叶绿体色素的提取

1、叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定实验报告10科四 谭晓东20102501024一、实验目的1、学会叶绿体色素提取和分离的方法。2、了解叶绿体色素的荧光现象、皂化反应等理化性质。二、实验原理而溶于有机溶剂，故可叶绿体中含有绿色素和黄色素两大类，这两类色素都不溶于水，用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。产生的盐能溶于水能产生荧叶绿素是一种二羧酸可与碱起皂化反应而生成醇和叶绿酸的盐，中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，光；叶绿素中的镁可以被h+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸

2、渍标本。三、实验用具1、实验材料：叶片2、实验试剂：丙酮、碳酸钙3、实验器材：分光光度计四、实验步骤剪碎叶片少量CaCO3石英砂4研磨一过_取提取液色素提取液少许, 分装于两个试管25mL丙酮I荧光现象观察：在直射光下观察溶液的透射光反射光颜色有何不同的色素提取液少许一试管置于暗处，另一试管置于4 HCl日常光照下，2h后观察褐黄色浓少量醋酸铜，加热观察颜色的变化色素提取液10mL20mL乙醚的分液漏斗中，摇动J 沿漏斗边缘加入 30mL蒸馏水，轻摇, 静止，溶液分为两层色素已全部转入上层乙醚中，弃去下层 丙酮和水色素乙醚溶液中加入 5mL30%KOH甲醇溶 液，用力摇动分液漏斗，静止约 10

3、分钟加蒸馏水约10mL，摇动后静置，分层, 分装于2支试管中I分光光度计观察色素吸收光谱曲线五、实验结果1.叶绿体色素荧光现象的观察叶绿体色素的透射光呈亮绿色，在反射光下呈暗红 色。2.光的破坏光照后叶绿体色素提取液颜色变浅，暗处存放的叶绿体色素呈深绿色。4.皂化反应3. 铜代反应加入浓盐酸后，叶绿素分子遭破坏 形成去镁叶绿素，显褐黄色，加入醋酸 铜晶体加热后又变成深绿色，形成铜代 叶绿素。加入乙醚后，上层亮绿色，色素 在乙醚里；下层淡黄至无色，是 丙酮和水后加入30% KOHk甲醇溶液，静 置分层，上层黄色素，下层绿色 素。所以即使在光照下也不被破坏。Mg2+被H+取代，形成黄色的去镁叶绿素

4、，Mg2+被Cu2取代，形成铜代叶绿素，溶液呈现用分光光度 计分析色素 吸收光谱曲 线，上面的 曲线是叶黄 素的吸收光 谱，峰值波 长是465nm;下面是叶绿 素的吸收光 谱曲线，两 个峰值波长 分另y是415 nm 和 640nm六、分析与讨论1. 叶绿体色素荧光现象的观察叶绿体色素的透射光呈亮绿色，在反射光下呈暗红色。这是由于叶绿体色素主要吸收自 然光中的红橙光和蓝紫光， 未被吸收的光线透射过叶绿体色素溶液，呈现出绿色；在可见光下，叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光，故其反射光为暗红色。2. 光的破坏叶绿素的化学性质很

5、不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后， 破坏更快，而绿色叶子中的叶绿素与蛋白质结合，3. 铜代反应力口入盐酸后，在弱酸性环境中，叶绿素中的 溶液呈现黄褐色；加入醋酸铜晶体后，原来 深绿色。4. 皂化反应叶绿体色素不溶于水，但可溶于有机溶剂，用乙醚提取叶绿体色素，由于乙醚较轻，故 位于上层。向色素-乙醚溶液中加入 30 % KOH甲醇溶液，由于叶绿素是一种二羧酸叶 绿酸，甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中。而叶黄素较稳定，不易发生皂化反应而存在于乙醚中，由于有机溶剂较轻，溶液出现分层，上层为黄色的苯溶液 ，溶有类胡罗卜素，下层为绿色的酒精溶液，溶有皂化的叶绿素。从叶绿体色素的吸收光谱可以看出，叶绿体色素对光的吸收具有选择性，叶绿素的吸收光谱的最强吸收带有两个：一个在波长为660 nm的红光部分，另一个在 430 nm的蓝紫光部分。叶绿素的吸收峰值有两个， 主要是由于叶绿素是由叶绿素a和叶绿素b组成，叶绿素a和叶绿素b相比，吸收光谱略有不同：叶绿素a的红光部分偏向长光波方面， 吸收峰较低； 在蓝紫光部分偏向短光波方面，吸收峰较高。叶绿素b红光部分偏向短光波方面，吸收峰较低；在蓝紫光部分偏向短光波方面，吸收峰较高。胡萝卜素和叶黄素的吸收光谱与叶绿素 不同，其最大吸收带在 4005