银杏黄酮对D-半乳糖衰老模型小鼠的作用

1、银杏黄酮对D-半乳糖衰老模型小鼠的作用(1)        作者：窦丽华，马玉奎，丁元升【摘要】 目的 研究银杏黄酮对D-半乳糖所致小鼠学习记忆能力下降和各项衰老指标的对抗作用，以期探讨银杏黄酮的抗衰老作用机制。方法 以D-半乳糖衰老模型小鼠为实验对象，以其体重、免疫器官重量、肝脑丙二醛(MDA)和脂褐素(LF)的含量，全血谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-P）、红细胞过氧化氢酶(CAT)和脑中超氧化物歧化酶(SOD)的活力，脑中谷氨酸水平为指标，全面考察银杏黄酮的抗衰老作用。结果 银杏黄酮(125、250、500mg/

2、kg，ig)，能对抗连续6周给5%D-半乳糖0.25ml/10g所致小鼠脑组织中LPO、LF含量的升高，提高全血GSH-P、红细胞CAT和脑中SOD的活力，并对抗小鼠体重、脾脏及胸腺指数下降。结论 银杏黄酮能有效地对抗D-半乳糖所致的小鼠多项衰老指标的出现，促进衰老小鼠的学习记忆能力。        【关键词】 银杏黄酮；D-半乳糖；衰老；小鼠；L-谷氨酸            【Abstract

3、】 Objective By using the D-galactose-induced aging mice，the effects and mechanism of Ginkgo flavone on aging were investigated.Methods Ginkgo flavone were given to mice by ig and D-galactose were injected into mice for six weeks.Then，the ability of study of mice，the content of LPO，LF and the L-gluta

4、mate，the body weight，the index of thymus and spleen，the activities of superoxide dismutase(SOD)，catalase(CAT)and whole blood glutathione peroxidase(GSH-P)were determined.Results To the D-galactose-induced aging mice，Ginkgo flavone(125，250，500mg·kg，ig)reduced the content of LPO，LF，L-glutamate in

5、 brain，inhibited the decrease of body weight and the weight of thymus and spleen，enhance the activities of SOD in brain，CAT in erythrocyte and whole blood GSH-P.Conclusion Ginkgo flavone shows a remarkable anti-aging effect on the D-galactose-induced aging mice.      &#

6、160; 【Key words】 Ginkgo flavone； aging； D-galactose； mice； L-glutamate        银杏黄酮(Ginkgo flavone)是从中草药银杏中提取分离的有效成分，临床及基础研究，表明，银杏黄酮对衰老和老年性痴呆有一定的治疗作用，认为作用机制可能是使衰老动物和老年性痴呆人脑组织中M受体上调。但衰老是个综合过程，涉及机体各个系统、不同结构层次的多项指标。目前银杏黄酮对老化相关酶、老化代谢产物的影响报道尚少，特别是谷氨酸和衰老的关系是近几年研

7、究的热点。本文采用D-半乳糖衰老模型小鼠考察了Ginkgo flavone 对上述多项指标的影响，同时测定动物学习记忆能力的变化。    1 材料        1.1 动物 昆明种小鼠合格证号：SCXK(鲁)20030004，体重1822g，由山东大学实验动物中心提供。        1.2 药品与试剂 银杏黄酮(Ginkgo flavone)：沈阳药科大学植化教研室提供。D-半乳糖：Sigma

8、公司生产，上海生化试剂公司分装，批号：980927。硫代巴比妥酸(Thibarbituric acid，TBA)：上海制剂二厂，批号：920620。苄胺(Benzyl amine)：新华活性材料研究所，批号：20000123。谷胱苷肽(GSH)：上海政翔医用科技实业服务部化学试剂研究所，批号：990915。二硫硝基苯(dithionitobenzene；DTNB)：FLUKA产品，批号：980716。L-谷氨酸：上海康达氨基酸厂产品，批号：20000531。茚三酮：上海试剂三厂产品，批号：990325。GSH-P、CAT、SOD测定试剂盒均为南京建成生物工程研究所提供，批号：20030225。

9、        1.3 仪器 WFZ800-D2型紫外可见分光光度计，北京第二光学仪器厂；HITACHI650-60型荧光分光光度计，日本；电泳仪，DYY-型，北京六一仪器厂；721分光光度计，上海第三分析仪器厂；910双波长薄层扫描仪，日本岛津公司。        2 方法        2.1 D-半乳糖衰老模型的建立 取健康小鼠75只，随机分为正常组、

10、模型组、给药组。各给药组ig Ginkgo flavone(125、250、500mg/kg)；正常组和模型组ig等体积的CMCNa；给药同时模型组和各给药组皮下注射5%D-半乳糖0.25ml/10g；正常组皮下注射等体积的生理盐水；连续6周，最后1天灌胃和注射D-半乳糖2h后，进行学习记忆训练实验，次日测定记忆成绩。然后处死，测定各项衰老指标。        2.2 D-半乳糖衰老模型小鼠学习记忆能力的测定(跳台法) 将动物放入跳台箱内适应3min，然后立即通36V交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台以躲避

11、伤害性刺激，如此训练5min。24h后重做测验，此即记忆保持测验。记录小鼠第1次跳下平台的潜伏期和5min内的错误次数。    2.3 D-半乳糖衰老模型小鼠脑组织MDA、LF含量测定小鼠断头处死，立即取脑，用硫代巴比妥酸(TBA)法测定组织丙二醛(MDA)的含量；用荧光法测定脑组织中LF的含量。        2.4 D-半乳糖衰老模型小鼠全血GSH-P、红细胞CAT和脑中SOD活力的测定 小鼠末次给药后第2天眼眶取血，断头处死取全脑，分别按试剂盒说明测定GSH-P、CAT

12、和SOD。    2.5 小鼠脑组织中谷氨酸含量的测定 小鼠断头处死，立即取全脑适量，用0.61mol/L的三氯乙酸制作10%的匀浆，取上清液用石油醚-正丁醇洗后，点样，电泳，茚三酮显色后用双波长薄层扫描仪测定全脑谷氨酸的含量。        2.6 统计学方法 各组数据采用x±s表示，组间比较采用t检验。        3 结果     

13、;   3.1 银杏黄酮对衰老模型小鼠体重及免疫器官重量的影响 与正常组比较，衰老模型小鼠体重及胸腺和脾脏指数降低，而银杏黄酮(125、250、500mg/kg)可显著抑制体重、胸腺和脾脏指数的降低，见表1。Tab 1 The effect of Ginkgo flavone on the index of body weight，thymus and spleen of D-galactose-induced seniled mice （x±s，n=15）注：P0.01，compared with control group；*P0.01，* 本篇论文

14、是由3COME文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站的，论文版权属原作者，请不要用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。P0.05，compared with model group        3.2 银杏黄酮对衰老模型小鼠学习记忆的影响 与正常对照组相比，模型组小鼠记忆明显衰退，表现为错误次数增加，潜伏期缩短(均P0.01)。与模型组比较，银杏黄酮(125，250，500mg/kg)可使小鼠错误次数明显减少，潜伏期明显延长，见表2。 

15、60;  Tab 2 The effect of Ginkgo flavone on the eeficit of learning and memory induced by D-galactose on mice in step-down tese (x±s，n=15) 注：P0.01，compared with normal group；*P0.05，*P0.01，compared with model group        3.3 银杏黄酮对D-半乳糖致小鼠衰老模型脑内LP

16、O、LF、含量的影响 与正常组比较，衰老模型小鼠脑组织中LPO、LF、含量增高，而银杏黄酮(125、250、500mg/kg)可显著抑制LPO、LF含量的增高，见表3。Tab 3 Effect of Ginkgo flavone on the content of LPO and LF on D-galactose-induced seniled mice (x±s，n=15)注：P0.01 compared with control group；*P0.05，*P0.01，compared with D-galactose group    

17、3.4 银杏黄酮对D-半乳糖致衰老模型小鼠全血GSH-P、红细胞CAT和脑中SOD活力的影响 与正常组比较，衰老模型小鼠全血GSH-P、红细胞CAT和脑中SOD活力明显降低，而银杏黄酮(125、250、500mg/kg)可显著抑制3种酶活力的降低，见表4。Tab 4 Effect of Ginkgo flavone on the activity of SOD of brain，CAT of erythrocyte and GSH-PX of blood in D-galactose-induced seniled mice. (x±s，n=15)注：P0.01，P0.05，comp

18、ared with control group；*P0.05，compared with D-galactose group        3.5 银杏黄酮对D-半乳糖致衰老模型小鼠全脑谷氨酸含量的影响 与正常组比较，衰老模型小鼠全脑谷氨酸含量增加，而银杏黄酮(125、250、500mg/kg)可显著抑制谷氨酸含量的增加，见表5。 Tab 5 Effect of Ginkgo flavone on the content of L-glutamate of brain，in D-galactose-induced注

19、：P0.05，compared with control group；*P0.05，compared with D-galactose group        4 讨论        D-半乳糖亚急性衰老模型是利用给小鼠连续皮下注射大剂量D-半乳糖，造成动物糖代谢紊乱而建立的。D-半乳糖在半乳糖氧化酶催化下，可产生超氧阴离子等氧自由基。氧自由基具有高度活性，可以攻击膜磷脂中的不饱和脂肪酸、蛋白质、酶及胞核内的DNA等；自由基还可使脂质发生过氧化作用而形成过氧化脂质(LPO)，LPO随蛋白沉淀后在酸性条件下生成MDA，MDA是活泼的交联剂，可迅速与磷脂酰乙醇胺生成荧光色素，然后与蛋白质、肽类、脂类结合形成板层状脂褐质(LF)。用D-半乳糖连续注射，小鼠可产生多项生化指标的变化，如脑组织MDA、LF含量的升高；脑中SOD、血中GSH-P、红细胞中CAT活力的降低，这些变化和自然衰老