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1、专题专题5 DNA5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术课题课题2 2多聚酶链式反应扩增多聚酶链式反应扩增DNADNA片断片断OOPOHO碱基碱基OOHOOPOHOOH碱基碱基53355533.DNA.DNA分子是由分子是由 的（即一条的（即一条链为链为3355，另一条链为，另一条链为5533）脱氧）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。结构。. . 与与 交替连结，排列在外侧，交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；构成基本骨架； 排列在链的内侧。排列在链的内侧。. .两条链上的碱基通过两条链上的碱基通过 连结起来，形连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即成碱基对。

2、碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与腺嘌呤一定与 配对，配对， 一定一定同胞嘧啶配对。同胞嘧啶配对。.PCR(.PCR(多聚酶链式反应）多聚酶链式反应）不能从头合成不能从头合成DNADNA，只能从，只能从DNADNA的的33端开始延伸端开始延伸DNADNA链，因此，链，因此，DNADNA复制需要引物。复制需要引物。当引物与当引物与DNADNA母链通过碱基互补配对结合后，母链通过碱基互补配对结合后， DNADNA聚合酶就能从聚合酶就能从引物的引物的33端开始延伸端开始延伸DNADNA链链，DNADNA的的合成方向总是从合成方向总是从子链的子链的55端向端向33端端延伸。延伸。复制从复制从3

3、3，端开始延伸端开始延伸合成方向合成方向5 5，端向端向3 3，端端. .在在8080100100C C的温度范围内，的温度范围内，DNADNA的双螺旋的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为结构将解体，双链分开，这个过程称为变性变性。. .当温度缓慢降低后，当温度缓慢降低后，两条彼此分离的两条彼此分离的DNADNA链链又会重新结合成双链。又会重新结合成双链。（复性）（复性）.PCR.PCR利用了利用了DNADNA的热变性原理，通过控制温度的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCRPCR仪实仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。质上

4、也是一台能够自动调控温度的仪器。高温解决了打开双链的问题，但是，又导致高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNADNA聚合酶失活的问题，耐高温的聚合酶失活的问题，耐高温的Taq DNATaq DNA聚合酶解聚合酶解决了高温导致决了高温导致DNADNA聚合酶失活的问题，促成了聚合酶失活的问题，促成了PCRPCR技术的自动化。技术的自动化。缓冲液缓冲液（调节酸碱度维持调节酸碱度维持PHPH不变不变）、DNADNA模板模板，分别与两条模板链相结合的分别与两条模板链相结合的两种引物两种引物，四种脱四种脱氧核苷酸氧核苷酸，耐热的，耐热的DNADNA聚合酶聚合酶，同时通过，同时通过控制控制温度温度使使DNADNA复制在体外反复进行。复制在体外反复进行。ATTCCGTAAGG

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