电化学发光免疫法与放射免疫法测定血清铁蛋白的评价

1、电化学发光免疫法与放射免疫法测定血清铁蛋白的评价                       作者：李桂彩，陈德平，肖静坤 【关键词】  电化学发光免疫分析法；放射免疫分析法；血清铁蛋白摘  要 目的：评价电化学发光免疫分析法(ECLIA)和放射免疫分析法(RIA)在测定血清铁蛋白(SF)中的应用。方法：用ECLIA、RIA分别对中浓度SF的标本进行回收试验

2、和抗干扰试验(干扰物为血红蛋白)，对低、高浓度SF的标本进行重复试验。结果：平均回收率ECLIA为95.6%、RIA为93.5%，两种方法比较，差异无显着性(P0.05)；变异系数(CV) ECLIA为3.0%、4.3%，RIA为8.5%、9.3%，两种方法比较，差异均有显着性(P0.05)；抗血红蛋白(Hb)干扰能力，当血清中Hb浓度在1.0 g/L6.0 g/L时，随Hb含量的增加，两种方法测定SF时的干扰都逐渐增加(正干扰)，血清中Hb浓度4.0 g/L用ECLIA测定SF和血清中Hb浓度2.0 g/L用RIA测定SF时，其结果的偏差系数(CB)都5.0%。结论：两种方法测定SF准确性、

3、精密度均符合要求，且ECLIA优于RIA；标本严重溶血时，两种方法的测定结果均偏高。关键词 电化学发光免疫分析法；放射免疫分析法；血清铁蛋白To Assess the Determination of Serum Ferritin In ECLIA and RIAAbstract：Objective To explore the significance of the determination of Ferritin in ECLIA and RIA.Methods Using the ECLIA and RIA to do experiment on the sample SF of th

4、e middle concentration with the withdraw and antiinterference test respectively(the interference is Hb),and to repeat doing the experiment on the sample SF of the lower or the higher concentration.Results The results showed that the mean withdrawing rate of ECLIA was 95.6% and that of RIA is 93.5% ,

5、which showed no differences when compared (P0.05).The CV of ECLIA is 3.0% 、4.3% and that of RIA is 8.5%、9.3% ,which showed the certain differences when compared (P0.05).The Hb level is between 1.0 to 6.0 g/L ,as the concentration of Hb increases,the interference ability is also increased.The CB of t

6、he determinated result is more than 5.0% when using ECLIA to determinated SF as the concentration of Hb4.0% and using RIA to determinaed SF as the concentration of Hb2.0%.Conclusion The two methods of the determination of SF in ECLIA and RIA are precise and accurate,but ECLIA is better than RIA.The

7、determination results are all higher when serious hemolysis occurred.Key words：ECLIA；RIA；Ferritin   铁蛋白是人体内一种含铁丰富的蛋白，主要分布于肝、脾、骨髓等组织细胞中。正常情况下，体内血清铁蛋白(SF)含量甚微，它是诊断缺铁性贫血、铁负荷过度等疾病的有效指标1。此外，许多实体恶性肿瘤细胞可以合成和分泌铁蛋白，故可作为肿瘤标志物，用于肿瘤诊断1。SF测定值的增高或降低，均有重要临床意义，因此必须准确测定。本文对电化学发光免疫分析法(ECLIA)和放射免疫分析法(RIA)用于S

8、F测定进行了评价，结果报告如下。1  材料和方法1.1  仪器  全自动电化学发光分析仪(MODULAR ANALYTICS E170型，德国Roche公司产品)。放射免疫分析仪(r放射免疫计数仪GC911型，科大创新中佳分公司产品)。1.2  试剂  ECLIA铁蛋白试剂盒及配套校准品、质控品均由Roche公司提供。RIA铁蛋白药盒及配套铁蛋白标准液(含0 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml、500 ng/ml)均由天津九鼎医学生物工程公司提供。干扰物为血红蛋白(Hb)定值液(100 g/L),由四川省通广制剂公司提供。所有的

9、操作严格按说明书进行。1.3  标本来源  收集用RIA测定的SF浓度为低值(SF30 ng/ml)、中值(30 ng/mlSF300 ng/ml)、高值(SF300 ng/ml)的无溶血、无脂血、无黄疸的本院住院病人血清标本若干ml，按低值、中值、高值分组混合后分装于0.5 ml塑料离心管，于-20 保存备用。1.4  方法1.4.1  回收试验 按文献2方法，取中浓度SF血清标本4份、各0.9 ml，分别加入0 ng/ml、 100 ng/ml、200 ng/ml、500 ng/ml铁蛋白标准液100 l，制成基础样品和A、B、C样品，加入的铁蛋白浓

10、度值为0 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml,4种样品用两种方法平行测定3次，取均值计算。1.4.2  重复试验  取低、高SF浓度血清标本各一份，用两种方法每天平行测定4次、连续测定6 d(n=24)，计算±s、CV值。1.4.3  干扰试验  本文只评价溶血对结果的干扰。先取Hb定质液(100 g/L)用生理盐水稀释成10 g/L、20 g/L、40 g/L、60 g/L 4种浓度Hb稀释液。按文献2方法，取中浓度SF的血清标本5份、各0.9 ml，分别加入0 ng/ml铁蛋白标准液和上述不同浓度Hb稀释液10

11、0 l，制成基础样品和A、B、C、D样品，加入Hb浓度值为0 g/L、1 g/L、2 g/L、4 g/L、6 g/L，5种样品用两种方法平行测定3次，取均值计算。1.5  统计学处理  采用u检验。         2  结果2.1  回收试验  用ECLIA测得基础样品SF浓度为138.5 ng/ml，测得A、B、C三种样品SF浓度为147.7 ng/ml、158.1 ng/ml、186.9 ng/ml，回收率分别为92.0%、98.0%、96.8%，平均回收率为

12、95.6% 。RIA 测得基础样品SF浓度为139.8 ng/ml，测得A、B、C三种样品SF浓度为148.9 ng/ml、158.8 ng/ml、187.1 ng/ml，回收率为91.0%、95.0%、94.6%，平均回收率为93.5%。比较两种方法的平均回收率，差异无显着性(u=0.26，P0.05)。回收率都在90%105%范围内,说明两种方法的准确性均好。结果见表1。表1  两种方法对不同浓度SF样品的回收试验结果(略)2.2  重复试验(±s)  ECLIA：低浓度SF为(19.5±0.59)ng/ml，CV=3.0%；高浓度SF为(

13、742.8±31.90)ng/ml,CV=4.3%。RIA：低浓度SF为(20.3±1.73)ng/ml,CV=8.5%；高浓度SF为(758.9±70.6)ng/ml，CV=9.3%。比较两种方法同一浓度的CV值，差异均有显着性(u低值=7.97、u高值=6.64，P0.05)。按文献标准，ECLIA具有较高的精密度，且优于RIA，但RIA的精密度仍在可接受的范围。结果见表2。表2  两种方法对高、低浓度SF样品的重复试验结果(略)2.3  干扰试验 ECLIA：测得基础样品SF浓度为138.5 ng/ml，测得A、B、C、D 4种样品的SF

14、浓度为140.3 ng/ml、144.0 ng/ml、145.6 ng/ml、153.6 ng/ml，偏差系数分别为1.3%、4.0%、5.1%、10.9%。RIA:测得基础样品SF浓度为139.8 ng/ml,测得A、B、C、D 4种样品的SF浓度为144.0 ng/ml、146.7 ng/ml、157.3 ng/ml、167.1 ng/ml，偏差系数分别为3.0%、4.9%、12.5%、19.5%。按文献标准,当血清中Hb浓度4.0%时ECLIA测定结果和血清中Hb浓度2.0%时RIA测定结果都产生了明显的正偏差。结果见表3。表3  两种方法的抗干扰试验结果(略)  讨

15、论31  ECLIA和RIA的优点 ECLIA是将发光系统与免疫反应相结合以检测抗原或抗体的方法，是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫之后的新一代标记免疫技术，具有灵敏度高、线性范围宽、快速、应用范围广等特点5。RIA是将放射性核素示踪技术的高灵敏度和免疫学抗原、抗体结合的特异性，两者相结合的分析技术。本文的结果也证实了两种方法测定SF的准确性、精密度均符合要求；ECLIA的准确性、精密度较RIA好。ECLIA测定过程是全自动系统，仪器精确加样、恒温孵浴、检测，尽可能地减少了随机误差，并且使用原装配套试剂、校准品和质控物，测定的准确性也较好。RIA测定时，加样、离心分离全部是

16、手工操作，步骤较复杂，带来误差的环节较多，其准确性、精密度相对差一些。32  ECLIA测定SF的临床实用性胜过RIA  ECLIA操作简便、试剂贮存有效期长(6个月左右)、检测速度快(一个标本测定全过程18 min)，灵敏度更高、线性范围更宽，SF检测限(0.5 ng/ml2 000 ng/ml)；SF也是一种肿瘤标志物，一些实体肿瘤病人SF浓度往往比较高，高浓度的标本用ECLIA测定结果更准确。RIA问世40多年来，虽然方法、检测技术都已日臻完善，但由于具有一定的放射性污染、试剂贮存有效时间短(30 d45 d)、测定时间相对较长(一般为2 h左右)，灵敏度、线性范围略逊色于ECLIA；加之放免室的特殊准入制度管理，临床应用有许多不便，因此有被化学发光技术取代的趋势。33  标本严重溶血时，两种方法测定SF都有影响，使结果偏高1  原因：由于红细胞内富含铁蛋白，溶血时铁蛋白进入血清，可能使测定结果假性增高。Hb也是一种含铁蛋白，可能与SF的抗体存在非特异性反应，而使测定结果偏高，或者其他有待进一步探讨的原因。综上所述：ECLIA测定SF准确性、精密度、实用性均优于RIA，操作时