岛津SPD-15C 高效液相色谱的使用

1、高效液相色谱的使用岛津SPD-15C使用方法使用方法By 孙毅孙毅一.操作准备二.仪器组成三.操作过程四.注意事项目录By 孙毅孙毅1.1流动相的配制流动相的配制一.操作准备By 孙毅孙毅用高纯度的试剂配制流动相，用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的高纯水，可用超级新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。对纯水器制得或用重蒸馏水。对规定规定pH值的流动相，应使用精值的流动相，应使用精密密pH计进行调节。配制好的流计进行调节。配制好的流动相应通过动相应通过0.45m适宜的滤适宜的滤膜

2、滤过，用前脱气。应配制足膜滤过，用前脱气。应配制足量的流动相及时待用。量的流动相及时待用。一.操作准备1.2样品溶液的配制样品溶液的配制样品用规定溶剂配制成供试溶液。供试溶液在注入色样品用规定溶剂配制成供试溶液。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经谱仪前，一般应经0.45m或适宜的滤膜滤过。必要或适宜的滤膜滤过。必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。色谱系统产生污染。 By 孙毅孙毅一.操作准备1.3检查仪器状态检查仪器状态检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相

3、的流向一致，原保存溶剂与现用流位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。的位置。By 孙毅孙毅LC-15C液相色液相色谱泵、谱泵、SPD-15C紫外紫外-可见检测器、可见检测器、LCsolution 15c色谱工作站。色谱工作站。 仪器组成仪器组成二.仪器组成By 孙毅孙毅3.1接通电源接通电源三.操作过程将各仪器电源插头插入插座将各仪器电源插头插入插座内，内，按按power键键打开泵和检打开泵和检测器电

4、源测器电源，打开泵（该仪器打开泵（该仪器除梯度外可用单泵也可同时除梯度外可用单泵也可同时用双泵，用单泵可仅开一个用双泵，用单泵可仅开一个泵，用双泵需两个泵同时打泵，用双泵需两个泵同时打开开，双泵操作与单泵操作基，双泵操作与单泵操作基本一致本一致）。）。By 孙毅孙毅3.2泵的操作泵的操作三.操作过程打开泵和检测器电源，仪打开泵和检测器电源，仪器由红灯转换为绿灯，更器由红灯转换为绿灯，更换所需的流动相，然后将换所需的流动相，然后将排液阀旋钮逆时针旋转排液阀旋钮逆时针旋转180以打开排液阀。以打开排液阀。 按按“purge”键运行，开键运行，开始冲洗。如果排液阀旋钮始冲洗。如果排液阀旋钮旋转的度数

5、超过旋转的度数超过180，任，任何排出的流动相都可能包何排出的流动相都可能包含气泡。这是正常现象。含气泡。这是正常现象。 By 孙毅孙毅3.2泵的操作泵的操作三.操作过程等绿灯不再闪烁时代表等绿灯不再闪烁时代表清清洗完成，以顺时针方向尽洗完成，以顺时针方向尽量旋转排液阀旋钮，关闭量旋转排液阀旋钮，关闭排液阀。按排液阀。按“pump”键，键，开始泵的运行。开始泵的运行。 By 孙毅孙毅3.3工作站的使用工作站的使用三.操作过程双击桌面双击桌面Lcsolution 15c】图标，确认已经开启】图标，确认已经开启LC系统后，启动【系统后，启动【LC实时实时分析分析”工作站。启动【工作站。启动【LC实

6、时分析】工作站后，确实时分析】工作站后，确保分析仪器的所有单元（保分析仪器的所有单元（泵、柱温箱和检测器）都泵、柱温箱和检测器）都已连至系统控制器。确保已连至系统控制器。确保所有单元上都没有显示任所有单元上都没有显示任何错误消息。何错误消息。By 孙毅孙毅3.3工作站的使用工作站的使用三.操作过程设置系统配置，以便该系统与仪器的实际配置相匹配。设置系统配置，以便该系统与仪器的实际配置相匹配。仅当第一次将仅当第一次将LCsolution 15c连接到分析仪器，或仪器连接到分析仪器，或仪器的配置发生变化时，才需要下列设置。如果仪器的配置的配置发生变化时，才需要下列设置。如果仪器的配置没有任何变化，

7、点击没有任何变化，点击“视图视图”里的助手栏，点系统配置里的助手栏，点系统配置用单泵或双泵进行运行。用单泵或双泵进行运行。By 孙毅孙毅3.4仪器参数设置仪器参数设置三.操作过程点【文件】项下【新建方法文点【文件】项下【新建方法文件】，单击件】，单击“仪器参数视图仪器参数视图”下【正常】选项，可以在其中下【正常】选项，可以在其中输入分析条件，例如输入分析条件，例如LC停止时停止时间、泵间、泵A流速、检测器流速、检测器A波长通波长通道道 等。确保为每一检测器设置等。确保为每一检测器设置了【了【LC停止时间】【结束时间停止时间】【结束时间】。】。 【LC停止时间】是控制仪停止时间】是控制仪器的持续

8、时间。如果时间程序器的持续时间。如果时间程序或馏分收集时间程序都没有设或馏分收集时间程序都没有设置，则将其保留为置，则将其保留为0.01min。By 孙毅孙毅3.4仪器参数设置仪器参数设置三.操作过程如用单泵运行，泵【模式】钩如用单泵运行，泵【模式】钩选选“等浓度洗脱等浓度洗脱”（双泵运行（双泵运行勾选勾选“二元高压梯度洗脱二元高压梯度洗脱”），点【高级】选项卡中，点【高级】选项卡中“泵泵”选项，设置泵选项，设置泵A流速（一般为流速（一般为1.000ml/min）和压力限制最大）和压力限制最大值、最小值。如需双泵（如梯值、最小值。如需双泵（如梯度洗脱等），点【度洗脱等），点【LC时间程序时间程

9、序】设置梯度洗脱表，单击】设置梯度洗脱表，单击“下下载载”将设置传输到仪器，使用将设置传输到仪器，使用新名称保存方法文件。新名称保存方法文件。By 孙毅孙毅3.4.1进样进样设置设置三.操作过程确保显示【就绪】，且【色谱确保显示【就绪】，且【色谱图视图】中的基线稳定后（一图视图】中的基线稳定后（一般约需般约需1530分钟）。单击【分钟）。单击【LC实时分析】窗口助手栏上的实时分析】窗口助手栏上的“单次运行单次运行”图标，出现图标，出现“单单次运行次运行”屏幕，设置样品名、屏幕，设置样品名、样品样品ID、数据文件、数据描述、数据文件、数据描述、进样体积等，然后单击【确、进样体积等，然后单击【确定

10、】。定】。By 孙毅孙毅3.4.2检测器调零检测器调零三.操作过程检测器调零：点击检测器调零：点击“检测器检测器A零零点点”图标，使检测器数值调零。图标，使检测器数值调零。By 孙毅孙毅3.5进样进样三.操作过程吸取不少于吸取不少于20l的样品，的样品，放在进样口，向左打开进放在进样口，向左打开进样阀，将样品全部打入进样阀，将样品全部打入进样口，样口，再再向右打下进样阀向右打下进样阀，系统即自动开始采集数，系统即自动开始采集数据。单次分析开始，并且据。单次分析开始，并且【LC实时分析】窗口中的实时分析】窗口中的状态从【就绪】变为【运状态从【就绪】变为【运行】。行】。By 孙毅孙毅3.5进样进样

11、三.操作过程当达到【仪器参数视图】中指当达到【仪器参数视图】中指定的检测器的【结束时间】时定的检测器的【结束时间】时，自动终止数据采集。如设定，自动终止数据采集。如设定的【结束时间】要修改，可以的【结束时间】要修改，可以单击【采集】助手栏中的【停单击【采集】助手栏中的【停止】图标，也可以在【数据采止】图标，也可以在【数据采集】菜单的【更改分析时间】集】菜单的【更改分析时间】项目中，在数据采集过程更改项目中，在数据采集过程更改结束时间。一旦开始数据采集结束时间。一旦开始数据采集，【仪器参数视图】设置变为，【仪器参数视图】设置变为只读，并且不能在【仪器参数只读，并且不能在【仪器参数视图】中更改结束

12、时间。视图】中更改结束时间。By 孙毅孙毅3.6 数据处理数据处理三.操作过程方法方法1单击单击“Lcsolution 15c”中的中的“再解析再解析”，“LC再再解析解析”开始。开始。 选择【文件】菜单中的选择【文件】菜单中的“选选择项目文件夹择项目文件夹”，然后选择，然后选择预测定的数据文件，数预测定的数据文件，数据文件即打开。据文件即打开。 By 孙毅孙毅3.6 数据处理数据处理三.操作过程单击助手栏中的【向导】图标，单击单击助手栏中的【向导】图标，单击“program”点击点击【下一步】，设置正确的积分参数。【下一步】，设置正确的积分参数。 记录要识别的峰的保留时间，单击【下一步】输入

13、所需记录要识别的峰的保留时间，单击【下一步】输入所需峰的详细内容，然后单击【完成】。单击化合物表右上峰的详细内容，然后单击【完成】。单击化合物表右上角【视图】按钮，查看【结果】。角【视图】按钮，查看【结果】。 单击【单击【LC数据】助手栏中的【应用到方法】图标，出现数据】助手栏中的【应用到方法】图标，出现屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并单击【保屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并单击【保存】。存】。 重复重复以上以上操作进行下一次测定，直到检验结束。操作进行下一次测定，直到检验结束。By 孙毅孙毅3.6 数据处理数据处理三.操作过程方法方法2除上述办法分析数据外，可除上述办法分析数

14、据外，可以直接找到存储数据文件的以直接找到存储数据文件的文件夹，打开文件，单击文件夹，打开文件，单击【数据数据】然后点击然后点击【峰表峰表】，在峰表中查看并记录所需的在峰表中查看并记录所需的保留时间，峰高，峰面积等保留时间，峰高，峰面积等信息。信息。By 孙毅孙毅3.7打印报告打印报告三.操作过程打印报告：在【打印报告：在【LC数据分析】点击左下角的【报告数据分析】点击左下角的【报告格式】出现格式】出现“操作人操作人”名，选名，选定定“操作人操作人”双击。然后点击左下角【数据】，从【双击。然后点击左下角【数据】，从【数据】中拖动【数据文件】进行打印报告。数据】中拖动【数据文件】进行打印报告。B

15、y 孙毅孙毅3.8清洗和关机清洗和关机三.操作过程分析完毕后，先关色谱工作站和检测器，再用适分析完毕后，先关色谱工作站和检测器，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，一般用先当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，一般用先用用2530%甲醇冲洗，然后用纯甲醇冲洗，甲醇冲洗，然后用纯甲醇冲洗，2530%甲醇一般冲洗甲醇一般冲洗 1530分钟，纯甲醇冲洗不得分钟，纯甲醇冲洗不得少于少于30分钟，特殊情况应延长冲洗时间。分钟，特殊情况应延长冲洗时间。关断电源，作好使用登记，内容包括日期，检品关断电源，作好使用登记，内容包括日期，检品，仪器完好状态等。，仪器完好状态等。By 孙毅孙毅注意事项四.注意事项1

16、. 色谱柱与进样器及其出口端与检测器之间应为无死体积连色谱柱与进样器及其出口端与检测器之间应为无死体积连接接，以免试样扩散影响分离。以免试样扩散影响分离。2. 新柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口新柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。端与检测器脱开，避免污染。3.压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，应检查泵中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞。停泵，应检

17、查柱端有无污染堵塞。By 孙毅孙毅注意事项四.注意事项4.发现记录基线波动，出现毛刺等现象，首先应检查检测器发现记录基线波动，出现毛刺等现象，首先应检查检测器流通池是否有气泡或污染，如不是流通池引起，仪器稳定后流通池是否有气泡或污染，如不是流通池引起，仪器稳定后方能进行操作。方能进行操作。5.进样时，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统进样时，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性并不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换适用性并不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换新的同类色谱柱进行分析。如果同类色谱柱依法操新的同类色谱柱进行分析。如果同类色谱柱依法操作达不到预定的分离时，可更换另一牌号的同类

18、色作达不到预定的分离时，可更换另一牌号的同类色谱柱进行试验。谱柱进行试验。By 孙毅孙毅注意事项四.注意事项6.以硅胶作载体的化学键合相填充剂，其稳定性受以硅胶作载体的化学键合相填充剂，其稳定性受pH值影响值影响很大。所以流动相一般很大。所以流动相一般pH应为应为2.57.5。如果使用高。如果使用高pH值流值流动相时，可在泵与进样器之间连接一硅胶短柱，以饱和流动动相时，可在泵与进样器之间连接一硅胶短柱，以饱和流动相，保护分析柱，并尽可能缩短在高相，保护分析柱，并尽可能缩短在高pH值下的使用时间，用值下的使用时间，用后立即冲洗。后立即冲洗。7.色谱仪管路系统，从泵、进样器、色谱柱至检测器色谱仪管路系统，从泵、进样器、色谱柱至检测器流通池，在分