荧光针定量PCR技术在临床医学研究中应用

1、荧光定量荧光定量pcrpcr技术技术在临床检验工作中的应用在临床检验工作中的应用xiaoyuan liangmarketing s美国应用生物系统公司美国应用生物系统公司 appliedbiosystems全球分析仪器及实验室设备销售额排名： abi公司名列全世界第一！2004年3月20日abi提供提供基因分析全套解决方案基因分析全套解决方案热循环仪器专利！热循环仪器专利！ pcrpcr仪：仪： 2400，9600， 2720，9700，9800 荧光实时定量荧光实时定量pcrpcr仪：仪： 7700, 7900, 7000， 7300， 7500 遗传分析仪遗传分析仪: : 310, 313

2、0, 3130xl， 3730， 3730 xl dna/rnadna/rna自动提取仪自动提取仪 6100/tempus 人全血人全血rna提取反应管提取反应管 dnadna合成仪合成仪 3900, 340020042004年年applied biosystems公司公司基因分析新产品基因分析新产品: :更快更快, ,更好更好, ,更高通量更高通量, ,应用更广应用更广 2004年月 7300/7500型荧光定量pcr 2004年月 1700全基因组表达谱芯片 2004年6月 snplex技术 2004年9月 2720pcr扩增仪 2004年10月 7900快速荧光定量pcr扩增系统 35分

3、钟完成 仪器/试剂/新型96孔板/20微升 2004年10月 9800快速pcr扩增系统:25分钟 2004年11月 3130/3130xl 基因分析仪快速检测血液中可能存在的病原体 6100 自动核酸提取仪 30分钟内提取96个样品中的rna 可以提取同一样品的dna 和 rna 定性分析: 发现新病源体/已知病原体分型 9800 pcr: 25分钟 3130/3130xl: 40分钟/500碱基,1小时/700碱基 2小时: q20以上950个碱基 定量分析: 7300/7500: 96孔板 7900: 384个样品/自动进样/35分钟 9800 fast pcr system 25分钟3

4、0个循环the worlds most trusted pcr solutions.mj research侵权，被判罚侵权，被判罚1980万美圆万美圆applied biosystems and roche molecular systems win patent infringement litigation against mj research foster city, ca april 19, 2004 applied biosystems (nyse:abi), an applera corporation business, today announced that a u.s.

5、district court jury in new haven, ct has returned a favorable decision in a lawsuit brought by applera corporation and roche molecular systems, inc. against mj research, inc and its principals, michael and john finney. the jury found that mj research infringed u.s. patent nos. 4,683,195, 4,683,202 a

6、nd 4,965,188 (each relates to polymerase chain reaction pcr process technology) and u.s. patent nos. 5,656,493, 5,333,675 and 5,475,610 (each relates to thermal cycler instrument technology). the jury found the infringement of the 195, 202, 188 and 493 patents to be willful. in addition to direct in

7、fringement by mj research of the 610 and 675 patents, the jury found that mj research induced its customers to infringe all of the patents and contributed to infringement by its customers of the 610 and 675 patents. the jury awarded damages in the amount of $19.8 million to applied biosystems and ro

8、che molecular systems. applied biosystems and roche molecular systems are pursuing an enhancement of damages, including legal fees, since several infringements were found to be willful. additionally, the companies are seeking an injunction against ab ab 荧光定量荧光定量pcrpcr仪大家族仪大家族 5700/7700/7000/7900/730

9、0/7500abi 公司荧光定量pcr仪器介绍第一代荧光定量第一代荧光定量pcrpcr仪仪 -1995-1995年推出年推出全世界第一台全世界第一台77007700型荧光定量型荧光定量pcrpcr仪仪 -1997-1997年推出年推出57005700型荧光定量型荧光定量pcrpcr仪仪第二代荧光定量第二代荧光定量pcrpcr仪仪 -2000-2000年推出年推出79007900型荧光定量型荧光定量pcrpcr仪仪 -20012001年推出年推出70007000型荧光定量型荧光定量pcrpcr仪仪第三代荧光定量第三代荧光定量pcrpcr仪仪 - -2004-2004年推出年推出75007500型

10、荧光定量型荧光定量pcrpcr仪仪7000型荧光定量型荧光定量pcr仪获仪获2002年世界科学家杂志年世界科学家杂志“最最佳仪器奖佳仪器奖”2002年年12月月9日发表日发表 第三代荧光定量pcr仪2004年年 2月最新推出！月最新推出！ 75007500型荧光定量仪型荧光定量仪 2004年11月7300/7500获得医疗器械注册证 市场上最新款的荧光定量pcr仪 applied biosystems 7900ht 快速荧光定量 pcr 系统 唯一能够按照标准96孔模式进行快速定量pcr反应的仪器 20l 反应体系可以在35分钟内进行一次基因表达检测 快速模式的反应结果和标准模式的反应结果相当

11、 所有现有的 7900ht 的客户可以进行快速模式的升级2004年11月10日 获得荧光定量pcr仪器技术的专利 (patent no. 6,814,934). abiabi荧光定量荧光定量pcrpcr仪系统仪系统硬件功能硬件功能四色滤光片四色滤光片超低超低温温ccd光光源源滤光片滤光片96孔样品板孔样品板多元镜多元镜双色镜双色镜96孔透孔透镜组镜组反射镜反射镜n新型低温新型低温ccdccd检测器，检测器， 信噪比更高，保证更高检测灵敏度信噪比更高，保证更高检测灵敏度 单一报告荧光单一报告荧光taqmantaqman实验中仅实验中仅1010个起始拷贝数的模板，其置信度高达个起始拷贝数的模板，其

12、置信度高达99.7%99.7%n新型卤钨灯光源，使用寿命更长，机器配有时间监测功能新型卤钨灯光源，使用寿命更长，机器配有时间监测功能 使用寿命使用寿命20002000小时小时n 四色五色滤光片配置，四色五色滤光片配置， 支持多重定量！支持多重定量！fam, sybr green ivic, joe ned,tamra, cy3 dye. rox (passive reference), texas redcy5 dye同时检测同时检测4色荧光，支持多重定量和突变分析色荧光，支持多重定量和突变分析! abi荧光标记-化学特性及发光强度线性范围基本相同 517nm fam/sybr green（兰

13、色） 第一报告荧光：靶基因1定量指标， 554nm vic 绿色 第二报告荧光：靶基因2或ipc定量指标 583nm tamra，黄色 淬灭荧光，强度随pcr变化 607nm rox，红色 内置荧光强度校准，荧光强度不受pcr影响，可校准加样误差及孔间差异。 rox管内荧光强度校准的好处 reporterreference多种基因同时定量 tnf-, tgf-, tnf-and lymphotoxin- 四种基因定量扩增，每种取5个复管18s 核糖体 rna 20管定量重复扩增abiabi荧光定量荧光定量pcrpcr仪系统仪系统性能特点性能特点 线性范围更宽！至少线性范围更宽！至少9 9个数量

14、级的线性范围！个数量级的线性范围！ 灵敏度更高！单一报告荧光灵敏度更高！单一报告荧光taqmantaqman实验中实验中 仅仅1010个起始拷贝数的模板，置信度高达个起始拷贝数的模板，置信度高达99.7%99.7% 具有绝对定量、相对定量、等位基因分型、具有绝对定量、相对定量、等位基因分型、 阴阳性结果自动判定阴阳性结果自动判定 (+/-)(+/-)功能功能 支持支持 最大反应体积最大反应体积 = 100ul 最小反映体积最小反映体积 = 25ul 标准标准96孔反应板，孔反应板，8连管，单管连管，单管 开放试剂开放试剂 abiabi公司荧光定量公司荧光定量pcrpcr仪系统综合应用仪系统综合

15、应用 绝对定量绝对定量 (aq) 精确进行病原体含量鉴定和基因模板定量精确进行病原体含量鉴定和基因模板定量 相对定量相对定量 (rq) 可同时分析可同时分析10块块96孔反应板的数据孔反应板的数据 大规模高通量对比观察、追踪动态变化大规模高通量对比观察、追踪动态变化 等位基因分析等位基因分析 (ad) 自动判定杂合位点类型自动判定杂合位点类型 高通量筛选高通量筛选snp 阴阳性结果自动判定阴阳性结果自动判定 (+/-) 快速、方便用于临床、卫检等辅助诊断快速、方便用于临床、卫检等辅助诊断 sds 1.2扩增曲线 sds 1.2相对定量 sds 1.2等位基因分型abi荧光定量pcr仪的使用优点

16、 消耗品便宜 0.2ml反应管，标准消耗品 进口的约0.2元/个 国产的约几分钱/个 操作简单 使用普通移液器加样abi荧光定量仪的使用优点 标准品成本低 每批可以检测96个样品 每批样品检测应做5个标准曲线， 2个阴性对照，1个阳性对照 可以检测88个未知样品（可以是两种以上检测项目） 未知/标准11 实验设计容易 提供primer express 软件，方便设计探针 提供2万余种人类基因的定量和15万种snp试剂盒（其他公司的定量pcr仪不支持这种应用）abi 公司为您提供公司为您提供最完善的试剂盒服务系统！最完善的试剂盒服务系统！abi公司用于定量公司用于定量pcr研究的试剂盒研究的试剂

17、盒 通用的dna和rna定量试剂 含有防污染体系ung酶，内参比荧光rox，反转录试剂盒 全部人类基因定量试剂盒（ assay-on-demand） 转基因检测试剂盒（gmo大豆、玉米等） 食品微生物鉴定试剂盒（大肠杆菌、痢疾杆菌等) 卡片式反应板(2ul反应体系，384基因同时定量) assay-by-design（待客设计、合成服务） 人类核酸/男性核酸定量检测试剂盒（quantifiler） abi abi 实时荧光定量实时荧光定量pcrpcr仪仪 - - 基因诊断的主要技术平台：快速方便简单可靠基因诊断的主要技术平台：快速方便简单可靠 临床病原体检测临床病原体检测 定量分析： 单一定量

18、+ 双重定量(mgb) 各种病毒，细菌，衣源体，支原体，病毒载量 病原体检测-检测炭疽菌，ecoli.o157,沙门氏菌 基因分型： 病原耐药性点突变的检测(mgb) 各种基因的定量表达分析各种基因的定量表达分析: 人基因定量试剂盒人基因定量试剂盒 大样本量，快速方便，线性范围宽 重现性好，定量准确，可以确定20-30%的差异 snp和基因突变分析：和基因突变分析： snp分型试剂盒分型试剂盒 疾病相关基因型与临床表型的关系 snp检测与临床表现的相关性：抗高血压药物疗效个体差异 药物副反应的预防定量定量pcrpcr在临床诊断中的具体应用在临床诊断中的具体应用1、肝炎病毒检测2、结核杆菌检测3、优生优育相关项目检测4、性病病原体检测5、eb病毒检测6.sars病