PCR室SOP文件

1、XX医院分子生物学 室SOP及相关文件目录表第1页，共2页文件编号文件名称页码Lab-OP-PCR001实验室的设置及管理3Lab-OP-PCR002实验室人员配置及管理4Lab-OP-PCR003核酸荧光定品室内质量控制程序6Lab-OP-PCR004PCR实验室管理制度8Lab-OP-PCR005生物安全防范措施9Lab-OP-PCR006临床基因扩增实验的质量控制程序10Lab-OP-PCR007实验室清洁及废弃物处理程序13Lab-OP-PCR008试剂的质检操作程序14Lab-OP-PCR009实验耗材的质检、验收和储存操作程序16Lab-OP-PCR010PCR室样本检测保密制度1

2、8Lab-OP-PCR011常见抱怨处理程序19Lab-OP-PCR012事故应急处理程序21Lab-OP-PCR013TGL-16C台式离心机标准操作程序23Lab-OP-PCR014Line-Gene扩增仪标准操作程序25Lab-OP-PCR015移液器标准操作程29Lab-OP-PCR016BSC-1100A 2生物安全柜标准操作程序33Lab-OP-PCR017紫外线杀菌车标准操作及维护保养程序25Lab-OP-PCR018恒温金属浴标准操作程序36XX医院分子生物学室SOP及相关文件目录表第2页，共2页文件编号文件名称页码Lab-OP-PCR019旋涡混合器使用与维护标准操作程序38

3、Lab-OP-PCR020HBV-DNA 血清采集运送、保存标准操作程序39Lab-OP-PCR021性病标本采集、运送和保存标准操作程序40Lab-OP-PCR022结核标本采集、运送和保存标准操作程序42Lab-OP-PCR023标本的验收和保存标准操作程序44Lab-OP-PCR024HBV-DNA检测标准操作程序（荧光法）46Lab-OP-PCR025TB-DNA检测标准操作程序（荧光法）50Lab-OP-PCR026CT-DNA测定标准操作程序（荧光法）54Lab-OP-PCR027人员培训计划及培训记录表57Lab-OP-PCR028系列附表58XX医院分子生物学室实验室的设置及管

4、理文件编号：Lab-OP-PCR001第1页，共1页生效日期：XX年XX月XX日31 .目的：实验室的合理设置和科学管理是防止实验污染、保证检测结果可靠性的重要内容，特制订本程序。2 .该程序的改动程序：本程序的改动，可由任一使用本程序的工作人员提出， 全组成员 讨论，并报经科主任批准后生效。3 .适用范围：本程序适用于分子生物学实验室的设置、 功能分区、工作流程和日常管理 等。4 .程序：1.1 .1临床基因扩增实验室是检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及 相关实验工作。1.2 本实验室采用实时荧光PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为试剂贮 存准备区、核酸制备区、

5、扩增和结果分析区共三个区，实验室布局见基因扩增实验 室设置平面图。1.3 各工作区有专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，并有明确 标识，不可混用。1.4 各工作区配置、功能和内务管理见各区工作制度和SOP。1.5 严格遵守从“试剂贮存和准备区一核酸制备区一扩增和产物检测区”的单一流向制度，不得逆入前一工作区。1.6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科人员需在本室进行相 关实验，须在本实验室人员指导下进行。1.7 实验完毕做好清洁消毒工作。编写:审核批准:7批准日期:XX医院分子生物学室实验室人员配置及管理文件编号：Lab-OP-PCR002第1页，共2

6、页生效日期：XX年XX月XX日1 .目的：为保证实验室有足够数量的称职的工作人员并能完相应的工作职责，特制订本程序。2 .该程序的改动程序：本程序的改动，可由任一使用本程序的工作人员提出，全组成员讨论，并报经科主任批准生效后实施。3 .适用范围：本程序适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。4 .程序：4.1 人员要求：4.1.1 鉴于PCR技术要求的特殊性、复杂性，本实验室工人员应为医学检验专业或相关 专业毕业。4.1.2 实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办的PCR技术上岗培训，并取得合格证。4.1.3 对于新进入本室的人员，如尚未取得 PCR技术培训合格证，应在实验室负责人或 有培

7、训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并应在最短的时间内取得上岗培训合格证。4.2 人员配置：4.2.1 实验室应根据工作需要配备足够的工作人员，目前实验室有实验室工作人员3人,负责人1人、获得培训合格证者2人。视工作量可适当增加工作人员。4.2.2 各级技术人员履行相应的工作职责。4.3 人员培训及考核：4.3.1 实验室负责人（或委托人）参加每年卫生部 PCR室间质评总结会。4.3.2 实验室工作人员每12年参加相关学术交流会议。4.3.3 安排未取得上岗培训合格证的工作人员在最短的时间内参加技术培训。4.3.4 实验室工作人员每年应提交经验总结，作为年度业

8、务考核的依据之一。编写：审核批准：批准日期:实验室人员配置及管理文件编号：LabOPPCR002第2页，共2页4.4人员管理：4.4.1 实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：学历、任职资格、发表论文、研究成 果、培训等相关材料复印件。4.4.2 技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1次，电子档案随时更新。5.引用的文件及表格5.1 组织结构图。5.2 实验室工作人员一览表。5.3 人员培训计划及记录表。编写：审核批准：批准日期：XX医院分子生物学室核酸荧光定量室内质量控制程序文件编号：LabOPPCR003第1页，共2页生效日期：XX年XX月XX日一、控制实验的重复性、精密度，并

9、检测其准确度的改变，提高本室常规工作 中的批间、批内标本检测的一致性。二、范围：基因扩增项目的质量控制。三、程序：1.乙型肝炎病毒DNA荧光定量检测：(!).阳性质控样本与待测标本一起进行核酸的提取， 并与待测标本一起扩增。 其中阳性质控包括不同含量的质控样本，阴性质控包括阴性血清样本和灭菌水 做的试剂空白管。(! !).四个阳性参控品的Ct值都应小于28.0。将阳性参控品的拷贝浓度输入， 仪器将自动以阳性参数品拷贝浓度的对数值为纵坐标，以其实际测得的Ct值为横坐标给除标准曲线，标准曲线的相关系数应小于等于-0.996,否则视为定量结 果无效。两个阴性质控的 Q值应40;强阳性质控的Ct值应W

10、 20.0,弱阳性质 控的Ct值应W 28.0,低拷贝质控的Ct值应高于高拷贝的Ct值。否则实验无效。(!).采用质控图。以连续20次质控物的浓度对数为纵坐标，并计算其平 均值X和标准差S,定出控制线，一般以X±2S为警告线，以X±3S为失控线 做出质控框架，以后从第21次质控开始，依次标记在质控图上，分析质控图上 每天的检测结果的分布，判断当天检测结果是否在控制线内。(!)失控后纠正措施：停止实验，寻找失控原因，当日报告不能发出， 失控后的处理措施如下：1)、阳性对照出现阴性结果，或质控值低于 X-3SD, 编写：审核批准：批准日期:XX医院核酸荧光定量文件编号：LabO

11、PPCR003分子生物学室室内质量控制程序生效日期：XX年XX月XX日#第2页，共2页文件编号：Lab-OP-PCR006分子生物学室13应考虑为假阴性或检测灵敏度下降，具体原因纠正措施如下：质控样本结果偏低，标准曲线正常，可能因提取效率偏低超成。纠正措施： a检查试剂是否过期，提取试剂是否存在问题。b.校正离心机的转速。c.校正核 酸提取温度。质量样本结果偏低，标准参比品的 Ct值也偏低，可能为扩增效率减低引起。 纠正措施：a.检查试剂是否过期。b.Taq酶是否失效，如果失效则应更换。c.更 换新的实际或新批号的试剂。d.扩增仪的状态与功能校正。不明原因。纠正措施；暂时尝试用“三证”齐全的其

12、他厂家试剂。如果以水做的空白试剂为阴性，阴性参控品的结果为阳性或阳性质控品结果 偏高，则提示实验过程交叉污染。纠正措施： a.实验过程钟是否及时更换手套。 b.检查实验过程中有无发生污染的可能，如离心管破裂等.阴性质控均为阳性提示实验材料或环境局部的污染.纠正措施a对金属浴、离 心机等使用仪器进行清洁消毒维护。b.检查实验耗材的洁净度，必要时从新消毒 或更换。c.长时间紫外线照射。编写:审核批准：批准日期:XX医院分子生物学室PCR实验室管理制度第1页，共1页生效日期：XX年XX月XX日基因扩增实验室除了有设备条件，环境条件，更应该有严格的管理制度。任何一个PCR工作人员必须严格遵守。1、非本

13、室的工作人员未经允许不得进入，以免造成不应有的污染，同意进 入者必须穿专用工作服和鞋，不得将各区特定的工作服带出。2、每天了解仪器的运转情况及试剂使用情况，负责仪器的整洁、安全。3、合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序。4、PCR室工作人员必须严格遵守单一流向， 进入不同的操作区必须更换工 作服、鞋、手套等。5、实验室工作人员必须严格按照 PCR实验操作规程进行实验。6、实验室不准饮食，吸烟及喧闹。7、实验结束应用消毒液清洁工作台、地面、并用紫外灯消毒，不同实验区域应用各自的清洁用具以防交叉污染。8、下班前处理好废弃物品，检查空调及仪器的电源是否关闭。关好水和门窗。9、实验失败必须全组讨论

14、查找原因，提出补救措施，并作好记录。10、非本室人员的科研课题，必须科主任及室负责人同意，协商好相关问题, 以免造成后患。11、PCR室的工作人员必须认真做好室内、室间质评工作。12、PCR室及非本室的工作人员使用过的相关仪器，必须做好使用记录， 若出现问题，需报室负责人，并及时处理，记录处理意见。编写：审核批准：批准日期：文件编号：Lab-OP-PCR 005XX医院生物安全防范措施第1页，共1页分子生物学至生效日期：XX年XX月XX日1 .目的：预防工作人员在实验过程中被感染。2 .该程序的改动程序：本程序的改动，可由任一使用本程序的工作人员提出， 全组成员讨论，并报经科主任批准生效后实施

15、。3 .范围：适用于本室工作人员。4 .程序：4.1 工作人员在实验过程中应严格遵守相应的操作规程。4.2 所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源，因此在标本的采集、 运输过程中，标本容器应完好无泄漏。4.3 处理标本时应穿工作服、戴手套、口罩、帽子，以免沾上皮肤。如手或 其它部位的皮肤沾上血液或体液标本以及试剂，应立即冲洗干净。4.4 在实验过程中，病人标本（血液、体液）或试剂不慎溅入眼内应立即用 清水冲洗。4.5 实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时， 应立即脱下手套，尽量挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒， 必要时进行预防补救措施。4.6 在实验过程中

16、病人标本（血液、体液）外漏时，应立即用沾有84消毒液或其它消毒液的纱布覆盖30min消毒，然后用清水或75 %酒精擦净。4.7 临床检测标本申请单，放入检验单消毒机，消毒后存档保存。4.8 每区实验完毕后进行消毒清洁卫生。编写：审核：批准:批准日期: 室内质量控制（Internal Quality Control,IQC ）:XX医院临床基因扩增实验的质量控制程序第1页，共3页生效日期：XX年XX月XX日由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可 靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本实验室在常规工作 中室内、室间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可

17、否发出报告的 一项工作。工作中常用X图法：选择室间差小、稳定性良好的未定值质量控制血清，按最佳条件（本室所能达到的最理想、最稳定的条件）对该批号血清反复测定至少20份，计算20个结果的均值X,标准差S和变异系数CV,此时的CV即为OCV。取 测过OCV或准备用于下一阶段室内常规质量控制的血清，每天随病人标本 测定一瓶，20天后，计算各项目的测定结果的 X、S和CV,此时的CV即为 RCV。OCV或RCV的计算公式如下：_ 2X x= n其中X为OCV测定所得20份结果或RCV测定所得20天结果的均值。2 为总和：n为结果的分数（或天数）。编写：审核批准：批准日期:XX医院分子生物学室临床基因扩

18、增实验的质量控制程序文件编号:"""Lab OPPCR006第2页，共3页生效日期：XX年XX月XX日其中各符号所代表的含义与 X计算公式相同，n-1为自由度。OCV和RCV图的绘制：1、两者作图十分相似，当使用全国统一印发质控图纸时，基本步骤如下：在纵坐标上标出X、X+2S、X-2S、X+3S、X-3S的标志，并将具体数值 标在左侧的标尺上。2、用红笔画出 Xi2s线，用蓝笔画出X 一±3s线，即成为一张OCV或RCV 的“空图”。还应填齐图纸上方的各项和测定所得 X> S和CV。3、在图纸下方“日期”、“测定值”、“操作者”栏内按原始记录填入。

19、4、相应内容，边填写边核对。5、画出每个检测值所对应的点，横坐标为日期或序号，纵坐标为该点对应 的检测值，减去靶值（X值）后除以图中每个小格所代表的检测数值。各点画在 图上后，用直线将名点顺序连续，以便观察。误差分析1、曲线漂移：提示存在系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下的改 变，应重点注意“漂移”现象的前后发生了哪些变动的因素。1、趋势变化：表明检测的准确度发生了渐渐的变化，常常是因为一个逐渐 改变着的因素造成的。3、连续多点分布在靶值的一侧：若连续 6天以上出现在靶值同一侧，应考 虑可能存在非随机误差因素，积极查找原因。编写：审核批准：批准日期:XX医院分子生物学室临床基因扩增实验的

20、质量控制程序文件编号:Lab OPPCR006第3页，共3页生效日期：XX年XX月XX日4、其它规律性变化：有周期性或隔天规律性变化等两种，均应努力寻找原 因，使得非随机误差因素得到迅速纠正。失控后的处理：1、分析原始数据和初步估计失控原因。2、对具体检测过程进行回顾性分析。3、通过选择性复查进一步分析判断失控原因和决定处理方法。室间质量评价：为客观比较实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的 办法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之 间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用 来决定在实时的测定结果的可接受性。编写：审核批准

21、:批准日期:15文件编号:_Lab OPPCR 008XX医院实验室清洁及废第1页，共1页分子生物学室弃物处理程序生效日期：XX年XX月XX日1、在周一到周五试验期间，窗户须关闭，开排气扇，以防外界尘土等侵入 影响试验，每天实验开始前先做清洁，包括工作台面、仪器及地面、门窗、坐 椅等，不同的工作区用不同的拖布、擦布、消毒盆等。2、每次试验完毕，用消毒液或75%的乙醇擦拭镣子、加样器、离心机、 桌面、并用可移动紫外灯照1-2h。3、试验中所用过的枪头、离心、标本等弃入盛有10%的次氯酸钠溶液的消毒缸内，下班前倒入专用消毒桶，交给清洁员进行特殊处理。4、3天进行一次紫外线大消毒（24hr照射）。5

22、、周六打开窗户换气。周一大扫除，并同时紫外消毒1hr。编写：审核：批准：批准日期:XX医院试剂的质检操作程序第1页，共2页分子生物学室生效日期：XX年XX月XX日1、目的:保证每批用于临床实验的试剂的质量。2、该SOP变动程序本文件的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报经室技术负责人，由季度组长会议决定。如通过则公布实行。3、适用范围:各种用于临床实验的荧光定量 PCR试剂（现仅包括HBV、HCV、 TB、CT试剂盒）。4、质检步骤：收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。核对试剂品种和数量。检查试剂批号。及时将试剂转入-20 c冰箱保存。将上述检测核对情况在记录本上登记。最迟在前批次试剂

23、存量尚可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号 试剂进行效验实验。效验实验要求设置如下：空白对照、阴性对照、阳性对照各一，阳性标准品梯度（102、103、104、105）。出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：空白对照出现扩增。如扩增曲线 CT值大于35,需重复实验确证试剂污染。阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。编写：审核：批准：批准日期：17XX医院分子生物学室试剂的质检操作程序文件编号：LabOPPCR008第2页，共2页生效日期：XX年XX月XX日#阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样

24、品提取液可能存在问题。重 复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方 可使用。空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污 染可能。单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试 剂。阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性 CT值偏大5个 循环以上。提示阳性标准品存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可投入使 用。(10)空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导出的标 准曲线之斜率(2.63.4)、截距(2634)、相关性(<0.98)均在使 用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。(11)将实

25、验结果归入记录。编写：审核：18 批准:批准日期:文件编号:_Lab OPPCR009XX医院实验耗材的质检、验收和第1页，共2页分子生物学室储存操作程序生效日期：XX年XX月XX日1、 目的：保证耗材的使用质量不会影响检测工作的正常进行。2、 适用范围：临床基因扩增实验室常用耗材：1.5ml离心管、0.5ml离心管、带滤芯的吸头。三、质检方法1、检测1.5ml离心管2.1、 目测:检查离心管有无畸形、破损、闭盖不能的情况。2.2、 实验检测:每批随即抽样离心管50个用于实验检测。将抽取的50个离心管插在浮板上置于沸水浴锅中 20分钟后取出，如发 现有爆开情况发生，即认为该批离心管不符合本实验

26、室实验要求，作退货处理。再将这50个离心管加半量生理盐水后，1万转/分离心20分钟，如发现 有管盖爆开或漏液情况发生，即认为该批离心管不符合本实验室实验要求，作 退货处理。经上述检测未发现不合格情况后，即启用该批耗材。2、检测0.5ml离心管（方法、步骤同上）。3、检测带滤芯的吸头3.1、 目测:检查吸头有无畸形、破损。3.2、 实验检测：每批随即抽样吸头50个用于实验检测。编写：审核：批准：批准日期：#XX医院分子生物学室实验耗材的质检、验收和储存操作程序文件编号：Lab-OP-PCR009第2页，共2页生效日期：XX年XX月XX日29用适配加样器配合吸取适量液体，看有无吸孔堵塞、漏气现象发

27、生，如 有发现，即认为该批吸头不符合本实验室实验要求，作退货处理。经上述检测未发现不合格情况后，即启用该批耗材。四、消耗品贮存一次性消耗品及相关材料，根据医院规定，临床、医技科室所需消耗品，由 需用科室，根据不同的器材，分别向医院总务处或设备处申请，同意后，购回 进入医院的库房，再由科室分管财产同志领回科室小库房最后由所需实验室领 用。编写：审核：批准：批准日期:XX医院PCR实验室样本检测文件编号:Lab-OP-PCR 010第1页，共1页分子生物学室保密制度生效日期：XX年XX月XX日1 .目的:保护病人隐私2 .实验室由专人负责妥善保存各种实验记录，不得擅自修改和销 毁；严格遵守保密制度

28、.3 .未经主任本人书面通知不得向任何与实验室无关人员提供任 何情况；维护,患者隐私权.4 .工作人员严禁戴着有色眼镜看病人.5 .禁止故意大声说话泄露病人隐私.6 .严禁公开病人病情、病史、病因及检查结果等资料.编写:审核:批准:批准日期:XX医院分子生物学室常见抱怨处理程序文件编号：LabOPPCR011第1页，共2页生效日期：XX年XX月XX日基因扩增实验室常见的抱怨主要来自病人和医生两方面。病人的抱怨又包括 对服务态度的抱怨和对结果的抱怨。医生常抱怨的则是检测结果和临床诊断的 符合率和结果发放的时效性。针对这两类抱怨，我们制定了以下处理方案来解 决此种矛盾：1 .病人对服务态度抱怨的处

29、理方式接到抱怨后，由室负责人责成相关人员向病人致歉。对病人提出的合理要求及时进行处理。调查事情原委，根据调查结果对相关责任人进行处罚。记录抱怨及其处理结果。2 .病人对结果准确性抱怨的处理方式为病人展示原始实验数据。向病人解释相关实验程序和可能临床情况，帮助病人解除疑虑。如确有实验结果不符合有效性要求或出现错误，则应及时纠正错误，重 新实验以得到准确结果。同时由室负责人向病人致歉以争取得到其谅解，按有 关条例对责任人进行相应处罚，并记录。3 .医生对检测结果和临床诊断的符合率抱怨的处理方式针对医生抱怨的检查项目进行从实验前到实验后的全程调查，查找是否 存在影响结果的因素，并形成书面报告。编写：

30、审核：批准：批准日期：XX医院分子生物学室常见抱怨处理程序文件编号：LabOP PCR 011第2页，共2页生效日期：XX年XX月XX日就调查发现的问题进行针对性解决。与医生建立定期交流机制，定期了解临床使用情况和对临床作出解释。4 .医生对结果发放时效性抱怨的解决方式严格按承诺时间发放临床报告。在与医生交流会上就报告发放过程及时间作出解释，获取临床对结果报 告时效性的理解。XX医院分子生物学室故障应急处理程文件用：Lab-OP-PCR 012第1页，共2页生效日期：XX年XX月XX日1 .目的：在实际运作中，仪器设备发生故障、试剂盒发生质量问题和操作中出现 的特发事件（检测标本的打翻、离心管

31、的爆破）是不可避免的，为避免因此可 能造成临床检测报告不能及时发出，特制定本程序。2 .适用范围：影响检测报告发出的仪器设备、试剂和操作过程中特发事件。3 .职责：3.1 每一个工作人员在职责范围内均有责任有意识地注意以求及时发现并报告仪 器设备和试剂盒的异常情况。3.2 作为应急处理，潜在着一定的可能影响检测质量的不确定因素。科主任有责任 组织并直接监督本程序的实施。3.3 本程序的改动，可由任一使用本 SOP的工作人员提出，全组成员讨论，并报 经科主任批准生效后实施。4 .工作程序：4.1 科主任接到到仪器设备故障的报警后，立即现场确认异常情况的性质：观察有 无错误操作、偶发现象或确属不能

32、立即排除的故障。4.2 仪器设备故障属科主任不能解决的情况，应及时通知院设备维修人员或供应商, 具体程序见仪器设备管理程序。对于发生故障的仪器设备，在联系有关部门及 时维修的同时，采取以下处理办法。4.2.1 有满足要求的替用设备的，启用替用设备。编写：审核：批准：批准日期:XX医院分子生物学室故障应急处理程文件编号：Lab-OP-PCR 012第2页，共2页生效日期：XX年XX月XX日4.2.2 替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。4.3 试剂盒质量发生问题，经科主任核实后，及时通知供货商迅速更换另一试剂批 号的试剂。4.4 检测

33、标本的打翻、离心管的爆破，首先对污染处用84消毒液擦拭，再用浸泡84消毒液沙布覆盖污染处15分钟，后用75%酒精擦拭，等实验结束后紫外灯 消毒过夜，并做好相关的详细记录。4.5 如仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将影响到检测报告的及时 发出，可将标本送至其它实验室检查（该实验室应为获准进行PCR检测的）；如已影响到报告的及时发出，应在检验科问询取报告处向病人公告或向相关病 区公告，取得病人和医生的谅解。5 .影响到检测报告发出的情况，应在应急处理登记表作记录。处理困难时按抱怨 处理程序进行。6 .引用的文件及表格6.1 应急处理登记表6.2 抱怨处理程序编写：审核：批准：批准日期：

34、XX医院分子生物学室TG L-16C台式离心机标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 013第1页，共2页生效日期：XX年XX月XX日1、 目的：高速离心。2、 适用范围：最大容量60ml, 速度：016000转/分三、操作步骤1、检查电源是否连接。2、打开盖子，将标本对称平衡放置好后，关闭离心机盖子打开电源开关。3、按标本离心要求选择时间（转速/分），缓慢转动转速按钮达指定转速。4、在运行中，若要终止运行，应先缓慢转动转速按钮归 “0”，再转动时间归“0”, 关闭电源开关。5、若运行结束，时间按钮将自动归“ 0”，这时仍然应将转速按钮归“ 0”。6、关闭电源。待离心转子完全停止后，取出样

35、本。四、维护和保养仪器负责人：牟绍英1、在仪器清洗时，必须切断电源；2、使用一周至两周用棉签粘水清洗模块上的锥孔；3、仪器表面如有污迹，可用软布浸水绞干后清洗，严禁用腐蚀性清洗剂清洗。4、机体应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线。5、开机前应检查转头安装是否牢固，机腔有无异物掉入。编写：审核：批准：批准日期：文件编号:Lab-OP-PCR-014XX医院TG L-16C台式离心机第2页，共2页分子生物学室标准操作程序生效日期：XX年XX月XX日6、样品应预先平衡，再对称放入离心转子内。7、挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免腐 蚀机腔

36、或造成事故。8、每次操作完毕，应作好使用情况记录，并定期对机器各项性能进行检修。9、离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。10、保证环境温度20 28 C,使其在最佳状态下工作。编写：审核：批准:批准日期:XX医院Line-Gene扩增仪第1页，共4页分子生物学室标准操作程序生效日期：XX年XX月XX日一、目的：保证扩增及结果分析的标准化、规范化。二、该SOP程序文件的变动：可由任一使用该文件的工作人员提出，报经室技 术负责人，由季度组长会议决定。如通过则公布实行。三、使用范围：Line-Gene型扩增仪的实时荧光定量PCR实验室。四、标准程序4.1 核酸扩增标准程序

37、扩增反应前须先在 Line-GeneSDS软件的设置面板上按照事先排好的标本 位置进行设置。每次实验除了待检标本，还要包括一个阴性对照、一个阳性对照、 一个阳性室内质控品、一组阳性标准品（4个梯度106、104、103、102）。依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows NT 界面。接着打开光源检测器和PCR仪电源开关，预热5分钟。双击“荧光定量PCR检测系统”图标，打开软件。在系统窗口选定“运行”按钮，在“文件”菜单打开PCR定量文件，调入扩增反应设置参数。如首次实验则在实验参数设置处自行设置。点击“样本资料输入”按钮，在“样本输入”界面设定检测项目、样品种 类、患者资料。

38、在“属性”栏中选择类别：标准梯度，未知样品，阴性对照， 未使用在名称栏中依次输入样品名称。 框定标准品孔数，在此窗口输入定值 标准品的标准量。检查设置正确与否，输入完毕点击“确认”并保存。编写：审核：批准：批准日期：#XX医院分子生物学室Line-Gene扩增仪标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 014第2页，共4页生效日期：XX年XX月XX日运行程序：在程序设置文件的窗口，点“运行”键，即可运行。此时自动 弹出保存菜单，保存实验结果于相应文件夹。4.2 结果分析标准程序 对于Line-Gene结果曲线的分析，应按以下步骤进行:全部曲线一一阴性对照一一阳性对照一一阳性室内质控品一一阳性

39、标准品一 一逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）一一调整参数，获得较好的标准曲线， 显示定量结果一一登记，发报告。整体曲线的观察将所有曲线选中进行整体观察观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一 Ct值出现上涨的情况。 观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。阴性对照的分析 阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知 阴性标本。作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。阳性对照的分析 阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知编写：审核:批准：批准日期:45XX医院分子生物学室Line-Gene扩增仪标准操作程序文件编号：Lab

40、-OP-PCR 014第3页，共4页生效日期：XX年XX月XX日阳性标本。作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。（4）阳性室内质控品的分析阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知或未知浓度的阳性室内质控血清。作用：用以监控日常实验的精密度。阳性标准品的分析 各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳模稀释可 能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。 观察各曲线的Ct值是否在平日的正常位置。情况1 :若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct值均后移，则判断是否为 试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。情况2:出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝

41、曲线 Ct值均正常，则提示可能 存在低拷贝阳性标准品的降解情况。 每日必做102标准品，用作以下三方面监控：A是否存在操作误差，如加样量过少等原因导致 102标准品未能检出。B是否存在稀释后的梯度放置过久，低拷贝标准品降解的情况。C若高拷贝标准品出现Ct值后移，且能排除情况A、B,则判断是否为试剂 灵敏度下降。编写：审核：批准：批准日期：XX医院分子生物学室Line-Gene扩增仪标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 014第4页，共4页生效日期：XX年XX月XX日 单个曲线的判断逐个分析每条曲线，判断曲线的阴阳性或属可疑曲线。（可疑标本是指曲线在37个Ct值后出现上涨且平台趋势不明显或

42、上涨幅度比较低的标本。可疑标本要第二天重做，两次结果一致则报阳性，否则结果报阴性。）曲线观察内容：在基线选择28时观察Rn值大小（是否有三期特征）。在基 线选择00时观察Rn值曲线形状。得出定量结果调节基线和阈值以得到一较好的标准曲线。电脑据此曲线给出阳性结果值。此时应排除某些阴性标本因假性上扬而得出的假阳性结果和某些 弱阳性标本因荧光信号值过低而显示的假阴性。发放报告及时登记检测结果记录，发放临床报告。编写：审核：批准：批准日期:XX医院分子生物学室Finn pipette移液器标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 015第1页，共4页生效日期：XX年XX月XX日一、目的：液体的精确取

43、样和转移。二、适用范围：移液范围为0.5-200微升液体。三、操作步骤：按钮控制移液器操作：前进法：1 .将按钮压至第一停止点位置。2 .将移液器管咀浸入液面下 2-3毫米深处，然后慢慢松开按钮吸入液体。待 移入管咀吸满液体后，将管咀撤出液面，擦掉管咀外侧的所有液滴。注意不要触 及咀口。3轻轻压下操作按钮至第一停止点位置， 放出液体。约一秒钟后，继续将操作 按钮向下压至第二停止点位置，将管咀贴在容器壁上防止形成液滴滴入瓶中 ，待管 咀液体放干净后。撤出管咀。4 .松开按钮使之后到起点位置。需要时，可更换管咀继续移液操作。倒退法：倒退法适用于高粘度液体及/或易起泡沫液的移液。此法也推荐用于极小量

44、液 体的移液。1 .将按钮向下压至第二停止点位置。2 .将移液器管咀浸入试剂瓶液面约下 2-3毫米深处，然后慢慢松开按钮吸入编写：审核：批准：批准日期：XX医院分子生物学室Finn pipette 移液器标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 015第2页，共4页生效日期:XX年XX月XX日液体。待管咀吸满液体后，将管咀撤出液面斜贴在试剂瓶的瓶壁上， 淌走多余的液体。3 .轻轻压下操作按钮至第一停止点位置，放出液体。待管咀液体放干净后， 将管咀贴在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中，撤出管咀。不包括在移液量之内的注时液体仍留在管咀内。4 .遗留在管咀裹的液体或者随管咀一起扔掉，或者放回原来器中

45、。 重复操作法：重复操作移液法可快速、简便地重复转移相同体积的同种液体。1 .将按钮向下压至第二停止点位置。2 .将移液器管咀浸入试剂瓶液面约下 2-3毫米处，然后慢慢松开按钮吸入液 体。待管咀吸满液后，将管咀撤出液面斜贴在试剂瓶的瓶壁上， 淌走多余的液体， 防止形成液滴滴入试剂瓶中。3轻压按钮至第一停止点位置，放出液体，待放完所需体积液体后，把按钮 停在第一停止点位置，不包括在移液量之内的少量液体仍留在管咀内。管咀外的液滴则需包括在加样量之内。4.将管咀浸入试剂液面下约2-3毫米处，然 后慢慢松开按钮使管咀重新吸入液体。5.重复步骤3和步骤4继续加样操作，就 可重复转移相同体积液体。四、校准

46、加样器在工厂里已用+22 C蒸储水校准。编写：审核：批准：批准日期：XX医院分子生物学室Finn pipette 移液器标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 015第3页，共4页生效日期:XX年XX月XX日一般来说，Finn pipette加样器在使用时无需要重新校准， 但需要时也可以很容易地在用户的实验室里进行校准。加样器校准用一台分析天秤，一支小烧杯、+22 C 蒸储水和校准工具。除水之外，也可以用其它溶液校准加样器。校准步序：1.按下表指示用量设定移液器体积。移液器设定移液体积（ul）0.5 10.0U122 10.0U1520200微升1002 .把Finn pipette移液器

47、咀牢固地安装在移液端部。3 .用移液器将蒸储水转移到称重烧杯中至少五次。并记录烧杯重量（读数至十分之一毫克）倘若蒸储水称量结果在上述允许值范围之外， 即使五次中只出现 一次，该支移液器也必须重新校准。4 .将校准工具套进姆指操作钮底座梢穴中。若欲增加液体体积，顺时针方向转动校准工具，欲减少液体，反时针方向转动校准工具。5 .重新校准后，按照上述第三步序重新校核移液器是否已符合要求。五、注意事项：编写：审核：批准：批准日期:XX医院分子生物学室Finn pipette 移液器标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 015第4页，共4页生效日期:XX年XX月XX日1 .按下按钮或松开按钮的操作

48、必须循序渐进，尤其是在处理高粘度液体时更如此。2 .决不许让操作按钮急速弹回。3 .必须确保将Finn pipette加样器咀牢固地装进加样器管咀咀锥上，并且保 证管咀内无任何事物。4 .用待移液溶液润湿新装上的管咀， 然后才可进行实际的操作，方法是将溶 液吸入管咀再放空，重复23遍。5 .应当等加样器和管咀的温度、溶液的温度一致时才进行移液操作。6 .为使加样器操作舒适自然，用手轻轻握住加样器并使移液器的把手靠在 标度线上。编写：审核：批准：批准日期:XX医院分子生物学室BSC-1100A2生物安全柜标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 016第1页，共2页生效日期：XX年XX月XX日

49、一、目的：在超净状态下进行各种操作。二、适用范围：配制试剂等。三、安装：1.超净工作台的安装位置的选择是否恰当。将直接影响使用效果和使用寿 命。因此在安装超净工作台时，必须安装在卫生条件较好的房间，最好铺设有塑 料地面或水磨地面，以便于清扫除尘，并注意门窗密封，以避免外界尘粒对室内 影响，以达到延长使用寿命和理想之净化效果。2.超净工作台安装地方应远离有震动及噪音大的地方，尤其是震动对它的影响。3 .超净区气流正常流动是保证净 化效果的重要因素，严禁安装在易受外界气流影响的地方。4.若有条件时可漏隙气流的检查。漏隙的检查是把能度计的探头沿操作区出风端面边缘移动，观察仪表指针，当指针偏转一次时，

50、就有一个漏洞。如此反复检查整个出风断面，确定 漏隙位置，然后加以矫正。造成漏隙的原因可能是边缘密封海棉垫未压紧或者损 坏，或者高效过滤器有漏隙原因。产和漏气流的检查是用热球式风速仪检查的， 将通风机启动后，把风速仪探头放在操作台沿200mm 处，将探头放在各位置上，观察表盘指针读数。四、使用方法：1.确认接通电源后，按功能键" ON/OFF ”（“电源”）键，控制部分开始工 作，指示器指示预置风机电压，同时风机按此预置电压工作此时按调节键 即可减少风机工作电压；2.按功能键“KON/OFF "（“杀菌”）键即可打开杀菌灯， 对工编写：审核：批准：批准日期：XX医院分子生物学

51、室BSC-1100A2生物安全柜标准操作程序文件编号：Lab-OP-PCR 016第2页，共2页生效日期：206.05.30作区域进行照射杀菌，并在操作前开启杀菌灯持续大约30分钟，以把细菌病毒全部杀死；3.进入工作区操作前10分钟，按调节键将风机启动。同时可 通过按或或键调节适当的风速；4.操作时按“ LON/OFF "（或“照明”）键以把照明灯打开，同时关掉杀菌灯；5.操作区分层流区，因此工作的位置不应妨碍气流正常流动、工作人员尽量避免能引起扰乱气流的动作，以免造成 人身污染。6.操作者应穿洁净的工作服，工作时戴好口罩。7.使用过程如发现问题应立即切断电源，报修理人员检查修理。五

52、、保养及维护1.证设备长期正常使用应定期（一般为 46个月）根据环境洁净程度，净初级 过滤器的滤料拆下清洁。2.工作区风速达不到0.08米/秒则必须更换空气高效 过滤器。更换高效过滤器可打开机箱上盖，更换时应注意高效过滤器上的箭头标 志。箭头指向层流流向。3 .初级过滤器采用经过处理的 68mm厚泡沫塑料， 用金属网压牢，装在进风口处。4.更换完毕后，要清扫污染，启动风机进行漏 隙和气流检查。当无故障时可投入使用。5.电器部分：电器部分包括风机、灯。 若电器发生故障时请与“博迅”服务工程师联系。6.严禁改动设备内部结构，若发生质量问题请与上海博迅实业有限公司服务部联系。7.搬运时必须十分小心，防止碰击，以免损伤。编写：审核：批准：批准日期： 文件编号：Lab-OP-PCR 017 XX医院紫外线杀菌车标准操作第1页，共1页分子生物学室及维护保养程序生效日期：XX年XX月XX日一、目的：利用紫外灯进行工作台面消毒、杀菌。二、适用范围：工作台面及仪器表面的照射。三、操作步骤：1.从车