三氯蔗糖成品的检测方法

1、物料名称三氯蔗糖测试项目色泽、组织状态、气味、含量、比旋光、水分、灼烧残渣、水解物、 相关物、甲醇、砷、重金属、鉴别、PH、颗粒度、堆积密度、三苯氧磷、细菌总数、霉菌酵母菌、铅、溶液的颜色和澄清度、口感1色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和 组织状态。1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。2 气味2.1仪器留样瓶2.2试剂2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。3 含量3.1

2、仪器和设备、电子天平高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。3.3实验步骤参考色谱条件4.6*2505ym。或其他等效色谱柱。水混合均匀后，用0.45卩m滤膜过滤，超声脱气a）色谱柱：SUPELCOSILTMLC- 18b）流动相：将150mL乙腈与850mL 后备用。c）柱温：30 C。d）流动相流速：1.0 mL/min。e）进样量：60 Lf）三氯蔗糖保留时间：9min左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动 相的比例。RSD不大于2.0 %。注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的分析步骤标准溶液的制备：称取 0.1500g 三氯

3、蔗糖标准品（精确至 0.0001g ），溶于预先准确称 取的49.0000g纯水中，所得溶液用 0.45卩m滤膜过滤，滤液备用。试样液的制备：称取约 0.1500 试样（精确至 0.0001g ），溶于预先准确称取的 49.0000g 纯水中，所得溶液用0.45卩m滤膜过滤，滤液备用。测定60讥，重复进在 3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为 样一次，计算出其主峰面积平均值。计算结果X1=A U*M S*P/(AS*MU)*100式中：X1 试样中三氯蔗糖的含量， %; AU 试样液色谱主峰面积的平均值; MS 称取三氯蔗糖标准品质量，g;P 三氯蔗糖标准品的含量，

4、 %; AS 标准溶液色谱主峰面积的平均值; MU 称取的试样质量， g;实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。3.4 注意事项RSD 不大于 2.0 。a）系统适应性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的b）进样时不得有气泡，并且进样速度保持匀稳推进。4 比旋光°4.1 仪器旋光仪、容量瓶、电子天平4.2 试剂纯水50ml 同时做空白。先 将测量示数清零。 然后将待测样品注入试管， 同方向放入4.3 实验步骤精确称取 1 g （精确至 0.0001g ）待测样品，用纯水溶解，定容至 将装有空白液的试管放入样品室， 样品室，测量其旋光度。计算公式：【a =50* a /(2*m)+

5、0.1*(T -20)其中：a所测得旋光度;m 样品质量T测定条件下的温度两次平行测定结果不超过 0.5% ，取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。4.4 注意事项a)b)c)使用前调试仪器先要开电源开关，预热约 30 分钟；样品的测试温度要控制在室温20 C± 0.5 C ;从溶解样品到测试的整个过程时间要短， 防止样品因温度和容积变化带来测试偏差；d） 测试过程中试液不能滴漏到仪器上，测量时旋光管中的气泡要赶到球中。5 水分5.1仪器水分测定仪、注射器、天平5.2试剂无水甲醇、卡尔费休试剂、纯水5.3实验步骤在卡尔费休滴定池内先注入约20ml左右的无水甲醇，用卡尔费休试剂滴定

6、至终点，然后用10卩l进样针抽取10卩l纯水样，注入滴定池，再用卡尔费休试剂滴定，记下读数V1,紧接着称取1g左右三氯蔗糖试样，精准至 0.0001g，记下读数m,注入滴定池，用卡尔费休 试剂再次滴定，记下读数 V2,最后按下式计算：W=（W1*m*100）*100%其中：V1滴定纯水时消耗的卡尔费休试剂的体积，V2滴定试样时消耗的卡尔费休试剂的体积，mlml5.4m 试样的质量，gw一水精制的水分取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。注意事项两次平行测定结果之差值不大于0.03% 。6.1a）确保所使用的试剂在有效期内;b）称量、计算必须准确无误。灼烧残渣仪器电子天平、马弗炉、干燥器6.

7、2试剂试剂硫酸6.3实验步骤精确称取1.0000g样品于恒重的坩埚中，放电炉上烧至无烟，冷却10分钟后加1ml硫酸，继续烧至无烟放置于800 C的马弗炉中，3小时后取出置于电炉上稍冷却数秒钟，再置于干燥器中冷却至室温称量。计算公式：?=吐空-*100%m其中:m1为坩埚+试样灼烧前的质量，g ; m2为坩埚+试样灼烧后的质量，g ; m为样品质量，6.4注意事项a）称样量必须精准；b）加硫酸时一定要等冷却10分钟后才加，以防坩埚爆裂;c）确保使用的坩埚是恒重的，并且一定要放在干燥器中冷却。7 PH7.1 仪器酸度计、温度计7.2 试剂pH=4.00 ，6.86, 9.18 的缓冲溶液7.3 实

8、验步骤90ml 的纯再用卷样品制备:准确称取 10g （精准至 0.0002g ）的样品于 100ml 小烧杯中，加 水溶解。开机预热 30min ，测量前用 PH=4.00 ，6.86 ，9.18 的缓冲溶液进行仪器校准， 纸擦拭干，将电极插入样品，按读数键，当出现根号后，记下读数。7.4注意事项a）测量前一定要开机预热，并进行 3 点校正；b）使用完电极要放在饱和氯化钾溶液中。相关物8.1仪器薄层层析板:涂有 0.2mm8.2 试剂 三氯蔗糖标准品:质量分数8.3 实验步骤展开剂的制备:氯化钠溶液厚度的 C18 烷基修饰的硅胶或其他等效物质。> 98.0%、乙腈、硫酸、无水甲醇、氯化

9、钠溶液:乙腈=70 : 30 （体积比）50g/L 。甲醇中，显色剂的制备:配制 15% 硫酸的甲醇溶液（体积分数） 。 标准溶液的制备: 称取 0.5g 三氯蔗糖标准品（精确至 0.001g ），溶解于 5.0mL此为溶液C。吸取0.5mL的溶 液C,用无水甲醇 定容 至100mL ,此为溶 液D。 试样液的制备:称取 1.0g 试样（精确至 0.001g ），溶解于 10.0mL 甲醇中。取溶液C、溶液D和试样液各5uL,点于薄层层析板底部，将层析板置于盛有展开剂 的层析缸中，待展开的溶剂前沿移至 15cm 时后取出薄层层析板，放置，待展开剂挥发干 净后用显色剂喷雾，然后于125 C &#

10、177;2 C烘箱中加热10min。试样液主色斑的 Rf值应与溶液C 主色斑的 Rf 值相同，且试样液中其他色斑的呈色应不深于溶液 D 主色斑的呈色。Rf 值 试样展开后斑点到原点的距离与溶剂前沿到原点的距离的比值。8.4 注意事项a）所有试剂都在有效期内；b）手拿薄层层析板时，不要碰到涂有0.2mm厚度的C18烷基修饰的硅胶的一面；C）在点板时，戴上口罩，防止薄层层析板被污染；d）展开缸内一定要干净无污染；e）原点不要浸在展开剂里9 水解物9.1 仪器和设备 薄层层析板:涂有 0.25mm 厚度的 Merk 硅胶 60 或其他等效物质。9.2 试剂对氨基苯甲醚、邻苯二甲酸、甲醇、甘露糖醇、果

11、糖。9.3 实验步骤显色剂的制备： 将 1.23g 对氨基苯甲醚 （有毒害性） 和 1.66 g 邻苯二甲酸溶于 100 mL 甲醇中。将溶液存放在暗处并冷藏，如果溶液退色则已失效。标准溶液 A 的制备：称取 10g 甘露糖醇（精确至 0.001g ），用水溶解后，移入 100mL 容量瓶中，用水定容至刻度。标准溶液 B 的制备：分别称取 10g 甘露糖醇（精确至 0.001g ）和 0.04g 果糖（精确 至O.OOOIg ）,移入100mL容量瓶中，用水定容至刻度。试样液的制备：称取 2.5g 试样（精确至 0.001g ），用 5mL 甲醇溶解后，转移至 10mL 容量瓶中，用甲醇定容至

12、刻度。取标准溶液 A、标准溶液B和试样液各5iL,分别在同一块薄层层析板的不同位置进 行点样，将每份溶液分 5 次（每次 1i L） 点于板上， 每次点样之间要待样点干燥后再继续点， 3 份样点的面积要基本相同， 点样完毕后用显色剂喷雾后于100C ±2C 烘箱中加热 15min ，加热后立即在阴暗背下观察层析板，试样液的色斑呈色不应深于标准溶液B的色斑呈色。9.4 注意事项a）如果标准溶液 A 的点样点变黑，说明层析板加热时间过长，需重新制备；10b）对氨基苯甲醚是有毒物质，操作时注意不要和皮肤接触；甲醇10.1仪器和设备气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器。10.2试剂甲醇标准品（

13、色谱纯）、色谱纯正丙醇、色谱纯吡啶。10.3实验步骤参考色谱条件a）色谱柱：2.1m X4mm （内径）玻璃柱，内填充 定相；或其他等效色谱柱。载气：氮气或氦气。柱温：150 Co0.2mm0.15mm聚苯乙烯型色谱固b)c)d)e)进样口温度：200 C。检测器温度：250 C。f） 流速：20mL/min 。g）进样量：0.2 jiL2.0。注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的相对误差小于 实验步骤内标溶液的制备：准确吸取1.0mL正丙醇，置于100mL容量瓶中，用吡啶定容至刻度, 摇匀。移取 5mL 该溶液，置于 500mL 容量瓶中，用吡啶定容至刻度，摇匀。标准溶液的制

14、备：准确吸取2.0mL甲醇，置于100mL容量瓶中，用内标溶液定容至刻度，摇匀。移取 1.0mL 该溶液，置于 100mL 容量瓶中，用内标溶液定容至刻度，摇匀。试样液的制备：称取约 2g试样（精确至0.001g ）,用内标溶液溶解，移入 10mL容量瓶 中，用内标溶液定容至刻度，摇匀。0.2 uL重复进在10.3参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为 样一次，计算出每次进样甲醇峰面积与内标物峰面积的比值。结果公式：CRU?0.00158?= *100%RS?MU式中：X试样中甲醇的含量，% ；RU 两次进样试样液中甲醇与内标物（正丙醇）峰面积之比的平均值；0.00158 标

15、准溶液中甲醇的浓度 X甲醇的密度X试样液的体积（2X10-4 X0.79 X10）RS 两次进样标准溶液中甲醇与内标物（正丙醇）峰面积之比的平均值；MU称取的试样质量，单位为克（实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10.4注意事项a）样品一定要称得精准；b）所使用的烧杯、进样瓶、 重金属仪器50mL纳氏比色管试剂硝酸、硫酸、6mol/L盐酸、注射器等一定要干净无污染。1111.111.210%。1%硝酸1mol/L盐酸、6mol/L氨水、1mol/L氨水、PH3.5的乙酸盐缓冲液、酚酞指示液、饱和硫化氢水、铅标准溶液、11.3

16、实验步骤试剂配制:100mL。6mol/L盐酸：量取50mL盐酸，用水稀释至100mL。1mol/L盐酸：量取8.3mL盐酸，用水稀释至PH3.5的乙酸盐缓冲液：称取 25.0g乙酸铵溶于 25mL水中，加入 45mL6mol/L 盐酸, 用稀盐酸或稀氨水调节PH值至3.5，用水稀释至100mL。酚酞指示液：1%乙醇溶液。饱和硫化氢水：将硫化氢气体通入不含二氧化碳的水中，至饱和为止（此溶液临用前制备）。铅。临用前用水稀释至100倍，使铅标准溶液：称取 0.1598g高纯硝酸铅，溶于 10mL1% 硝酸中，中定量移入 100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1mL相当于1.0mg成1.0mL

17、相当于10ug铅（可以外购之）。1%硝酸：取1mL硝酸加水稀释至 100mL。试样处理：小火碳化后，加2mL硝酸和5滴550 C灰化完全，冷却后取出，加滴浓盐酸浸润残渣，并加10mL水，称取试样5.0g置于坩埚中，加入适量硫酸浸润试样， 硫酸，小心加热，直到白色烟雾挥尽，移入高温中，于 2mL6mol/L盐酸浸润残渣，于水浴上慢慢蒸发至干。用1于水浴上再次加热 2min，将溶液移入50mL容量瓶中，如有必要须过滤，用少量水洗涤坩 埚和滤器，洗涤液一并移入容量瓶中，混匀， 每10mL该溶液相当于1.0g试样。在试样灰化 同时，另取一坩埚，按上述方法座试剂空白实验。A管：吸取含铅量相当于指定种金属

18、限量的铅标准溶液（不低于10ug铅）于50mL纳氏比色管中（如试样经处理，须同时吸取与试样液等量的试剂空白液），加水至25mL,混匀，加1滴酚酞指示液，用 6mol/L稀盐酸或1mol/L稀氨水调节pH至中性（酚酞红色刚褪去）， 加入PH3.5的乙酸盐缓冲液 5mL混匀，备用。10mL-20mL（或适量）试样液，加水至B管：取一支与 A管所配套的纳氏比色管，加入B 管等量的相同试样液，再加入与 1% 酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水 ，加入 pH3.5 的乙酸盐缓冲液 5mL，25mL混匀，加1滴1%酚酞指示液，用6mol/L稀盐酸或1mol/L稀氨水调节pH至中性（酚 酞红色刚褪去），加入PH3

19、.5的乙酸盐缓冲液5mL混匀，备用。C 管：取一支与 A、B 所配套的纳氏比色管，加入与 A管等量的铅标准溶液，加水至25mL混匀，加1滴（6mol/L或1mol/L）调节pH至中性（酚酞红色刚褪去） 混匀，备用。向各管中加入 10mL 新鲜备制的硫化氢饱和液， 并加水至 50mL 刻度， 混匀， 于暗处放 置5min后，在白色背景下观察，B管的色度不得深于 A管的色度，C管的色度应与 A管的 色度相当或深于 A管的色度。11.4 注意事项：a）所有试剂都在有效期内；b）所用玻璃仪器都要用 10%-20% 的硝酸浸泡 24h 以上，用自来水反复冲洗，最后用 纯水冲洗；c）实验中运用的强腐蚀实际

20、时，注意安全，做好防护工作。12 砷12.1 仪器测砷装置12.2 试剂5%溴化汞乙醇溶液、溴化汞试纸、硝酸、 1+1 硫酸、 1mol/L 硫酸、盐酸、 20%氢氧 化钠溶液、氧化镁、 15% 硝酸镁、 15% 碘化钾、 40% 氯化亚锡、无砷金属锌、酚酞指示液、10% 乙酸铅、脱脂棉12.3 实验步骤 试剂配制： 溴化汞试纸：将剪成直径 2cm 的圆形滤纸片，在 5%溴化汞乙醇溶液中浸泡 1h 以上， 保存于冰箱中，临用前取出置暗处阴干备用。乙酸铅棉花：将脱脂棉浸于10%乙酸铅溶液中， 2h 后取出晾干。40% 氯化亚锡溶液：称取 20g 氯化亚锡，溶于 50mL 盐酸。500mL 。1+

21、1 硫酸：将 1 体积浓硫酸慢慢加入 1 体积水中，冷却后使用。 1mol/L 硫酸：量取 28mL 浓硫酸，慢慢加入水中，用水稀释至 酚酞指示液： 1% 乙醇溶液。砷标准溶液：称取 0.1320g 于硫酸干燥器中干燥至恒重的三氧化二砷，溶于氢氧化钠溶液中，溶解后，加入 25mL1mol/L 硫酸，移入 1000mL 容量瓶中，加新煮沸冷 却的水稀释至刻度。此溶液 硫酸与 100mL 容量瓶中， 以外购之）。试样的处理： 取 5.0g1.00mL 相当于 0.100g 砷。 加新煮沸冷却的水稀释至刻度，试样于瓷坩埚中， 加 10mL15%临用前取 1.0mL，力口 1.0mL1mol/L此溶液

22、 1.0mL 相当于 1.0ug 砷（可硝酸镁溶液， 加入 1g 氧化镁溶液，混匀，浸泡 4h ，于低温或水浴上蒸干，用小火加热至炭化完全，将坩埚移至高温炉中，在550 C以下灼烧至灰化完全，冷却后取出，加适量水湿润灰分，加入酚酞溶液数滴，再缓缓加入盐酸（1+1）溶液至酚酞红色褪去，然后将溶液移入50mL容量瓶中（必要时过滤），用少量水洗涤坩埚 3次，洗涤并容量瓶中，加水至刻度，混匀。每10mL试样液相当于1.0g试样。取相同量的氧化镁、硝酸镁、按上述方法做空白试验。吸取一定量的试样液和砷的限量标准液（含砷 1.0ug 或 2.0ug ），分别置于锥形瓶中， 加 5mL 盐酸（试样液中如含硫酸

23、或盐酸， 则要减去试样液中所含酸的毫升数） ，加水至 30mL ， 再加5mL15%碘化钾溶液，5滴40%氯化亚锡溶液，混匀，室温放置10min。向上述锥形瓶中，各加入 3g 无砷金属锌，并立即塞上预先装有乙酸铅棉花及溴化汞试 纸的测砷装置，于 25C放置1h ,取出砷斑进行比较，试样的砷斑不得深于砷的限量标准的 砷斑。12.4 注意事项：a） 所有试剂都在有效期内；b） 所用玻璃仪器都要用 10%-20% 的硝酸浸泡 24h 以上，用自来水反复冲洗，最后用 纯水冲洗；c）实验中运用的强腐蚀实际时，注意安全，做好防护工作。13 颗粒度13.1 仪器振筛仪、电子天平13.2 试剂无13.3 实验

24、步骤称取 10.0g 样品，根据样品的规格选择相应目数的筛网， 将样品倒置筛网上， 盖好盖子。 放置振筛仪上，并设置振筛时间为 5 分钟。振完后，根据样品规格分别称量筛网上、筛网 下样品的质量 m。计算公式：m/10 *100%13.4 注意事项 根据样品规格要求，筛网上、筛网下样品质量不能弄混淆。14 堆积密度14.1 仪器10ml 容量瓶、电子天平14.2 试剂14.3实验步骤将10ml容量瓶放置天平上，清零，然后将样品放置称量纸上倒入容量瓶中，力度均匀 地摇晃40-50下，直至样品到容量瓶刻度线。放置天平称量，记下读数计算公式：m/1014.4注意事项一定要力度均匀慢慢地摇晃。15鉴别在

25、检测三氯蔗糖含量试验中，试样液在液相色谱图中的主峰保留时间应与标准溶液中三氯蔗糖的保留时间相同。16三苯氧磷16.1仪器和设备高效液相色谱仪（配备紫外检测器）、天平16.2试剂色谱纯乙腈、三苯氧磷标准品。16.3实验步骤参考色谱条件a）色谱柱：C18反相色谱柱，8mm x 10cm，粒度5卩m。b）流动相：将670mL乙腈与330mL水混合均匀后，用0.45卩m滤膜过滤，超声脱气 后备用。C）柱温：室温。d）流动相流速：1.5 mL/min。e）进样量：25卩L。f）三苯氧磷保留时间：6min左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动 相的比例。标准溶液的制备：精确称取 0.1000g

26、三苯氧磷准品（精确至 0.0001g）,用流动性定溶 到10mL的容量瓶中，再从中移取 1.0mL溶液用流动相定溶到100mL容量瓶，再把该溶液稀 释100倍，所得溶液用0.45卩m滤膜过滤，滤液备用。试样液的制备：称取约 0.1000试样（精确至0.0001g ），记录下样品的重量。用流动性 定容到10mL的容量瓶中，所得溶液用 0.45卩m滤膜过滤，滤液备用。25 uL重复进在17.3参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为 样一次，计算出其主峰面积平均值计算公式：At ?10000?=AS?Wt式中：X三苯氧磷的含量；At 三苯氧磷的峰面积；AS 样品的峰面积；mg。Wt

27、 样品的称样量；16.4注意事项2.0% ;a）系统适应性为重复注入标准溶液两次，所得相应面积的相对误差不大于b） 进样时不得有气泡，并且进样速度保持匀稳推进。17 细菌总数17.1 仪器 培养箱、电子天平、放大镜、无菌均质杯、无菌平皿、无菌吸管（无菌移液枪）17.2 试剂磷酸盐缓冲液、营养琼脂17.3 实验步骤17.3.1 样品稀释与培养称取 10g 样品置盛有 90ml 磷酸盐缓冲液的无菌均质杯中，制成1：10 的样品匀液。吸取 1ml 样品匀液于无菌平皿内，做平行样。同时，分别吸取 1ml 空白稀释液加入两 个无菌平皿内作空白对照。 及时将15ml-20ml冷却至46 C的平板计数琼脂培

28、养基倾注平皿， 并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，将平板翻转，36C ±1 C 培养 48 小时 ±1 小时。17.3.2 菌落计数：可用肉眼观察， 必要时用放大镜或菌落计数器， 记录稀释倍数和相应的菌落数量。 菌落 计数以菌落形成单位（ CFU ）表示。a)b)30CFU选取菌落数在 30300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 的平板计录具体菌落数，大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应 采用两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时， 则不宜采用， 而应以无片状菌落生长的平板作为 该稀释度的菌落数； 若片状菌落不到平

29、板的一半， 而其余一半中菌落分布又很均匀， 即 可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。c）17.3.3 菌落计数的计算方法 平板上的菌落数在适宜计数范围内， 计算两个平板菌落数的平均值， 再将平均值乘以相 应稀释倍数，作为每 g（ml） 样品中菌落总数结果。17.4 注意事项 若空白对照上有菌落生长，则此次检验结果无效。18 霉菌酵母菌18.1 仪器 培养箱、电子天平、放大镜、无菌均质杯、无菌平皿、无菌吸管（无菌移液枪）18.2 试剂孟加拉红培养基18.3 实验步骤18.3.1 样品稀释与培养称取 10g 样品置盛有 90ml 蒸馏水的无菌均质杯中，制成 1:10 的样品匀液。 吸取 1ml 样品匀液于无菌平皿内，做平行样。同时， 个无菌平皿内作空白对照。及时将 15ml-20ml 冷却至分别吸取1ml 空白稀释液加入两转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，将平板翻转，46 C的孟加拉红培养基倾注平皿，并28 C ±1 C培养5d，观察并记录。以菌落形可用肉眼观察， 必要时用放大镜， 记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌数。 成单位( CFU )表示。选取菌落数在 10-150cfu 的平板， 根据菌