改良硫黄素S染色老人斑

1、改良硫黄素S老年斑（淀粉质）染色目的： 用于鉴别 Alzheimers 病脑组织切片中的神经纤维、扣结和老年斑。PRINCIPLE:切厚度为30卩m石蜡切片或冰冻切片，不用贴片而使用漂染法。玻 片染色用于荧光检查领域。老年斑显示为成群异常肿胀的神经元突起或神经突，因而被称为“神经炎”。老人 斑的可能由中心淀粉体和周围放射状肿胀神经突构成。对照： 含有老人斑的脑组织固定液： 10% 甲醛技术：切片30卩m，不要贴片。设备： 有盖培养皿或小烧杯，弯头玻棒。试剂：0.25% 高猛酸钾：高猛酸钾 Potassium permanganate0.25 gm蒸馏水 Distilled water100.0

2、 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。漂白液：亚硫酸钾 Potassium metabisulfite1.0 gm草酸 Oxalic acid1.0gm蒸馏水 Distilled water100.0ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。封闭液 Blocking Solution:氢氧化钠 Sodium hydroxide1.0 gm过氧化氢 30% hydrogen peroxide3.0 ml蒸馏水 Distilled water100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。0.25% 醋酸洗液 Acetic Acid Rinse:醋酸 Acetic acid0.25 ml蒸馏水 D

3、istilled water100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。硫黄素S染色液：硫黄素 SThioflavine S0.0125 gm50%酒精 ethanol100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：毒性，易燃性。50.0 ml50.0 ml50% 酒精 Ethanol: 无水乙醇 Absolute ethanol 蒸馏水 Distilled water 警告：易燃性。 甘油凝胶： 详见备用液。安全： 穿戴手套、护目镜和白大衣。避免接触和吸入。 高猛酸钾：对眼睛和皮肤有刺激性，摄入可能引起严重胃肠道不适。强氧化剂。 草酸：可能引起眼睛、皮肤或口腔粘膜严重灼伤。侵入途径：吸入、摄

4、入。影响靶 器官为泌尿和心血管系统，反复接触能引起皮炎。腐蚀性。 过氧化氢：对皮肤有刺激性。 .氢氧化钠：对眼睛和皮肤有强烈刺激性和腐蚀性。能引起灼烧。 程序：1. 石蜡切片，通过二甲苯和酒精脱蜡至水。2. 切片放入0.25%高猛酸溶液中漂染 20 minutes 。3. 蒸馏水稍洗。4. 切片放入漂白液中漂洗 2 minutes 。5. 蒸馏水稍洗。6. 切片放入封闭液中漂染 20 minutes 。7. 蒸馏水稍洗。8. 切片放入 0.25%醋酸液中漂洗 5 seconds.9. 蒸馏水稍洗。10. 将切片裱于载玻片上凉干、玻片保持平放。11. 玻片用蒸馏水稍洗。12. 滴上硫黄素S染液染

5、3-5 minutes.13. 50% 酒精冲洗 2次。14. 蒸馏水冲洗 2次。15. 甘油凝胶封裱。结果： 老人斑和神经纤维扣结荧光 背景黑色参考文献：R.Guntern, C.Bouras, P.R.Hof And P.G.Vallett, An Improved Thioflavine S Method For Staining Neurofibrillary Tangles And Senile Plaques In Alzheimers Disease, 1992Powers, J.M., Making the Diagnosis of Alzheimers Disease, AS

6、C1P9/9C2APFall Meeting, Oct. 10-16, 1992程序卡：改良硫黄素S老年斑（淀粉质）染色对照： 含有老人斑的脑组织 固定液： 10% 甲醛 技术：切片30卩m，不要贴片。程序：1. 石蜡切片，通过二甲苯和酒精脱蜡至水。2. 切片放入 0.25% 高猛酸溶液中漂染 20 minutes3. 蒸馏水稍洗。4. 切片放入漂白液中漂洗 2 minutes 。5. 蒸馏水稍洗。6. 切片放入封闭液中漂染 20 minutes 。7. 蒸馏水稍洗。8. 切片放入 0.25% 醋酸液中漂洗 5 seconds.9. 蒸馏水稍洗。10. 将切片裱于载玻片上凉干、玻片保持平放。1

7、1. 玻片用蒸馏水稍洗。12. 滴上硫黄素 S 染液染 3-5 minutes.13. 50% 酒精冲洗 2 次。14. 蒸馏水冲洗 2 次。15. 甘油凝胶封裱。 结果： 老人斑和神经纤维扣结荧光，背景黑色0.25% 高猛酸钾：高猛酸钾 Potassium permanganate 0.25 gm 蒸馏水 Distilled water100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。 漂白液： 亚硫酸钾 Potassium metabisulfite1.0 gm草酸 Oxalic acid1.0gm蒸馏水 Distilled water100.0ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。封闭液 Blocking Solution:氢氧化钠 Sodium hydroxide1.0 gm过氧化氢 30% hydrogen peroxide3.0 ml蒸馏水 Distilled water100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。0.25% 醋酸洗液 Acetic Acid Rinse:醋酸 Acetic acid0.25 ml蒸馏水 Distilled water100.0 ml新鲜配制，用后丢弃。警告：腐蚀性。硫黄素S染色液：硫黄素 SThioflavine S0.0125 gm50