第九章蛋白质和氨基酸的测定

1、凯氏定氮法凯氏定氮法杜马斯法杜马斯法福林酚法福林酚法染色法染色法6.25=6.25=6.38=5.952NH2(CH2) 2COOH+13H2SO4 (NH4) 2SO4+6CO2+12SO2+16H2O加硫酸钾加硫酸钾 作为增温剂，提高溶液沸点作为增温剂，提高溶液沸点加硫酸铜加硫酸铜 作为催化剂、消化终点指示剂作为催化剂、消化终点指示剂加氧化剂加氧化剂 加速有机物氧化速度加速有机物氧化速度NH4+ + OH-= NH3 +H2O用用4%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定 指示剂：混合指示剂（甲基红指示剂：混合指示剂（甲基红溴甲基酚绿）溴甲基酚绿） 指示剂指示剂 红色红色

2、 绿色绿色 红色红色 （酸）（酸） （碱）（碱） （酸）（酸） 吸收与滴定吸收与滴定反应式为：反应式为： NHNH3 3+H+H3 3BOBO3 3=NH=NH4 4+ +H+H2 2BOBO3 3- - H H2 2BOBO3 3- -+H+H+ +=H=H3 3BOBO3 3 用过量的用过量的 H2SO4 或或 HCl 标准溶液吸收，再标准溶液吸收，再用用 NaOH 标准溶液滴定过剩的酸液。标准溶液滴定过剩的酸液。量量NaOHNaOH少少NH2CONHCONH2 + NH3NH2CONH2 + NH2CONH2150160双缩脲双缩脲能和硫酸铜的碱性能和硫酸铜的碱性溶液生成溶液生成紫色络和

3、物紫色络和物。紫色络和物。紫色络和物。操作方法操作方法 1 1、制作标准曲线、制作标准曲线取取1010支干试管分成两组，按下表平行操作支干试管分成两组，按下表平行操作0 01 12 23 34 45 5标准蛋白液标准蛋白液/ml/ml 0.20.20.40.40.60.60.80.81.01.0蛋白浓度蛋白浓度/(mg/ml)/(mg/ml) 2.02.04.04.06.06.08.08.010.010.0蒸馏水蒸馏水/ml/ml1.01.00.80.80.60.60.40.40.20.20.00.0双缩脲试剂双缩脲试剂/ml/ml4.04.04.04.04.04.04.04.04.04.04

4、.04.0 A A540 取两组测定的取两组测定的A A540值的平均值，即值的平均值，即A A540540为纵坐标，蛋白质为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。浓度为横坐标，绘制标准曲线。2 2、样品测定、样品测定取取4 4支试管分成两组，按下表平行操作：支试管分成两组，按下表平行操作： 0 01 1样品稀释液样品稀释液/ml/ml 0.50.5蒸馏水蒸馏水/ml/ml1.01.00.50.5双缩脲试剂双缩脲试剂/ml/ml4.04.04.04.0A A540 %100(%)cNY固体样品蛋白质的含量(1)(1)在碱性条件下，蛋白质与铜离子作用生成蛋白质在碱性条件下，蛋白质与铜离子作用

5、生成蛋白质铜铜络合物。络合物。(2)(2)此络合物将试剂磷钼酸此络合物将试剂磷钼酸磷钨酸磷钨酸( (olinolin试剂试剂) )还原，还原，混合物深蓝色混合物深蓝色( (磷钼蓝和磷钨蓝混合物磷钼蓝和磷钨蓝混合物) ) 。凯式定氮法凯式定氮法双缩脲双缩脲杜马斯杜马斯福林福林- -酚酚原理原理装置装置溶剂溶剂时间时间灵敏度灵敏度干扰干扰总氮量总氮量蛋白氮蛋白氮总氮量总氮量蛋白氮蛋白氮凯式定氮装置凯式定氮装置分光光度计分光光度计高温装置、高温装置、GCGC分光光度计分光光度计浓硫酸浓硫酸用量较少用量较少不需要不需要福林福林- -酚试剂酚试剂长长简单快速简单快速3min3min简单快速简单快速较低较

6、低低低高高高高较小较小有干扰有干扰较小较小酸类及柠檬酸类及柠檬酸类酸类染色法染色法紫外紫外吸收法吸收法水杨酸比色法水杨酸比色法双指示剂：百里酚酞双指示剂：百里酚酞+中性红指示剂中性红指示剂茚三酮比色法茚三酮比色法非水溶液滴定法非水溶液滴定法非水溶液滴定法非水溶液滴定法12% 测某样品中铁元素的含量，称样测某样品中铁元素的含量，称样1.050g1.050g于坩埚中于坩埚中灰化，残渣用稀酸溶解后定容至灰化，残渣用稀酸溶解后定容至100mL100mL，吸取，吸取5mL5mL样液样液于于25mL25mL容量瓶中显色、定容、测定，从标准曲线中查容量瓶中显色、定容、测定，从标准曲线中查得样液中铁的含量为得

7、样液中铁的含量为4.2g/mL4.2g/mL，请问该样品中铁元，请问该样品中铁元素的含量为多少？素的含量为多少？ 0.2% 在测定某厂酱油氨基酸态氮含量时，酱油在测定某厂酱油氨基酸态氮含量时，酱油5mg5mg于于100mL100mL容量瓶中，加水定容，混匀后吸取此液容量瓶中，加水定容，混匀后吸取此液20mL20mL进行测定，用进行测定，用0.05N0.05N氢氧化钠滴定至氢氧化钠滴定至pHpH值为值为8.28.2时，消耗标准碱液时，消耗标准碱液7.0mL, 7.0mL, 加入加入10.0mL10.0mL甲醛溶液，混匀。用标准溶液继续滴定至甲醛溶液，混匀。用标准溶液继续滴定至pH9.2pH9.2时，消耗标准碱液时，消耗标准碱液10.12mL,10.12mL,同法作空白实验，滴定至同法作空白实验，滴定至pHpH值值为为8.28.2时，消耗标准碱液时，消耗标准碱液0.08m