上海自然科学基金标书2

1、本资料由药智网整理，查看更多资料敬请登陆 （可用新浪微博登陆） 学科代码 I 0 I 3 | 0 | 3 上海市自然科学基金项目 课题申请书 （2003 版） 课题编号 _ 课题名称谷氨酸转运体差异表达与脑缺血后癫痫关系的实验研 起止年月 2003 年11月2006年11月 依托单位上海第二医科大学附属仁济医院 （盖章） 通讯地址 上海市山东中路145号 _ 联系电话 邮政编码 200001 课题责任人 _ 邱永明 _ 手 机 Email 帐户名 1海第二医科大学附属仁济医院 _ 帐 号 1001235909008905658 _ 本资料由药智网整理，查看更多资料敬请登陆 （可用新浪微博登陆）

2、 史芭曹论坛1 开户银行 022539 黄埔支行南分 2003年9月1日订 填写说明 一、 填写申请书前，申请者应阅读当年的上海市白然科学基金项目申 报通知。 二、 课题申请者应根据要求逐条认真编写，表达要明确、严谨。外来 语同时用原文和中文表达。 三、 本课题申请书编写 请使用A4纸双面印刷，请不要采用胶圈、文件 夹等带有突出棱边的装订方式，请采用普通纸质材料作为封面。 请用计算机打印填报，各栏空格不够时，请白行加页。 四、 本课题申请书填写后，按隶属关系审批上报市科委一式六份。 五、 本申请书经正式审定后，即作为合同的附件，附于合同的正副文 本之中。 六、 请在申请书封面上“学科代码”处填

3、写学科代码。例如：“金属 材料学科”则填写“ E0100。 七、 本提纲制订单位是上海市科学技术委员会。3 填写简表注意事项 1. 课题名称：要确切反映申请资助的研究工作内容（限 20字）。 2. 凡有多个口的选择性栏目，请将所选项前的口打且只能选择一项 3. 学科代码：填写本研究课题所届学科。 学科代码表 A数理科学 0100数学，0200力学,0300天文学，0400物理学1（凝聚态物 性；原子和分子物理；声、光学和其他），0500物理学II（基础 物理；核物理；粒子物理；等离子物理和其他 ） B化学科学 0100无机化学，0200有机化学，0300物理化学，0400高分子化 学，0500

4、分析化学，0600化学工程及工业化学，0700环境化学 C生命科学 0100创出生物学，0200农业科学，0300医学与药学 （0301预防 医学与卫生学，0302创出医学，0303临床医学基础研究，0304 药物学，0305中医药学,0306其他） D地球科学 0100地理学、土壤学和遥感，0020地质学，0300地球化学， 0400地球物理学和空间物理学，0500大气科学，0600海洋科学 E工程与材料 科学 0100金届材料学科，0200无机非金届材料学科，0300有机高分 子材料学科，0400冶金与矿业学科，0500机械工程学科，0600 工程热物理与能源利用学科,0700电工学科,0

5、800建筑环境与 结构工程学科，0900水利学科 F信息科学 0100电子学与信息系统，0200计算机科学，0300自动化科学， 0400半导体科学，0500光学和光电子学 G管理科学 0100管理科学与工程，0200 仆管理，0300宏观管理与政策 4 、简表 研 究 课 题 课题名称 大鼠脑缺血后癫痫发生机制的实验研究 研究类别 其它 起止年月 2003年11月至2006年10月 申请金额 5.0万元 其它经费来源 口无 经费预算 科研业务费 实验材料费 仪器设备费 组织实施费 其它费用 （万元） 2.0 2.2 0.3 0.3 0.2 课题 负责 人 姓名 邱永明 性别 男 出生年月 1

6、965年10月 职称 教授 学位 博士 专业 神经外科 所在 单位 名称 上海第二医科大学附属仁济医院 详细地址 上海巾山东中路145号 性质 其它 主管单位 上海市卫生局 主要 研究 内容 及意 义 （摘 要） 本课题米用先进的全脑缺血后声源性癫痫模型及已有的大鼠大脑中动脉 栓塞后癫痫模型，研究脑缺血后癫痫的发病机制，特别是谷氨酸-谷氨酸转 运体系统在痫性发作中的作用及时空变化规律。同时，应用反义技术降低谷 氨酸转运体的表达，应用 GDN锈导升局谷氨酸转运体的表达，进一步探讨 癫痫治疗的新途径,为临床最终攻克癫痫提供科学的理论依据和安全有效地 治疗方法，必将具有广阔的应用前景。该课题关丁癫痫

7、机制的在体研究研究 国内外尚届空白。 预期 研究 成果 （摘 要） （限80字） 、立论依据 本课题的研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处 5 癫痫与脑缺血关系密切，成为脑缺血的主要早期及晚期并发症之一(图 一)。最常见丁心脏骤停(cardic arrest )及中风患者。而颅脑外伤及蛛网膜 下腔出血所致的癫痫，脑缺血亦为其主要原因。临床调查显示，脑缺血后痫性发 作以早期发作多见，中风后24小时内发生率最高(43%)。实验研究发现， 大丁 50%的脑缺血患者有明显的痫性发作，而“无抽搐” (NCS)性发作较实际 估计更高。并且缺血后痫性发作参与脑缺血的病理过程，并可伴随缺血的全

8、过程 (PLEDs及IRDA),加重了缺血性损伤。形成脑缺血一痫性发作一脑缺血加重一 痫性发作加重-残障(癫痫)的恶性循环 。更有研究发现，脑缺血后最初一周 的痫性发作与神经功能恢复及晚发癫痫的发生率密切相关 (3)。实验研究发现，脑 缺血后癫痫的发作在半小时左右(4,5),且至缺血后2周的痫性发作仍为早发癫痫 (early onset)。而超过两周的痫性发作称为晚发癫痫(late onset) 。以谷氨 酸为主的兴:奋性氨基酸在缺血后癫痫的发生中起着关键的作用，是缺血后痫性发 作的“闸门”。大量研究显示，脑缺血再灌流后，大量的兴奋性氨基酸聚集在胞 外间隙，作用与突触后膜的离子型，代谢型及海仁

9、酸受体，引起内向的钠钙离子 流。膜电位去极化，痫性发作的阈值降低，诱发了痫性发作。同时，激发一系列 下游事件，造成神经元的坏死或者凋亡 。如何减轻兴奋性氨基酸的蠹性作用， 从而关闭缺血性损害的闸门，对丁降低缺血后痫性发作，减轻缺血损害，具有极 为重要的意义(88。 Takagi等研究证明脑缺血后兴奋性氨基酸立即迅速升局并丁 1小时内降至基 线水平，与缺血性的神经元损伤密切相关(9)。这种兴奋性氨基酸的峰状释放 (spike release) 与痫性活动的后发放(after discharge) 极不一致。Seki等在体 研究表明，谷氨酸转运体不仅活除胞外兴奋性氨基酸，而且还可以逆向转运将胞 内

10、的谷氨酸释放，导致胞外的谷氨酸升高，造成神经元的损伤 (10)o Phillis 等 还发现应用竞争性的转运体阻滞剂可使前脑缺血时谷氨酸释放降低至少 50% (11)。谷氨酸转运体的逆向转运及不同的时空变化导致的胞外兴奋性氨基酸的升 高在脑缺血后的继发病理改变中(如痫性发作，神经元的凋亡及坏死)的作用研 究甚少。Bonde C等在离体海马脑片中研究发现谷氨酸转运体的逆向转运的确加 重了氧葡萄糖剥夺(OGD诱导的神经元损伤(12)。在哺乳动物中枢神经系统 中，兴奋性神经递质L-谷氨酸的浓度必须保持在低水平以保证突触活动时的较 高的信噪比，并防止由丁谷氨酸受体的过度激活而造成神经元的损伤。此控制过

11、 程由高亲和力的钠离子依赖的分布丁神经元或者周围神经胶质细胞膜表面的谷氨 酸转运体来完成，即内源性的谷氨酸重吸收机制主要由谷氨酸转运体来承担，谷 氨酸转运体重吸收及逆向转运是唯一有效的调节突触间隙兴奋性氨基酸浓度的机 制(13)。谷氨酸转运体功能的变化直接影响着脑缺血性损害的后果及痫性发作的发 生。目前，已克隆动物(人类)的谷氨酸转运体有五种，分别为：(图二) GLAST(EAAT1),GLT1(EAAT2),EAAC1(EAAT3,refs8,9),EAAT4(refs9- 11),EAAT5(refs1-5)。免疫细胞化学研究发现前两种主要分布在胶质细胞上，而 后三种则主要定位丁神经元细胞

12、。EAAT削EAAT1的研究发现，这两种谷氨酸转 运体分布在突触外接近释放位点的突触周细胞膜上，这种分布有利丁快速结合谷 氨酸。并对突触后反应的幅度进行调节。 EAATA要分布在小脑。EAAC住要分 布在大锥体细胞及浦肯野氏细胞，而并未分布在谷氨酸能神经元细胞膜上。 EAAC住要分布在皮质海马及尾-壳核，并且作为突触前后的成分而存在。 GLT-1 则分布在全脑（主要分布在前脑）的星型细胞膜上。 GLASTfc要分布在贝格曼神 经胶质及小脑的分子层，同时也见丁皮质及海马和深部小脑核 网。谷氨酸转运体 的功能状态是决定缺血后神经元损伤程度及痫性发作等并发症的最重要因素。 由此我们推测，缺血后由丁谷

13、氨酸转运体的（ GLT-1及EAAC1的功能改变 6 （neuroprotective to neurodegenertive） 及逆向转运（reversal transport） , 从而导致谷氨酸在胞外间隙的再次大量聚集，是诱发脑缺血后痫性发作的主要作 用机制。 研究兴奋性氨基酸及其转运体在脑缺血及痫性发作时的变化规律，探讨其在 癫痫发生发展中的作用，必将为癫痫的机制研究及治疗开辟崭新的途径。谷氨酸 转运体是近年研究的热点，而对丁在缺血导致痫性发作中的具体机制研究甚少。 我们欲从兴奋性氨基酸及其转运体的变化及其相互调控的角度研究缺血后痫性发 作的具体机制。 本课题采用先进的全脑缺血后声源性

14、癫痫模型及已有的大鼠大脑中动脉栓塞 后模型，通过转基因技术及反义技术，研究脑缺血后癫痫的发病机制，特别是谷 氨酸-谷氨酸转运体系统在痫性发作中的作用。为临床最终攻克癫痫提供科学的 理论依据和安全有效地治疗方法，必将具有广阔的应用前景。此项研究国内外尚 届首次。 促生存机制如：热休克蛋白（HSP）, 抗炎症细胞因子，生长因子，抗氧化因 图一：脑缺血与癫痫损害与抗损害机制示意图7 GluttinvU ? Glia cell 尸、3L T 0MT1) 一 SLT-i (EMTZ) 注：Glutamine :谷氨酰胺 Glia cell :胶质细胞 Glutamate :谷氨酸 Matabotropi

15、c GluR :代谢型谷氨酸受体 VGLuT :囊泡谷氨酸转运体 (突触前)Ionotropic :离子型谷氨酸受体 Presynapse：突触前 EAAT1-5 :谷氨酸转运体 15 图二：兴奋性氨基酸及其转运体系统 (15) 参考文献： 1 1、 Silverman IE, Restrepo L, Mathews GC. Poststroke seizures. Arch Neurol. 2002 Feb;59(2):195-201. 2 2、 Anthony J. Williams , Frank C. Tortella. Neuroprotective effects of the s

16、odium channel blocker RS100642 and attenuation of ischemia-induced brain seizures in the rat. Brain Research 932 (2002) 45刷. 3 3、 Lamy C, Domigo V, Semah F, Arquizan C, Trystram D, Coste J, Mas JL; Patent Foramen Ovale and Atrial Septal Aneurysm Study Group. Early and late seizures after cryptogenic

17、 ischemic stroke in young adults. Neurology. 2003 Feb 11;60(3) :400-4. 4 4、 Lu XC, Williams AJ, Tortella FC. Quantitative electroencephalography spectral analysis and topographic mapping in a rat model of middle cerebral artery occlusion. Neuropathol Appl Neurobiol. 2001 Dec;27(6):481-95. 5 5、 R.G.

18、Geocadina, R. Ghodadrab, T. Kimurac, H. Leib, D.L. Shermanb,D.F. Hanleya, N.V. Thakor A novel quantitative EEG injury measure of global cerebral ischemia. Clinical Neurophysiology 111 (2000) 1779 1787. 6、 Afsar N, Kaya D, Aktan S, Sykut-Bingol C. Stroke and status epilepticus: stroke type, type of s

19、tatus epilepticus, and prognosis. Seizure. 2003 Jan;12(1):23-7. 7、 Rao VLR, Rao AM, Dogan A, Bowen KK, Hatcher J, Rothstein JD, Dempsey RJ (2000) Glial glutamate transporter GLT-1 down-regulation precedes delayed neuronal death in gerbil hippocampus following transient global cerebral ischemia. Neur

20、ochem Int 36:531-537 8、 White BC, Sullivan JM, DeGracia DJ, ONeil BJ, Neumar RW, Grossman LI, Rafols JA, Krause GS. Brain ischemia and reperfusion: molecular mechanisms of neuronal injury. J Neurol Sci. 2000 Oct 1;179(S 1-2):1-33. 9、 Lipton P (1999) Ischemic cell death in brain neurons. Physiol Rev

21、79:1431-1568. 10、 Seki Y, Feustel PJ, Keller RW, Tranmer BI, Kimelberg HK (1999) Inhibition of ischemia-induced glutamate release f GlutMine 00 n9urotrafwiie iefT Presynapss R taynftp 8 in rat striatum by dihydrokinate and an anion channel blocker. Stroke 30:433-440 11、 Phillis JW, Ren J, ORegan MH

22、(2000) Transporter reversal as a mechanism of glutamate release from the ischemic rat cerebral cortex: studies with DL-threo- P-benzyloxyaspartate. Brain Res 868:105 112. 12、 Bonde C, Sarup A, Schousboe A, Gegelashvili G, Noraberg J, Zimmer J. GDNF pre-treatment aggravates neuronal cell loss in oxyg

23、en-glucose deprived hippocampal slice cultures: a possible effect of glutamate transporter up-regulation. Neurochem Int. 2003 Sep-Oct;43(4-5):381-8. 13、 Danbolt NC. Glutamate uptake. Prog Neurobiol. 2001 Sep;65(1):1-105. 14、 Jackson M, Song W, Liu MY, Jin L, Dykes-Hoberg M, Lin CI, Bowers WJ, Federo

24、ff HJ, Sternweis PC, Rothstein JD. Modulation of the neuronal glutamate transporter EAAT4 by two interacting proteins. Nature. 2001 Mar 1;410(6824):89-93. 15、 Shigeri Y, Shimamoto K. Pharmacology of excitatory amino acid transporters (EAATs and VGLUTs). Nippon Yakurigaku Zasshi. 2003 Sep;122(3):253-

25、9 、研究方案 1. 课题研究的总目标和创新点，主要研究内容及所需要解决的技术难点(专 利技术二次开发课题要描述通过创新形成新的专利技术)。 目标及创新： (1) 通过研究脑缺血后兴奋性氨基酸转运体与癫痫发生的关系，探讨缺血 后癫痫的发病机理，是本课题的一个新思路。 (2) 在此基础之上，应用反义技术降低转运体的表达，应用 GDNIW导升高 谷氨酸转运体的表达(up regulation)(Bonde C , et al ,2003),结合 在体微透析技术(in vivo microdialysis ,) 进一步阐明癫痫发作的 机制，同时，提供了有效的治疗手段。对缺血后癫痫的转运体在体反 义阻

26、断及GDNIW导升高谷氨酸转运体的过表达研究，本实验尚届首 创。 (3) 首次在癫痫模型中完整比较了两种转运体在转运胞外兴奋性氨基酸的 作用及在痫性发作中的不同表达，进一步为痫性发作的机制及治疗提 供丰富的理论依据。 (4) 首次完整选用了致癫痫的缺血模型(包括全脑缺血及局灶性缺血)， 为全面认识及揭示脑缺血与癫痫的内在联系建立了了良好的操作平 台。 研究内容及技术难点： 内容： (1) 脑缺血致癫痫动物模型的制作。 (2) 痫性放电的记录，胞外谷氨酸浓度的检测，谷氨酸转运体表达及分布 的特点。相应突触后神经元胞内钠离子及钙离子浓度变化特点。反义 阻断及转运体过表达前行为学评分及神经功能评分。

27、梗塞面积的计 (3) 反义寡核苜酸(ODNS的设计及GDNF胶质源性神经生长因子)的脑 内立体定向注射。 (4) 反义阻断及转运体过表达后对谷氨酸浓度，谷氨酸转运体表达分布的 影响，痫性放电变化及癫痫发生率，梗塞面积，行为学变化，神经功 能评分的影响。 (5) 两种转运体在缺血后癫痫发生中的作用的比较。 关键I可题: 1、 全脑缺血后声源性癫痫动物模型的制作及短暂性大脑中动脉栓塞( MCAo 后的长时程脑电检测。 2、 反义寡核苜酸(ODNS的设计。 3、 在体立体定向微型真空泵侧脑室注射反义寡核苜酸及 GDNF(胶质源性神经 生长因子)的脑内立体定向注射。 应用全脑缺血及局灶性脑缺血后痫性发

28、作的动物模型相结合，通过反义技术 研究癫痫发病机制及治疗手段，本课题尚届首创。动物模型的稳定及分子生 物学技术的稳定至关重要。 2. 拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析 方法： (1) 建立脑缺血后癫痫的动物模型：包括胸部挤压伤后的声源性癫痫模型 (全脑缺血后癫痫模型)及大脑中动脉栓塞(MCAD致痫性活动的动物模型。 10 (2) 反义寡核苜酸立体定向侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发 作的变化的实验研究 根据已报道的大鼠的 GLT-1及EAAC的基因序列(Rothstein et al., 1996)设计合成反义寡核苜酸(antisense oligodeoxynucle

29、otides (ODNs) 。正 义及随机ODN乍为对照。正义ODN井列，反义序列及随机序列分别为 5-ATC AAC CGA GGG TGC CAA CAA TAT-3 (GLT-1 sense), 5-ATA TTG TTG GCA CCC TCG GTT GAT-3 (GLT-1 antisense), 5-AAT TGT GTT AGC CCC CTC TGT TGA- 3 (GLT-1 random), 5-GCT CGG GAT GCG ACT GGC-3 (EAAC1 sense), 5-GCC AGT CGC ATC CCG AGC-3 (EAAC1 antisense), a

30、nd 5-GCG GAT CCG TAC GCC CAG-3 (EAAC1 random).冻干的(ODN溶解在人造脑脊液中 。应用立体定位 仪，准确定位大鼠 侧脑室并预植微导管(参照 Paxinos and Watson (1998)大鼠 脑解剖图谱)，渗透性微量真空泵埋谿丁大鼠颈部皮下以注射反义寡核苜酸。 以 /hr的速率包速泵入侧脑室，平均每天注射 60ug。5天注射后，大鼠分为 全脑缺血组和局灶性脑缺血组及对照组。在体微透析技术及高效液相色谱检测海 马及前脑各区的谷氨酸浓度，收集透析液后，分离荧光检测。应用埋谿皮层( 10 导联)电极，长时程动态监测受试动物的脑电活动。并将其分为缺血前

31、及缺血后 1小时，2小时，6小时，24小时，48小时，72小时，直至2周。观察癫痫发生 率，行为学的变化，神经功能评分的变化。分析脑电功率谱的变化。 TTC染色检 测梗塞面积(计算)。应用 western blot及免疫细胞化学的方法检测上述模型 中海马及前脑谷氨酸转运体 GLT-1及EAAC1 勺表达及分布的影响。并研究此时， 相应突触后神经元钠通道电流幅度，开放概率及游离钙离子(共聚焦显微镜， Fura-2荧光显色)浓度变化特点。光镜及电镜观察注射前后的形态学变化。应用 TUNA%检测神经元的凋亡情况 (3) GDNF(胶质源性神经生长因子)的脑内多点立体定向注射增加转运体的 表达(up

32、regulation) 致缺血后痫性发作的变化的实验研究 GDNF(胶质源性神经生长因子)的脑内多点立体定向注射，一周后，大鼠分 为全脑缺血组及局灶性脑缺血组和对照组。在体微透析技术及高效液相色谱检测 海马及前脑各区的谷氨酸浓度，收集透析液后，分离荧光检测。应用埋谿皮层 (10导联)电极，长时程动态监测受试动物的脑电活动。并将其分为缺血前及缺 血后1小时，2小时，6小时，24小时，48小时，72小时，直至2周。观察癫痫 发生率，行为学的变化，神经功能评分的变化。分析脑电功率谱的变化。 TTC染 色检测梗塞面积(计算)。应用 western blot及免疫细胞化学的方法检测上述 模型中海马及前脑

33、酸转运体 GLT-1及EAAC1 勺表达及分布的影响。并研究此时， 相应突触后神经元钠通道电流幅度，开放概率及游离钙离子(共聚焦显微镜， Fura-2荧光显色)浓度变化特点。光镜及电镜观察注射前后的形态学变化。应用 TUNA%检测神经元的凋亡情况 (4) 对比两种谷氨酸转运体在转运及逆向转运胞外间隙兴奋性氨基酸的作用 （5）统计学处理采用多组方差分析。 万案： Long-Evans大鼠，随机分为2组：全脑缺血诱发声源性癫痫组及局灶性脑缺 血诱发痫性发作组。 11 每组乂分为：反义寡核苜酸侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作 的变化组，GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注射

34、增加转运体 的表达（up regulation） 致缺血后痫性发作的变化组及对照组。 在体微透析技术及高效液相色谱检测海马及前脑各区的谷氨酸浓度，收集透 析液后，分离荧光检测。应用埋谿皮层（10导联）电极，长时程动态监测受试动 物的脑电活动。并将其分为缺血前及缺血后 1小时，2小时，6小时，24小时， 48小时，72小时，直至2周。观察癫痫发生率，行为学的变化，神经功能评分 的变化。脑电功率谱的分析。TTC染色检测梗塞面积（计算）。应用 western blot及免疫细胞化学的方法检测上述模型中海马及前脑酸转运体 GLT-1及EAAC1 的表达及分布的影响。并研究此时，相应突触后神经元钠通道电

35、流幅度，开放概 率及游离钙离子（共聚焦显微镜，Fura-2荧光显色）浓度变化特点。光镜及电镜 观察注射前后的形态学变化。应用 TUNA法检测神经元的凋亡情况。两种谷氨酸 转运体GLT-1及EAAC作缺血后痫性发作中的作用比较 结果进行统计学分析。12 Long-Evans大鼠立体定 向预植注射导管及真空 微量泵的皮下埋置 全脑缺血致癫痫模型及局灶性脑缺血致痫性发作模型的制作 可行性分析:技术路线: TTC染色 体表达 western blot 表达及分布 度共聚焦显微镜检测 局部血流量的检测 分子生物学检测转运 脑电功率谱分析及 形态学检测电镜光镜 免疫组化检测转运体的 生化检测：谷氨酸浓 钠

36、钙离子浓度 13 3. 课题的年度计划及年度目标 2003.11-2004.3 购买试验材料等实验准备工作。 2004.4 2004.12 建立脑缺血后癫痫的动物模型：包括胸部挤压伤后的声源 性癫痫模型（全脑缺血后癫痫模型）及大脑中动脉栓塞（ MCAO致痫性活动 的动物模型。反义寡核苜酸侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作 的变化的实验研究。 2005.1 2005.12 GDNF（胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注射 增加转运体的表达（up regulation） 致缺血后痫性发作的变化的实验研 2006.1 2006.6 两种谷氨酸转运体 GLT-1及EAAC作缺血后痫性发作

37、中 的作用比较的实验研究。 2006.7 2006.10 实验成果全面总结，成果鉴定上报。 4. 预期研究成果、成果表达形式（能否申请并获得专利）及其考核指标 1） 完成动物模型的制作60只（Long-Evans大鼠）。 2） 明确反义寡核苜酸侧脑室注射降低转运体的表达致缺血后痫性发作的变化。 3） 明确GDNF胶质源性神经生长因子）的脑内多点立体定向注增 加转运体的表达致缺血后痫性发作的变化。 4） 两种谷氨酸转运体 GLT-1及EAAC作缺血后痫性发作中的作用比较。 5） 成研究论文4篇，其中，SCI收录1篇。 四、研究条件 14 1. 与本课题相关的现有工作积累和工作基础 与本项目有关的

38、研究工作积累和已取得的研究工作成绩 1） 本课题是在国家自然科学基金课题损伤性窒息导致多脏器损害的机制研究和卫生 部课题损伤性窒息导致脑损害的中西医治疗实验研究的基础上申报的。前一课题己完 成，通过了专家小组的鉴定 ，获得国内领先，有独创性的评价。后一课题正在总结结果 中。全脑缺血的系列研究，使得我们对它有比较系统、深入的理解。 2） 作者一直追踪全脑缺血发生机制及治疗作用的最新研究进展。已掌握离体海马脑片制 作技术获得了高质量的细胞外、内电记录以及脑缺血研究中多种分子生物学技术。作者于 1996 1997年在美国进修期间，参加了哈佛医学院 Massechusete General Hospi

39、tal 神经生理 学实验室进行的脑神经元保护的体内实验研究，该课题用 Mg2+等化学物组成的“ cocktail ”作 为治疗脑缺血的介质，发现其有重要的神经元保护作用。回国后申请并获批准了 1998年卫生 部课题迷走神经刺激治疗大鼠全脑缺血性癫痫的实验研究 2. 已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径 工作条件 已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径（包括利用国家重点实验室和部门 开放实验室的计划和落实情况） 我校有较强的生化和分子生物实验室。本课题前期研究所需仪器设备和试剂药品较为常 用，后期机制研究所需的试剂、免疫组化试剂盒均可购买，实验所需的方法已经掌握并有专 职人

40、员协助。 已有的主要条件、仪器设备 我科为全国神经外科学“博士点之一，具有专门的神经外科研究室，已有的主要条件和 仪器设备：无菌操作室，超净工作台低温超速离心机， CO2孵育箱、Olympus显微摄像装 置，温控超速离心机（Heraeus ）,超低温冰箱（Sanyo）、流式细胞仪，电泳仪 （MODEL25JO、PCRF 增仪。 1. 神经外科解剖实验室 2. 多功能立体定向仪 3. 透射电镜 4. 电泳装置 5. 流式细胞仪 6. 超速离心机 7. 图像自动分析处理系统 8. 丹麦产多导生理监护仪 所缺少的实验条件可由中科院神经所合作提供。15 五、申请者研究经历及目前承担其他研究课题资助情况

41、 1. 主要研究工作经历及成果、近年来发表的主要论文、著作 申请人简历 邱永明，神经外科学副教授。 1987年毕业于福建医科大学， 1990年获上海第二医 科大学神经病学硕士学位。现为上海第二医科大学附属仁济医院神经外科副主任医师， 副教授，上海第二医科大学神经外科研究室副主任。硕士研究生导师，一直从事神经外 科临床和科研工作。1995年获上海市医学会颁发的“施思明奖”， 1999年获上海第二 医科大学优秀教师。2001年获上海市科技进步三等奖。 1996 - 1997年作为访问学者在 美国 Tufts 大学 New England Medical Center 和 Harvard 大学医学院

42、 Massechusete General Hospital 神经生理实验室从事脑缺血实验研究，研究题目：Marked neuroprotection following focal cerebral ischemia in the rat by blocking neuronal function ”。1999年参加德国 University of Mainz 的神经内窥镜培训班。 1997年完成国家自然科学基金项目“损伤性窒息导致的多脏器损伤的机制研究”并通过 鉴定，得到 “国内领先，有独创性”的评价，获上海市卫生局科技进步二等奖。 就读硕士研究生时导师：周孝达教授、罗其中教授。学位论文：胸部压迫