活性中心外的必需基团。活性中心内的必需基团有结合基团和催化基团。结合基团结合底物和辅酶，使之与酶形成复合物。能识别底物分子特异结合，将其固定于酶的活性中心。催化基团影响底物分子中某些化学键的稳定性，催化底物发生化学反应，并最终将其转化为产物。活性中心外的必需基团为维持酶活性的空间构象所必需何谓酶促反应动力学，影响酶促反应速率的因素有哪些：酶促反应动力学是研究酶促反应速率及影响酶促反应速率各因素的科学，影响酶促反应速率的因素有酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂及激活剂等在在其他因素不变的情况下，底物浓度的变化对反应速率影响的作图时呈矩形双曲线的底 物足够时，酶浓度对反应速率的影响呈直线关

8、系温度对反应速率的影响具有双重性pH通过改变酶和底物分子解离状态影响反应速率抑制剂可逆或不可逆的降低酶促反应速率激活剂可加快酶促反应速率举例说明竞争性抑制作用在临床上的应用：以磺胺类药物为例：对磺胺类药物敏感的细菌在生长繁殖时，不能直接利用环境中的叶酸，而是在菌体内二氢叶酸合成酶的催化下，以对氨基苯甲酸为底物合成二氢叶酸。二氢叶酸是核昔酸合成过程中的辅酶之一四氢叶酸的前体磺胺类药物的化学结构与对氨基甲苯酸相似，是二氢叶酸合成酶的竞争性抑制剂，抑制二氢叶酸的合成。细菌则因核苷酸乃至核酸的合成受阻而影响其生长繁殖。人类能直接利用食物中的叶酸，体内的核酸合成不受磺胺类药物的干扰。根据竞争性抑制剂的特

9、点，服用磺胺类药物时必须保持血液中药物的高浓度，以发挥其有效竞争性抑菌作用许多属于抗代谢物的抗癌药物，如氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤等，几乎都是酶的竞争性抑制剂，它们分别抑制四氢叶酸、脱氧胸苷酸及嘌呤核苷酸的合成，以抑制肿瘤的生长比较三种可逆性抑制作用的特点：竞争性抑制：抑制剂的结构与底物结构相似，共同竞争酶的活性中心。抑制作用大小与抑制剂和底物的浓度以及酶对它们的亲和力有关。Km 升高， Vmax 不变非竞争性抑制：抑制剂与底物结构不相似或完全不同，只与酶活性中心外的必需基团结合。不影响酶在结合抑制剂后与底物的结合。该抑制作用的强弱只与抑制剂的浓度有关。Km 不变， Vmax 下降反

10、竞争抑制剂：抑制剂只与酶-底物复合物结合，生成的三元复合物不能解离出产物。Km 和 Vmax 均下降生物氧化的特点： 1、在细胞内温和的环境中（提问，PH 接近中性）：在一系列酶的催化下逐步进行：能量逐步释放有利于ATP 的形成；广泛的加氢脱水反应使物质能间接获得氧，并增加脱氢的机会；产生的水是由脱下的氢与氧结合产生的，CO2 由有机酸脱羧产生。氧化磷酸化的抑制剂有哪些，请举例说明：1、呼吸链抑制剂：鱼藤酮、粉蝶霉素 A、异戊巴比妥、抗霉素A、二疏基丙醇、CO、CN-、N3及H2S。2、解偶联剂：二硝基苯酚。 3、氧化磷酸化抑制剂：寡 霉素。NADH呼吸链的电子传递顺序；如果加入异戊巴比妥结果

11、将如何？NAD HRFMN（Fe-S） - CoCHCyt b -Cyt cl fCyt c -Cyt aa3 - 1/2O2,异戊巴比妥与 FMN结合，从而阻断电子传递链，使电子传递终止， 细胞呼吸停止。体内生成ATP的两种方式的什么，以哪种为主？底物水平磷酸化和氧化磷酸化。前者指直接将代谢物分子中的能量转移给 ADP（或者GDP师生成ATP（或GTP）的过程。后者指代谢物脱下的2H在呼吸链电子传递过程中偶联 ADP磷酸化而生成 ATP的过程，这是产生 ATP的主要方式。简述胞液中的还原当量（H+）的两种穿梭途径：在胞液中生成的 H+不能直接进入线粒体经呼吸链氧化，需借助穿梭作用才能进入线粒

12、体内。其中通过a-磷酸甘油穿梭，2H氧化时进入琥珀酸呼吸链，生成1.5分子ATP;进过苹果酸-天冬氨酸的穿梭作用，则进入NADH乎吸链，生成2.5分子ATP。磷酸戊糖途径的生理意义:（1）为核酸的生物合成提供核糖（2）提供 NADPH 作为供氢体参与多种代谢反应 :a.NADPH 是体内许多合成代谢的供氢体,如脂肪酸和胆固醇的合成.b. NADPH 参与体内羟化反应,与生物合成和生物转化有关.c. 用于维持GSH 的还原状态,保护 -SH 基蛋白和-SH 酶免受氧化及的损坏:保护红细胞膜的完整性.TCA循环的要点：a乙酰CoA经TCA循环被氧化成2分子CO2;b有4次脱氢反应淇中3次由NAD+

13、 接受，1次由FAD接受:c有3个不可逆反应，分别由柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、a-酮戊二酸脱氢酶催化 ;d 消耗 2 分子水（柠檬酸合酶及延胡索酸酶反应）;e 发生 1 次底物水平磷酸化反应（由琥珀酰CoA 合成酶催化 ） 糖异生的关键酶反应：丙酮酸竣化酶：丙酮酸 +CO2+ATP -草酰乙酸+ADP+Pi磷酸烯醇式丙酮酸竣激酶:草酰乙酸+GTP-磷酸烯醇式丙酮酸 +GDP 果糖双磷酸酶-1:1,6-双磷酸果糖+H2O -6-磷酸果糖+Pi 葡萄糖-6-磷酸酶:6-磷酸葡萄糖+H2O-葡萄糖+Pio 6-磷酸葡萄糖的代谢途径及其在糖代谢中的作用:1来源:a葡萄糖经糖酵解途径中的己糖激酶或葡萄

14、糖激酶催化磷酸化反应生成；b.由糖原分解产生的1-磷酸葡萄糖异构生成；c非糖物质经糖异生途径由6-磷酸果糖异构生成.2.去路：a经糖酵解生成乳酸；b.经有氧氧化彻底分解为CO2和水;c.由变位酶催化生成 1-磷酸葡萄糖，参与糖原合成；d.在6-磷酸葡萄糖脱氢酶的催化下进入磷酸戊糖途径；e异生为葡萄糖.3.由此可见 ,6-磷酸葡萄糖是糖代谢多种途径的交叉点, 是各代谢途径的共同中间产物.6-磷酸葡萄糖的代谢去向取决于各代谢途径中相关酶的活性大小.Cori 循环形成的原因及其生理意义: 形成是由于肝脏和肌肉组织的代谢特点所致.肝内糖异生活跃,有葡萄糖-6-磷酸酶水解6-磷酸葡萄糖,释放出游离葡萄糖

15、.而肌肉组织不能进行糖异生,没有葡萄糖-6-磷酸酶.因此 ,肌肉组织内生成的乳酸既不能异生成糖,又不能释放出游离葡萄糖.G-6-P 在肝脏的代谢去路:1 经糖酵解生成乳酸;2 经有氧氧化生成CO2 和水 ;3 通过异构变成G-1-P, 进而合成糖原;4 进入磷酸戊糖途径;5 糖异生途径中经葡萄糖-6-磷酸酶水解成葡萄糖.膜受体介导信息传递；激素 膜受体 G 蛋白 酶 信使 蛋白激酶酶或功能蛋白磷酸化生物学效应高血糖使血糖升高机制胰高血糖素与肝细胞受体结合激活Ga,在通过腺昔酸环化酶使ATP环化为cATP继而活化PKA,可促进磷酸化酶 b激酶的磷酸化而火花，后者又使磷酸化酶b磷酸化而活化为磷酸化

16、酶a,磷酸化酶a可促进肝糖原降解为 1磷酸葡萄糖，在转变为游离葡萄糖而提供血糖，促进糖原 分解，另一方面，PKA 还可使糖原合酶磷酸化而失活，从而减少糖原合成，促使血糖升高类固醇激素作用机制类固醇激素进入核内与相应受体结合，受体构象发生变化，导致热休克蛋白解聚，暴露出受体核定位区及DNA 结合区，使激素受体复合物向核内转移，并结合靶基因临近的激素反应原件上，进而改变基因表达谱，诱导合成特异蛋白质而表现其生理作用 简述细胞内小分子第二信使共同特点1 在完整细胞内，该分子浓度或分布在细胞外信号作用下发生迅速改变 2 该分子类似物可模拟细胞外信号的作用3 阻断该分子的变化可阻断细胞对外援分子的反应4

17、 作为别构效应剂在细胞内有特定的靶蛋白分子 简述 Ca 依赖性蛋白激酶途径的信号转导过程激素与受体结合为激素受体复合物，激素受体复合物激活G蛋白，G进一步激活 PI-PLC ,水解细胞膜上的 PIP2,生成IP3, DG。IP3与内质网和肌浆网上的 受体结合，促使该迅速释放，使胞内钙浓度升高，钙一方面可和DG 磷脂酰丝氨酸一同激活PKC ，发挥生物学作用，另一方面和钙调蛋白结合激活Ca-CAM 激酶，使靶蛋白分子发生磷酸化，从而发挥生物学作用。 受体配体结合特点1 高度专一性，受体选择性与特定配体结合，这种选择性由分子空间构想决定，这种识别与结合的特异性保证了调控精确性2 高度亲和力，体内化学

18、信号存在浓度非常低，受体与信号分子高亲和力保证了很低浓度信号分子也可以起充分调控作用3 可饱和性，无论细胞内外表面受体数目都是有限的，当受体全部被配体占据时，在提高配体浓度也不会增加细胞效应4 可逆性 受体配体已非共价键结合飞，当生物效应发生后，配体即与受体分开5特定的作用模式，受体分布含量具有组织细胞特异性，并呈现特定作用模式，受体配体结合后可引起某种特定生理学效应 G 蛋白结构特点分类作用机制G 蛋白是鸟苷酸结合蛋白的简称，居于细胞膜上是一种传导体，可将外来的信号装化为传向细胞内的信号，有a B 丫三种亚基组成，可分为兴奋型抑制型磷脂酶c型传导素型等，G蛋白有两种形式，非活化型a 0 Y三

19、聚体与GTP结合为活化型，G蛋白与蛇形受体胞浆面的第三个环偶联，当有信号作用于受体后，促进与GTP结合，G蛋白发生变构，6丫亚基脱落成为活性型G 蛋白后者进一步激活其他酶，促使细胞产生第二信使复制与转录过程异同1 都是酶促的核苷酸聚合过程，都以DNA 为模板依赖DNA 聚合酶，聚合过程都是核苷酸之间生成磷酸二酯键，都从5-3 方向延伸成新链多聚核苷酸，都遵从碱基互补配对原则原核真核生物 RNA聚合酶不同 原核生物RNA-pol有多个亚基构成，“20 0 ' w 6成为核心酶，“2B B ' 3 6称为全酶，真核生物有三种分别转录45S-rRNA,hnRNA小分子RNA(5s-R

20、NA,tRNA,snRNA) 。原核生物和真核生物的RNA-pol 特异性抑制剂分别是利福平和鹅膏蕈碱，原核RNA 聚合酶直接结合DNA 模板，真核RNA 聚合酶需转录因子共同与DNA 模板结合原核生物非依赖因子转录终止机制1 接近终止区的一段碱基可形成茎环结构或发夹结构，其后多发现多个连续U 这种结构终止转录机制可理解为1RNA 分子中形成的茎环结构可改变RNA 聚合酶的构象，导致酶和模板结合方式改变，使酶不再向下游移动，于是转录停顿2DNA RNA 个自形成自身双链使杂交体不稳定而分离3,3'端一连串U， rU/dA 配对最不稳定，易从模板上脱落说明原核生物mRNA 与核蛋白体小亚

21、基结合的机制在原核生物各种mRNA 起始 AUG 密码上游约8-13核苷酸部位，存在4-9 个核苷酸一致序列，富含嘌呤，以AGGA 为核心称S-D 序列，可与原核小亚基16S-rRNA3' 端富含嘧啶的短序列互补结合；mRNA 上紧接 S-D 序列后的小段核苷酸序列，可被核蛋白体小亚基蛋白rpS-1 识别结合.干扰素的作用机制在双链 RNA 存在时，干扰素能诱导特异蛋白激酶活化，使真核eIF2 磷酸化失活，抑制病毒蛋白合成；干扰素还能与双链RNA 共同活化特殊的2'5'A 合成酶，进而活化一种核酸内切酶，使病毒的 mRNA 降解，阻断病毒蛋白合成.蛋白生物合成的体系mR

22、NA 是模板 ;tRNA 是运载工具;核蛋白体是场所;20 种氨基酸是合成原料;各种蛋白质因子：起始，延长，终止因子;还需氨基酰-tRNA 合成酶，转肽酶等;ATP,GTP 提供能量.mRNA遗传密码排列顺序翻译成多肽链的氨基酸排列顺序，保证准确翻译的关键是什么a.氨基酸与tRNA的特异结合，依靠氨基酰-tRNA合成酶的特异识别作用实现.b.密码子与反密码子的特异结合，依靠互补配对结合实现，也有赖于核蛋白体的构象正常而实现正常的装配功能.真核生物与原核生物翻译的起始有何不同真核生物，核蛋白体是80S,起始因子种类多，起始 tRNA的Met 不需要甲酰化，帽子结合蛋白促使mRNA 与核蛋白体小亚

23、基结合，起始tRNA 先与核蛋白体小亚基结合，然后再结合mRNA.简述 mRNA 编辑 多种生物基因转录后存在一种对mRNA 外显子加工过程，可通过特定碱基的插入，缺失或置换，导致mRNA 的移码，错义突变或提前终止，造成mRNA 与其 DNA 模板序列之间不匹配，使同一 mRNA 前体翻译出序列、功能不同的蛋白质。这种调节方式称为mRNA 编辑 .原核生物合成一条含有100 个氨基酸残基的肽链至少需要消耗多少高能磷酸键？请写出计算过程.活化100*2=200 个 ATP ；起始 1 个 GTP ；延长：进位1 个 GTP 转位 1 个 GTP 99 次核蛋白体循环2*99=198个GTP;终

24、止1个GTP。所以共计 400个GTP。试述摆动配对及其生理意义转运氨基酸的tRNA 的反密码需要通过碱基互补与mRNA 上的遗传密码反向配对结合，但反密码子与密码子之间不严格遵守常见的碱基配对规则。通常按照5端 ->3 端方向，密码子的第3 位碱基与反密码子的第1 位碱基配对有一定摆动性,摆动配对可是一个tRNA 辨认多个同义密码子 .并且当密码子的第三位碱基发生突变时并不影响tRNA 带入正确的氨基酸.试说明蛋白质翻译后加工修饰有哪些方式a.一级结构的修饰：如去掉N端甲酰蛋氨酸；在胶原蛋白中将脯氨酸或赖氨酸羟化成羟脯氨酸或羟赖氨酸；将胰岛素原有的一条肽链加工水解成胰岛素A B 两条链

25、；b.高级结构的修饰：许多结合蛋白如糖蛋白.脂蛋白.色蛋白.各种带辅基或辅酶的蛋白，合成后都需要结合相应的辅基或辅酶才能成为具有特定功能的蛋白质。多个亚基聚合行程具有四级结构的蛋白质.c.靶向运输:蛋白质合成后,经过复杂的机制,定向运输到发挥生物学功能的靶部位.DNA 分子中的遗传信息如何传递到蛋白质分子中去以基因 DNA 为模板,转录生成的mRNA, 两者碱基严格互补 ,即 mRNA 携带 DNA 的遗传信息,mRNA 分子上的碱基排列顺序决定了遗传密码的排序,也就决定了蛋白质多肽链中的氨基酸排列顺序.蛋白质的生物合成，即将mRNA 携带的遗传信息翻译成氨基酸的排列顺序,即蛋白质的一级结构.

26、该一级结构又决定蛋白质的高级结构与功能.这种功能便是遗传信息通过转录.翻译过程表达为具有特定功能的蛋白质。说明转录激活是基因表达调控中的关键环节基因表达是一个多级调控的过程,涉及基因激活、基因结构活化、转录起始、转录后加工、蛋白质翻译、翻译后加工及蛋白降解, 上述任何一个环节异常都会影响基因表达水平,但不管是原核生物还是真核生物,转录起始是基因表达的基本调控点,转录起始是基因表达的限速步骤,因此转录激活是基因表达调控的基本环节简述阻遏蛋白在原核基因表达调节的作用特异的阻遏蛋白是控制原核启动序列活性的重要因素, 当阻遏蛋白与操纵序列结合或解聚时,就会发生特异基因的阻遏或去阻遏,原核基因调控普遍涉

27、及特异阻遏蛋白参与的开、关调节机制, 在乳糖操纵子、大肠杆菌SOS 反应和沙门菌的相变异过程都有阻遏和去阻遏机制. 试述真核生物基因组的结构特点真核生物基因组的结构特点有：基因组结构庞大，在不同物种中染色体数目也不同为单顺反子，即一个编码基因转录生成一个mRNA分子，经翻译生成一条多肽链有大量的重复序列基因组成是断裂基因,即在DNA 分子上,编码序列被几段非编码的序列间隔成若干段,其中的编码序列称为外显子, 非编码序列称为内含子.简述增强子的特点增强子的特点有增强相邻启动子的转录与方向无关位置不固定可位于结构基因的上下游也可远距离发挥作用需与反式作用因子结合才能起作用具有细胞类型的特异性.简述

28、 lac 的调节机制(1)当培养基中有葡萄糖没有乳糖或葡萄糖乳糖共同存在时,葡萄糖通过降低cAMP浓度，阻碍cAMP与CAP结合，失去了对RNApol转录活性的刺激作用，从而lac操纵子不表达，细菌充分利 用葡萄糖,这是最节能的方式(2)当培养基中没有葡萄糖而有乳糖存在是,cAMP 浓度高 ,与 CAP 结合,促进RNA 转录 ,又由于乳糖分解的半乳糖与阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白失去与O 序列结合的能力,丧失阻遏作用,在既没有阻遏作用又有 CAP促进作用时lac操纵子转录，细菌利用乳糖(3)lac操纵子的强诱导作用既需 要乳糖存在又需缺乏葡萄糖.顺式作用元件种类及功能顺式作用元件包括启动子：元件

29、是 TATA盒,精确的决定RNA合成的起始位点上游启动子元件：包括CAAT盒,CACA盒及GC盒等增强子：是远离转录起始点，增强启动子转录活性的特异 DNA序列沉默子：对基因转录起抑制作用的负性调节元件反式作用因子的结构和作用特点(1)具有三个功能结构域： DNA识别结构域转录活性域结合其他蛋白的结合域(2)能识别并结合上游调控区中的顺式作用元件(3)对基因表达有正性和负性调控作用,即激活和阻遏基因的表达.请简述基因工程的基本步骤a分离、提纯载体和目的基因，并加以鉴定b.用限制性核酸内切酶将载体切开以便插入目的基因 c.将载体和目的基因结合成重组体d.将重组体转化为宿主细胞e.将含目的基因的细

30、胞筛出并鉴定f. 克隆基因表达.载体应具备哪些基本条件.具有独立复制能力;具备多个限制酶的识别位点;具有遗传表型或筛选标志;有足够的容量以容纳外援DNA 片段 ;可导入受体细胞.常用的工具酶有哪些其主要用途是什么限制性核酸内切酶:识别并特异切割DNA 碱基序列;DNA pol 1:催化缺口平移,制备高比度DNA 探针 ;Klenow 片段:合成cDNA 第二条链,补齐或标记DNA3 端 ;逆转录酶:催化合成cDNA;DNA 连接酶:催化两条DNA 链之间形成磷酸二酯键;末端脱氧核苷酸转移酶:给载体或cDNA 加上互补的同聚尾、加标记物;碱性磷酸酶:防止载体自身连接、32p 标记5 端 .常用的

31、目的基因的获取方法有哪些制备基因组文库、构建cDNA 文库、 PCR 扩增目的基因、人工合成DNA 技术简述 PCR 的基本反应步骤.变性:将反应体系加热到95,使模板DNA 及引物完全变性成为单链;退火:将温度降到最适宜温度,使引物与模板DNA 退火结合;延伸 :将温度升至72,DNA 聚合酶以dNTP 为底物催化 DNA 的合成反应.何为限制性核酸内切酶写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA 序列的结构特点.限制性核酸内切酶是由细菌产生的一类能特异识别双链DNA 中特定碱基序列,并在识别位点切割磷酸二酯键的核酸内切酶.限制酶的切割和识别位点通常是48 个 bp 长度切具有回文序列的DNA 片

32、段,主要产生5突出或3 突出的粘性末端或平端.当一个样品DNA 被一个特定的限制酶切割后,可以产生一批相同碱基序列的DNA 片段 ,进而可以用于基因重组、克隆、核酸分子杂交与序列分析等.什么是质粒,为什么质粒可作为基因载体.质粒是独立于染色体之外,能自主复制的共价闭合环状双链DNA. 经过人工构建的载体,不仅能与外援基因相连接,而且质粒含有复制起始点,此起始点与顺式作用调控元件构成一个复制子, 能借助宿主细菌染色体DNA 复制所用的酶系独立的进行自我复制、克隆。核昔酸在体内有哪些生理功能？a.作为核酸合成的原料，这是核昔酸最主要的功能 .b.体内能量的利用形式,ATP是细胞的主要能量形式.c.

33、参与代谢和生理调节.d.组成辅酶.e.活化中间代谢物.简述 PRPP 在核苷酸合成中的重要作用PRPP 为 5'-磷酸核糖-1'-焦磷酸的缩写,他是5'-磷酸核糖的活性供体.既参与嘌呤核苷酸的从头合成和补救合成,也参与嘧啶核苷酸的从头合成和补救合成.此外还参与某些辅酶（如 NAD+,NADP+） 等的合成.试讨论各类核苷酸抗代谢物的作用原理及临床应用（1）嘌呤核苷酸的合成有两条途径,一种是利用磷酸核糖 ,甘氨酸,谷氨酰胺,天冬氨酸一碳单位及CO2 等小分子的物质为原料,以 ATP 供能,经过系列酶促反应,合成嘌呤核苷酸,称从头合成途径.另一种是利用体内游离的嘌呤或嘌呤核

34、苷,经过较简单的反应过程,合成嘌呤核苷酸,称为补救合成途径,这两种合成方式在不同组织中的重要性各不相同,例如肝组织进行从头合成途径,而脑,骨髓等则只能进行补救合成.一般情况下,从头合成途径是合成的主要途径.（2）嘧啶核苷酸与嘌呤核苷酸一样,在体内也有两条途径合成,一是从头合成,磷酸核糖,谷氨酰胺,天冬氨酸,一碳单位及CO2 等小分子的物质为原料,以 ATP 供能,经过系列酶促反应,合成嘧啶核苷酸.二是补救合成,利用尿嘧啶,胸腺嘧啶及乳清酸与PRPP 生成嘧啶核苷酸:胞嘧啶合成是由UTP 消耗 ATP, 从谷氨酰胺接受氨基而合成CTP. 尿苷激酶,胸苷激酶也是补救合成的酶,以尿苷,胸苷和ATP

35、分别合成尿嘧啶,胸腺嘧啶。简述参与原核生物DNA 复制的主要酶和蛋白因子有哪些各有何功能解螺旋酶打开DNA 双链;拓扑异构酶防止 DNA 解链过程中的打结和缠绕;SSB 蛋白稳定解开的单链DNA, 防止恢复为双链DNA; 引物酶合成 RNA 引物 ;DNA 聚合酶 III 催化 DNA 链的延长;DNA 聚合酶 I 切除引物,填补缺口,即时校读;DNA 连接酶连接双链DNA 上的单链缺口.简述原核生物DNA 复制的体系1.双链 DNA 各自作为模板;2.dNTP 作为底物;3.RNA 作为引物;4.ATP 提供能量;5.多种酶（包括依赖DNA 的 DNA 聚合酶,引物酶,拓扑异构酶,解链酶,连

36、接酶等）及多种蛋白因子（SSB,DnaA,DnaC 等 ）;6.Mg2+ 等无机离子.简述原核生物DNA 切除修复的过程1UvrA,UvrB 辨认并结合到损伤部位;2UvrC 在 UvrA,UvrB 的协助下与损伤 DNA 结合 ,并置换掉UvrA, 发挥核酸酶活性,切除损伤的单链DNA;3 由 DNApol-I 催化填补DNA单链缺口,最后由DNA 连接酶连接DNA 单链的断端,完成修复过程.简述1958年Messelson和Stahl证明DNA半保留复制的实验 细菌可以利用 NH4C1为碳源合成 DNA,他 们先将大肠杆菌放在含的氯化镂培养液中培养若干代后，提取DNA进行密度梯度离心，再转

37、入普通N14的氯化镂培养液中培养一代 ，二彳,并分别提取DNA进行密度梯度离心分析，因为含N15的DNA比普通N14 的 DNA 密度高,致密带位于其下方.简述逆转录过程1 以单链 RNA 为模板 ,tRNA 为引物,以 RNA 指导的 DNA 聚合酶活性催化单链DNA 的合成 ;2 核酸酶活性催化单链RNA 的水解 ;3 以单链 DNA 为模板 ,以 DNA 指导 DNA 聚合酶活性催化合成互补的 DNA, 完成双链DNA 的合成。参与甘油磷脂降解的主要磷脂酶有哪些？各有何作用？磷脂酶A1 ：水解甘油磷脂1 位酯键，产物为脂酸和溶血磷脂-2。磷脂酶A2:水解甘油磷脂 2位酯键，产物为脂酸（多

38、为花生四烯酸）和溶血磷脂-1。磷脂酶B1 :水解溶血磷脂-1的1位酯键，产物为脂酸和甘油磷酸含氮碱。磷脂酶 B2 :水解溶血磷脂-2 的2位酯键，产物为脂酸（多为花生四烯酸）和甘油磷酸含氮碱。磷脂酶C:水解甘油磷脂 3位磷脂酸键，产物为甘油二酯和磷酸含氮碱。磷脂酶 D:水解甘油磷脂磷酸和含氮碱之间的酯键，产物为磷脂 酸和含氮碱。1mol甘油彻底氧化分解产生多少mol ATP ? 16.5或18.5mol。甘油-3-磷酸甘油-1mol3-磷酸甘油+NAD+ -磷酸二羟丙酮 +NADH+H+（穿梭）1.5或2.5mol。3-磷酸甘油醛+NAD+-1,3-二磷酸甘油酸 +NADH+H+（穿梭）1.5或2.5mol。1,3-二磷酸甘油酸- 3-磷酸甘油酸（底物水平磷酸化）1mol。PEP-丙 酮酸（底物水平磷酸化）1mol。丙酮酸-乙酰 CoA2.5mol。乙酰CoA-三竣酸循环10mol。乙酰CoA在脂类代谢中的来源与去路。来源：脂酸B-氧化 酮体分解 甘油氧化分解。去路：合成脂肪酸 合成酮体合成胆固醇。1 mol 硬脂酸彻底氧化分解产生多