p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达及临床意义

1、p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达及临床意义【摘要】 目的： 探讨p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达及临床意义。方法： 采用免疫组织化学Envision二步法检测40例胃癌组织的p57kip2和ki67表达水平。结果： p57kip2和ki67在胃癌组织中的阳性表达率分别为35（1440）和87.5（3540），两者的表达与胃癌组织的病理组织学分级及临床分期有关（P0.05），而与组织学类型无关（P0.05）；p57kip2与ki67表达强度呈负相关，相关系数r=-0.093（P0.01）。结论： p57kip2表达下调及ki67表达上调在胃癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用

2、。 【关键词】 蛋白质p53 ki67抗原 癌 胃 免疫组织化学胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生是多因素、多基因参与的复杂生物学过程。研究发现，p57kip2 具有负性调节细胞增生的生物学功能，可能具有对肿瘤的抑制作用，p57kip2失活与多种人类恶性肿瘤的发生和进展相关，包括肺癌、肝癌、结肠癌、胆管癌和胰腺癌等。 ki67广泛表达于增殖期细胞，是评价细胞增殖的较好指标，ki67表达增殖与多种恶性肿瘤的进展和预后相关。本研究采用免疫组织化学方法检测p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达，探讨其与胃癌的发生及发展的关系。 1 材料与方法 1.1 研究对象 收集病理科2000-2004年

3、确诊的40例胃癌标本，根据1999年WHO组织学分类标准分为两组：高分化组（乳头状腺癌或管状腺癌）16例，低分化组（低分化腺癌或未分化癌）24例。按照胃癌国际分期期9例，期31例。所有组织经10%中性福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋切片。 1.2方法 1.2.1 主要试剂 鼠抗人p57kip2单克隆抗体为Santa Cruz美国公司产品,购于福州迈新生物公司; 鼠抗人ki67单克隆抗体及Envision试剂盒为Dako丹麦公司产品，购于成都基因公司。 1.2.2 免疫组织化学 采用Envision二步法，切片脱蜡，高温高压热修复，常规免疫组织化学染色。p57kip2和ki67工作稀释度分别为11

4、20和1140。每批染色均设PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。阳性细胞判断标准：p57kip2和ki67阳性反应均呈棕褐色，颗粒状。p57kip2主要位于细胞核和细胞浆中，ki67只定位于细胞核。每张切片随机选取5个高倍视野计数500个肿瘤细胞，阳性细胞数50%为强阳性、49%30%为阳性、29%10%为弱阳性、10%为阴性。 1.2.3 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件包中2和Fish精确概率检验法统计分析数据。 2 结果 p57kip2阳性表达14例、阳性表达率35%，ki67 35例、阳性表达率.%，两者与临床病理特征关系见表1。由表1可见，p57kip2和

5、ki67表达强度与胃癌组织学类型无关（P0.05），而与病理组织分级及临床分期密切相关（P0.05）。癌细胞分化程度越低、临床分期越高，p57kip2的表达降低，而表1 p57kip2和ki67的表达与胃癌临床病理特征的关系ki67表达则越强。p57kip2与ki67呈显著负相关，相关系数为r=-0.093（P0.01）。 3 讨论 细胞周期调节失控是细胞过度增殖及癌变的重要原因，细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclindependent kinase,CDKS）参与调控G1S期及G2M期转换，是细胞周期转换的关键物质，CDK抑制蛋白因子（CDK inhibitors,CDKIS）是CDK的负性调

6、控因子，CDKIS依其结构和功能特点分为INK4家族和cip/kip家族，p57就是cip/kip家族中的一员，对细胞周期进行负调控。p57基因定位于染色体11.5上的D11S648和D11S679之间约2.2 kb的区域中1,2, p57蛋白通过抑制CDK复合物的功能来实现其调控作用，它主要抑制CyclinECDK2、CyclinACDK2和CyclinDCDK2等G1期和S期激酶复合物，使细胞周期无法完成由G1期和S期的转变，使细胞停滞于G1期，从而起到对细胞周期的负调控作用。正常情况下，p57kip2基因为父源基因印记，母源基因表达。文献报道肺癌患者存在p57kip2母源基因缺失，导致印

7、记缺失，父源基因表达，提示p57kip2存在基因印记缺失（loss of imprinting, LOI）3。p57kip2、 p21waf1 cip1和p27kip2同属cip/kip家族,研究证实胃癌患者p21、 p27蛋白表达下调，提示p21、 p27基因参与胃癌的发生，其中p27kip2表达下调可能与泛素蛋白水解酶复合体活性升高有关。 肿瘤的发生、发展和转移是一个多基因参与的过程，抑癌基因的失活、癌基因的激活、蛋白的过度表达及失表达等均是肿瘤发生发展的重要机制。人体多种肿瘤存在p57kip2蛋白表达的下调与缺失，在大肠癌、卵巢癌、甲状腺癌、肝癌及膀胱癌等恶性肿瘤中均有报道48。Shin

8、等9用RTPCR法对30例胃癌及正常胃黏膜组织中p57 mRNA进行研究发现，与正常胃黏膜组织相比，在胃癌细胞中p57 mRNA的表达显著降低（P0.05）。Ito等10通过对90例肝细胞癌患者的调查表明，p57kip2表达的高低程度与肝细胞癌的分化程度存在显著相关性（P0.05）。这些结果揭示p57kip2在胃癌、肝细胞癌和胰腺癌中有着相似的生物学行为，与癌组织分化程度及临床分期有显著相关性，而且Red等通过研究证实，p57阳性表达的细胞绝大部分为终末期分化的细胞，说明p57kip2可能参与了癌细胞分化的过程，并在细胞周期转化的过程中起了调节作用。本研究发现，p57kip2与胃癌的分化程度有

9、关。p57kip2的阳性表达率在临床期及低分化胃癌组织中显著低于临床期及高分化胃癌组，提示p57kip2可能是胃癌发生的负性调控因子，可能与LOI和泛素蛋白水解酶复合体活性异常相关，胃癌中p57kip2表达降低的机制仍有待于进一步的研究。 编码ki67的人类基因定位与第10号染色体的长臂上，ki67蛋白由相对分子质量为358 761 Da和319 508 Da的2条多肽链组成，由2个相连接的9 768 bp和8 686 bp的mRNA所编码。ki67的研究多用于判断肿瘤的良、恶性及恶性程度，也用于探讨细胞增殖活性、细胞周期与肿瘤的生长方式、浸润方式、复发及转移等生物学行为与预后的关系。ki67

10、广泛表达于增殖期细胞，而不表达于静止期细胞，是评估细胞增殖的较好指标。Czyzewska等11研究证实ki67表达与肿瘤的分化程度、Lauren分型、淋巴结转移等明显相关，与年龄、肿瘤部位无关。本研究中的临床病理分析表明，ki67高表达与胃癌的肿瘤细胞分化程度、临床分期呈显著性相关（P0.05）。结果显示p57kip2和ki67的表达呈负相关，表明在胃癌中，p57kip2有抑制细胞增殖作用，是细胞增殖负性调节因子，ki67是反映胃癌进展的一个重要指标,是细胞增殖的正性调节因子。【参考文献】 1Matsuoka S, Edwards MC ,Bai C ,et al. p57kip2 a str

11、ucturally distinct member of the p21cip1 CDK inhibitor family, is a candicate tumor suppressor gene J.Gene Dev ,1995（6）:650-662.2Reid L H,Crider miller SJ, West A ,et al .Genomic organization of the human p57kip2gene and its analysis in the G401 Wilms tumor assayJ.Cancer Res ,1996,（6）:1214-1218.3Kon

12、do M, Matsuoka S,Osada H , et al .Selective maternalallel loss in human lung cancer of the maternally expressed p57kip2 gene at 11p5.5J.Oncogene,1996（6）:1365-1368.4Noura S,Yamamoto H, Sekimoto M, et al .Expression of second class of p57kip2 in human colorectal carcinomaJ.int J Oncol,2001（1）:39-47.5S

13、ui L,Dong Y ,Ohno M,et al. Expression of p57kip2 and its clinical relevance in epithelial ovarial tumorsJ.Anticancer Res,2002（6A）:3191-31966Ito Y, Yoshida H ,Nakano K , et al. Expression of p57kip2 protein in normal and neoplastic thyrorid tissuesJ. Int J Mol Med ,2002（4）：373-376.7Nan KI, Guo H, Rua

14、n ZP, et al. Expression of p57kip2 and its relationship with clinicopathology PCNA and p53 in primary hepatocellular carcinomaJ.World J Gastroenterol,2005（8）：1237-1240.8Hoffmann MJ ,Florl AR ,Seifert HH, et al. Multiple mechanisms downregulate CDKNIC in human bladder cancerJ. Int J Cancer,2005（3）：406-413. 9Shin J Y, Kim HS ,Lee KS ,et al.Mutation and expression of the p27kip1 and p57kip2gene in human gastric cancerJ.Exp Mol Med ,2000（2）:78-83.10Ito Y, Takeda T ,Sakon M, et al.Expression of p57kip2