专题动物细胞融合与单克隆抗体ppt课件

1、理解教材新知理解教材新知专专题题2 22.22.2把握热点考向把握热点考向应用创新演练应用创新演练知识点一知识点一知识点二知识点二考向一考向一考向二考向二2.2.22.2.2 1动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个 或多个动物细胞结合形成一个细胞的过或多个动物细胞结合形成一个细胞的过 程。程。 2动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二 醇醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。、灭活的病毒、电激等。 3动物细胞融合的主要用途是制备单克隆动物细胞融合的主要用途是制备单克隆 抗体。抗体。4杂交瘤细胞是由经免疫的杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞

2、和骨髓瘤细胞融合而成淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成 的，具有既能无限增殖又能产生特定抗体的能力。的，具有既能无限增殖又能产生特定抗体的能力。5单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并能大量单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并能大量 制备。制备。6单克隆抗体的主要用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病和单克隆抗体的主要用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病和 运载药物。运载药物。自读教材自读教材夯基础夯基础 1概念概念 或或 动物细胞结合形成动物细胞结合形成 的过程，也称细的过程，也称细胞杂交。胞杂交。两个两个多个多个一个细胞一个细胞2.返回学车问答 ask.jsyst 学车问题回答驾驶员

3、模拟考试2019 jsyst 科目一 科目二 科目三 科目四 3意义意义 (1)突破了突破了 的局限，使远缘杂交成为可能。的局限，使远缘杂交成为可能。 (2)为制备为制备 开辟了新途径。开辟了新途径。有性杂交有性杂交单克隆抗体单克隆抗体 1动物细胞融合与植物原生质体融合所用的诱导方法有动物细胞融合与植物原生质体融合所用的诱导方法有何不同？何不同？ 提示：动物细胞融合可用灭活的病毒进行诱导。提示：动物细胞融合可用灭活的病毒进行诱导。 2细胞融合技术与有性杂交相比有哪些优点？细胞融合技术与有性杂交相比有哪些优点？ 提示：有性杂交有着十分严格的时空关系和种族界限。动提示：有性杂交有着十分严格的时空关

4、系和种族界限。动物细胞融合则不同，它通过人工的方法克服了存在于物种之间物细胞融合则不同，它通过人工的方法克服了存在于物种之间的遗传屏障，从而能够按照人们的意愿，把不同物种的不同组的遗传屏障，从而能够按照人们的意愿，把不同物种的不同组织类型的细胞融合在一起。织类型的细胞融合在一起。跟随名师跟随名师解疑难解疑难 1细胞融合的过程分析细胞融合的过程分析 细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合，其中细胞膜融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现合，其中细胞膜融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的流动性。出细胞膜具有一定

5、的流动性。2动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞膜的流动性、细胞的全能细胞膜的流动性、细胞的全能性性细胞膜的流动性细胞膜的流动性过程过程细胞细胞A、B 去壁去壁原生质体原生质体A、B 融合融合融合的原生质体融合的原生质体 杂种细胞杂种细胞 植物组植物组,织培养织培养 杂种植株杂种植株细胞细胞A、B 融合融合杂交细胞杂交细胞 有丝分裂有丝分裂多个相同杂交细胞多个相同杂交细胞植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合相关酶相关酶纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原

6、蛋白酶融合方融合方法法物理法：离心、电激、振动；物理法：离心、电激、振动；化学法：聚乙二醇等试剂诱导化学法：聚乙二醇等试剂诱导除物理法和化学法外还除物理法和化学法外还可以用灭活的病毒诱导可以用灭活的病毒诱导结果结果杂种植株杂种植株杂交细胞杂交细胞意义意义克服了远缘杂交的不亲和性，克服了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株获得杂种植株突破了有性杂交方法的突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为局限，使远缘杂交成为可能可能特别提醒特别提醒(1)动物细胞核融合发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。动物细胞核融合发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。(2)灭活的病毒只适用于动物细胞融合。灭活的病毒只适用于动物细胞融合

7、。自读教材自读教材夯基础夯基础 1传统抗体的制备传统抗体的制备抗原抗原血清血清(2)缺陷：产量低、缺陷：产量低、 低、低、 差。差。纯度纯度特异性特异性2单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程(2)解决思路：将解决思路：将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为 。(3)制备过程：制备过程：杂交瘤细胞杂交瘤细胞(4)单克隆抗体的特点：单克隆抗体的特点： 强、强、 高，并可大量制备。高，并可大量制备。(5)单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：作为作为 ，具有准确、高效、简易、快速的优点。，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于用于 和和 。特异性特异性灵敏度灵敏度诊断试剂诊断试剂

8、治疗疾病治疗疾病运载药物运载药物 1为什么要对小鼠注射抗原？为什么要对小鼠注射抗原？ 提示：以获得能产生相应抗体的提示：以获得能产生相应抗体的B淋巴细胞淋巴细胞(浆细胞浆细胞)。 2根据单克隆抗体制备过程思考下列问题：根据单克隆抗体制备过程思考下列问题： (1)制备单克隆抗体时，为什么要选用制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？细胞融合形成杂交瘤细胞？ (2)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处理后，培养液中淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？存在哪几种细胞？ (3)选择杂交瘤细胞的两步筛选的目的各是什么？选择杂交瘤细胞

9、的两步筛选的目的各是什么？ 提示：提示：(1)每一个每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。不能无限增殖；骨髓瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。若将两种细胞融合在一起，既能产生一种特异性抗体又能快速若将两种细胞融合在一起，既能产生一种特异性抗体又能快速增殖。增殖。 (2)未融合的未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、BB融融合细胞、瘤瘤融合细胞、合细胞、瘤瘤融合细胞、B瘤融合细胞。瘤融合细胞。 (3)第一步筛选的目的是获得杂交瘤细胞；第二步筛选的第一步筛选的目的是获得

10、杂交瘤细胞；第二步筛选的目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。跟随名师跟随名师解疑难解疑难 1血清抗体与单克隆抗体的比较血清抗体与单克隆抗体的比较名称名称产生产生特点特点血清抗体血清抗体由由B淋巴细胞分泌淋巴细胞分泌一般从血清中分离，产量一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差低、纯度低、特异性差单克隆抗体单克隆抗体 由杂交瘤细胞分泌由杂交瘤细胞分泌特异性强、灵敏度高，能特异性强、灵敏度高，能大量制备大量制备 2制备单克隆抗体过程中两次筛选的目的不同制备单克隆抗体过程中两次筛选的目的不同 (1)第一次筛选是将未融合的第一次筛选是将未融合的B淋巴细

11、胞、骨髓瘤细胞以及淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出杂瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出杂交瘤细胞。交瘤细胞。 (2)第二次筛选是将产生特定抗体的第二次筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时会取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以淋巴细胞时会取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。 例例1下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较，描下列对

12、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较，描述正确的是述正确的是() A动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导融合的方法也完全相同诱导融合的方法也完全相同 B两者都可以跨越种属间的生殖隔离，突破有性杂交方两者都可以跨越种属间的生殖隔离，突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能法的局限，使远缘杂交成为可能 C利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为试管婴儿的诞生开辟了新途径试管婴儿的诞生开辟了新途径 D目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交，目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞

13、杂交，得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并使它们的性得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并使它们的性状全部得以体现状全部得以体现 思路点拨思路点拨 精讲精析精讲精析A项中动物细胞融合可用灭活的病毒诱导，而项中动物细胞融合可用灭活的病毒诱导，而植物原生质体是不能的；植物原生质体是不能的；C项中杂交瘤技术是细胞工程技术，项中杂交瘤技术是细胞工程技术，而试管婴儿则是胚胎工程内容；而试管婴儿则是胚胎工程内容；D项生物性状的体现是基因型项生物性状的体现是基因型与环境共同作用的结果，与环境共同作用的结果，“超级植物具有两个亲本的遗传物质，超级植物具有两个亲本的遗传物质，但性状不一定能全部表达

14、。但性状不一定能全部表达。 答案答案B 动、植物细胞融合技术的比较动、植物细胞融合技术的比较 动、植物细胞融合技术基本原理相同，都是细胞膜的流动动、植物细胞融合技术基本原理相同，都是细胞膜的流动性；诱导融合的方法基本类似。不同点是：植物细胞融合前性；诱导融合的方法基本类似。不同点是：植物细胞融合前需先去掉细胞壁；动物细胞融合除物理法、化学法外，还用需先去掉细胞壁；动物细胞融合除物理法、化学法外，还用到生物方法，即灭活病毒；培养基成分不同，动物细胞培养到生物方法，即灭活病毒；培养基成分不同，动物细胞培养是用液体培养基，其成分中有动物血清。另外还有培养目的和是用液体培养基，其成分中有动物血清。另外

15、还有培养目的和结果等方面的区别。结果等方面的区别。 例例2下图是制备分泌抗下图是制备分泌抗X(H1N1流感病毒流感病毒)抗体的过程，抗体的过程，根据图解回答问题：根据图解回答问题： (1)给小鼠注射抗原的目的是给小鼠注射抗原的目的是_。 (2)在单克隆抗体制备过程中之所以选用在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有_的特性。的特性。 (3)由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了_和和_的动物细胞工程技术手段。的动物细胞工程技术手段。 (4)动物细胞培养液的

16、配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是还含有盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是还含有_。 (5)在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞分散在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞分散开，以利于细胞融合，可用开，以利于细胞融合，可用_处理离体组织细胞使之分处理离体组织细胞使之分散。散。 (6)图中有两次筛选过程，其中步骤的目的是筛选出图中有两次筛选过程，其中步骤的目的是筛选出_，步骤的目的是筛选出步骤的目的是筛选出_。 (7)请根据以下信息，设计一方法请根据以下信息，设计一方法(不考虑机械方法不

17、考虑机械方法)，从培，从培养液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成养液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成DNA有有D和和S两条途两条途径，其中径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中尽管只的合成途径，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中尽管只有有D途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加入聚乙二醇促融，获得杂种细胞。加入聚乙二醇促融，获得杂种细胞。 方法：方法：_。 原理：原理：_ 。 思路点拨思路点拨 精讲精析精讲精析(1)根据抗原抗体特

18、异性结合的原理，用特定根据抗原抗体特异性结合的原理，用特定抗原刺激，小鼠体内便可产生能产生特定抗体的浆细胞，即可抗原刺激，小鼠体内便可产生能产生特定抗体的浆细胞，即可获得相应的获得相应的B淋巴细胞。淋巴细胞。 (2)杂交瘤细胞具有两种细胞的遗传物质，既能产生特定的杂交瘤细胞具有两种细胞的遗传物质，既能产生特定的抗体，又能无限增殖。抗体，又能无限增殖。 (3)从图中看出，单克隆抗体技术实际是应用了动物细胞融从图中看出，单克隆抗体技术实际是应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术。合和动物细胞培养技术。 (5)细胞融合时是单个细胞和单个细胞的融合，为将细细胞融合时是单个细胞和单个细胞的融合，为将细胞从动物组织中离散，可用胰蛋白酶处理。胞从动物组织中离散，可用胰蛋白酶处理。 (6)在单克隆抗体制备过程中，由于从小鼠体内提取的在单克隆抗体制备过程中，由于从小鼠体内提取的B淋巴细胞可能有多种，以及细胞融合方式有多种，从而产生淋巴细胞可能有多种，以及细胞融合方式有多种，从而产生多种融合细胞以及多种杂交瘤细胞，因此需多次筛选。从图多种融合细胞以及多种杂交瘤细胞，因此需多次筛选。从图中可看出，是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，是筛中可看出，是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，是筛选出能产生所需抗体的杂