马传染性贫血

1、.马传染性贫血马传染性贫血 Equine Infectious Anemia（EIA）.马传染性贫血病简介马传染性贫血病简介马传染性贫血，是由马传染性贫血病马传染性贫血，是由马传染性贫血病毒引起马属动物的一种慢性传染病，毒引起马属动物的一种慢性传染病，以病毒持续感染、反复发热和贫血为以病毒持续感染、反复发热和贫血为特征，且可人畜互传，一旦发生很难特征，且可人畜互传，一旦发生很难消灭。消灭。.流行病学流行病学 病马和带毒马是本病的传染源病马和带毒马是本病的传染源，其血液、肝、脾、淋巴结，其血液、肝、脾、淋巴结等均有病毒存在，发热期病马分泌物和排泄物也含有病毒。等均有病毒存在，发热期病马分泌物和排

2、泄物也含有病毒。 吸血昆虫（蚊、虻等）是主要的传播媒介吸血昆虫（蚊、虻等）是主要的传播媒介，也可经消化道、，也可经消化道、呼吸道、交配、胎盘传染，也可由被病毒污染的注射针头呼吸道、交配、胎盘传染，也可由被病毒污染的注射针头和诊疗器械等散播和诊疗器械等散播 。 仅马属动物易感，仅马属动物易感，其中以马最易感，驴、骡次之，且无品其中以马最易感，驴、骡次之，且无品种、年龄和性别差异。种、年龄和性别差异。 本病主要呈地方流行或散发。本病主要呈地方流行或散发。一般无严格的季节性和地区一般无严格的季节性和地区性，但在吸血昆虫较多的夏秋季节及森林、沼泽地带发病性，但在吸血昆虫较多的夏秋季节及森林、沼泽地带发

3、病较多。在新疫区以急性型多见，病死率较高，老疫区则以较多。在新疫区以急性型多见，病死率较高，老疫区则以慢性型、隐性型为多，病死率较低。慢性型、隐性型为多，病死率较低。 .病原学病原学马传染性贫血病毒（马传染性贫血病毒（EIAV）为）为RNA病病毒毒，属于反，属于反转录病毒科慢病毒属。病毒粒子呈圆形，有囊膜，转录病毒科慢病毒属。病毒粒子呈圆形，有囊膜，以出芽方式成熟和释放。以出芽方式成熟和释放。病毒有病毒有群特异性抗原群特异性抗原，用补体结合反应和琼脂扩，用补体结合反应和琼脂扩散反应可以检出，主要用于本病的诊断。另还有散反应可以检出，主要用于本病的诊断。另还有型特异性抗原型特异性抗原，是各型毒株

4、间不同的抗原，存在，是各型毒株间不同的抗原，存在于病毒粒子表面，可用病毒于病毒粒子表面，可用病毒- -血清中和试验检出，血清中和试验检出，主要用于病毒型的鉴别。本病至少有主要用于病毒型的鉴别。本病至少有1414个型。个型。病毒只在马属动物白细胞及驴胎骨髓、肺、脾、病毒只在马属动物白细胞及驴胎骨髓、肺、脾、皮肤、胞腺等细胞培养时才可复制。用马属动物皮肤、胞腺等细胞培养时才可复制。用马属动物以外的其它动物人工感染和进行细胞培养均未获以外的其它动物人工感染和进行细胞培养均未获成功。成功。 .病毒对外界的抵抗力较强。在粪便中能生病毒对外界的抵抗力较强。在粪便中能生存两个半月，将粪便堆积发酵时，经存两个

5、半月，将粪便堆积发酵时，经3030分分钟即可死亡。钟即可死亡。2%2%4%4%氢氧化钠液和福尔马氢氧化钠液和福尔马林液，均可在林液，均可在5 51010分钟内将其杀死，分钟内将其杀死，3%3%来来苏儿液可在苏儿液可在2020分钟内杀死。日光照射分钟内杀死。日光照射1 14 4小时死亡。在小时死亡。在-20-20左右病毒可保存毒力达左右病毒可保存毒力达6 6个月到个月到2 2年。病毒对热的抵抗力较弱，煮年。病毒对热的抵抗力较弱，煮沸立即死亡。沸立即死亡。 .临床症状临床症状临床特征以发热临床特征以发热(稽留热或间歇热稽留热或间歇热)为主，并为主，并有贫血、出血、黄疸、心机能紊乱、浮肿有贫血、出血

6、、黄疸、心机能紊乱、浮肿和消瘦等症状。和消瘦等症状。 血相变化：红细胞显著减少，血红蛋白降血相变化：红细胞显著减少，血红蛋白降低，血沉加速。白细胞减少，丙种球蛋白低，血沉加速。白细胞减少，丙种球蛋白增高，外周血液中出现吞铁细胞。在发热增高，外周血液中出现吞铁细胞。在发热期，嗜酸粒细胞减少或消失，退热后，淋期，嗜酸粒细胞减少或消失，退热后，淋巴细胞增多。巴细胞增多。根据临诊表现，可分为急性、亚急性、慢根据临诊表现，可分为急性、亚急性、慢性和隐性四种病型。性和隐性四种病型。.病理变化病理变化急性型呈现全身败血变化。浆膜、黏膜、淋巴结急性型呈现全身败血变化。浆膜、黏膜、淋巴结和实质脏器有弥漫性出血点

7、和实质脏器有弥漫性出血点( (斑斑) )。脾急性肿大，。脾急性肿大，暗红或紫红色，红髓软化，白髓增生，切面呈颗暗红或紫红色，红髓软化，白髓增生，切面呈颗粒状。肝肿大，黄褐色或紫红色，肝细胞索变性粒状。肝肿大，黄褐色或紫红色，肝细胞索变性与中央静脉、窦状隙淤血交织，使肝切面形成豆与中央静脉、窦状隙淤血交织，使肝切面形成豆蔻状或槟榔状花纹，有蔻状或槟榔状花纹，有“豆蔻肝豆蔻肝”或或“槟榔肝槟榔肝”之称。之称。亚急性和慢性病主要是脾、肝、肾、心脏及淋巴亚急性和慢性病主要是脾、肝、肾、心脏及淋巴结等的网状内皮细胞的增生，肝脏内见有多量吞结等的网状内皮细胞的增生，肝脏内见有多量吞铁细胞。长骨的骨髓红区扩

8、大，黄髓内有红髓增铁细胞。长骨的骨髓红区扩大，黄髓内有红髓增生灶，慢性严重病例骨髓呈乳白色胶冻状。生灶，慢性严重病例骨髓呈乳白色胶冻状。.马传染性贫血驴白细胞活疫苗马传染性贫血驴白细胞活疫苗用马传染性贫血病毒用马传染性贫血病毒(EIAV)(EIAV)通过驴白细胞通过驴白细胞人工驯化而制成的疫苗。为中国首创，可人工驯化而制成的疫苗。为中国首创，可刺激马、驴产生明显体液和细胞免疫应答，刺激马、驴产生明显体液和细胞免疫应答，保护率分别达保护率分别达85%85%以上以上( (马马) )和和100%(100%(驴驴) )。 对马、驴接种后免疫力的产生虽较缓慢对马、驴接种后免疫力的产生虽较缓慢, ,但但免

9、疫持续期较长，免疫保护率较高。这是免疫持续期较长，免疫保护率较高。这是目前国际上唯一的马传染性贫血活毒疫苗目前国际上唯一的马传染性贫血活毒疫苗, ,该成果达到国际先进水平。该成果达到国际先进水平。.毒种选择毒种选择毒种：毒种：马传贫驴白细胞弱毒。（毒力弱，马传贫驴白细胞弱毒。（毒力弱，免疫原性良好。）免疫原性良好。）应符合条件：应符合条件：毒种病毒液含毒量对培养的毒种病毒液含毒量对培养的驴白细胞驴白细胞10106 6TCIDTCID5050/ml/ml；病毒液对驴最小；病毒液对驴最小感染量与免疫量感染量与免疫量1010-5-5/ml/ml；病毒液对标准；病毒液对标准琼扩、补体结合反应的阳性血清

10、必须有抗琼扩、补体结合反应的阳性血清必须有抗原性，与补体抗原效价应在原性，与补体抗原效价应在3.03.0以上；接种以上；接种健康马属动物不出现马传贫症状和不引起健康马属动物不出现马传贫症状和不引起死亡，但具有血清学反应。死亡，但具有血清学反应。.制造要点制造要点驴白细胞培养：动物选择，供提取驴白细驴白细胞培养：动物选择，供提取驴白细胞的驴为胞的驴为2 25 5岁无马传贫感染的健康者。岁无马传贫感染的健康者。无菌采取血浆并分离出白细胞，加赛氏液无菌采取血浆并分离出白细胞，加赛氏液（SeligmarlsSeligmarls）与牛血清混合的营养液培）与牛血清混合的营养液培养养48h48h。接毒按。接

11、毒按3%3%量接毒后，继续培养。收量接毒后，继续培养。收获病毒再培养获病毒再培养5 57d7d进行，收毒冻融二次。进行，收毒冻融二次。.质量标准质量标准疫苗需无菌；疫苗需无菌；补体结合试验效价不低于补体结合试验效价不低于2.02.0；驴白细胞做毒力测定不低于驴白细胞做毒力测定不低于10105 5TCIDTCID5050/ml/ml；原苗原苗5ml5ml皮下注射健康马，观察皮下注射健康马，观察3 3个月，每个月，每天测温两次，每天测温两次，每2Od2Od进行补体结合反应检验；进行补体结合反应检验；须无马传贫症状；血清阳性率需达到须无马传贫症状；血清阳性率需达到2/32/33/43/4，苗可判为合

12、格。，苗可判为合格。.保存与使用保存与使用液体苗液体苗0 044可保存可保存7d 7d ，-20-20以下可保存以下可保存一年。冻干苗一年。冻干苗0 044可保存可保存6 6个月，个月，-20-20以以下可保存两年。下可保存两年。液体苗为微黄色澄清液体。冻干苗为微黄液体苗为微黄色澄清液体。冻干苗为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。按瓶签注明头份，用释液后迅速溶解。按瓶签注明头份，用PBSPBS缓冲液稀释，马、驴、骡各皮下注射缓冲液稀释，马、驴、骡各皮下注射2 2毫升。毫升。注苗后，马需注苗后，马需3 3个月，驴、骡需个月，驴、骡需2 2

13、个月才能个月才能产生免疫力，免疫持续期为产生免疫力，免疫持续期为2 2年。年。.诊断制剂诊断制剂1 1、马传贫琼脂扩散反应抗原、马传贫琼脂扩散反应抗原毒种：驴胎肺、真皮、胸腺二倍体细胞上培养毒种：驴胎肺、真皮、胸腺二倍体细胞上培养 传代适应，抗原性良好的马传贫病毒。传代适应，抗原性良好的马传贫病毒。 毒种条件：收毒后冻融三次，无菌收集。毒种条件：收毒后冻融三次，无菌收集。 按按1.5%1.5%沉淀物制出抗原，免疫扩散法测沉淀物制出抗原，免疫扩散法测 定效价，扩散环直径定效价，扩散环直径10mm10mm以上。以上。 .制造要点：制造要点： 将将6 6月龄左右驴胎肺、皮肤、胸腺等组织月龄左右驴胎肺

14、、皮肤、胸腺等组织制成二倍体细胞，换入等量维持液，按制成二倍体细胞，换入等量维持液，按2%-2%-5%5%接种，培养接种，培养10-15d10-15d收毒。调收毒。调pHpH至至5.0,45.0,4透析透析15h15h，离心，弃上清，沉渣以，离心，弃上清，沉渣以pH8.6pH8.6硼硼酸缓冲液稀释，再加乙醚研磨，待乙醚挥酸缓冲液稀释，再加乙醚研磨，待乙醚挥发后重复一次处理后即为抗原。发后重复一次处理后即为抗原。.抗原检验：抗原检验： 用含用含8 8个单位标准阳性血清，配置成含个单位标准阳性血清，配置成含1%1%标准阳性血清的标准阳性血清的1%1%琼脂平板，经反应后琼脂平板，经反应后出现沉淀环者

15、即为合格。出现沉淀环者即为合格。.2 2、马传贫补体结合反应抗原、马传贫补体结合反应抗原独到特点：应用驴白细胞或驴胎肺、骨髓独到特点：应用驴白细胞或驴胎肺、骨髓传代细胞生产抗原；把小牛血清改为大牛传代细胞生产抗原；把小牛血清改为大牛血清；把乙醚处理病毒培养物改为吐温血清；把乙醚处理病毒培养物改为吐温-80-80（非离子型表面活性剂）和乙醚等量联合（非离子型表面活性剂）和乙醚等量联合处理，大大增加抗原生产量。处理，大大增加抗原生产量。3 3、ELISAELISA抗原抗原.马传贫疫苗研究意义马传贫疫苗研究意义马传贫疫苗的研究成功，突破了慢病毒不马传贫疫苗的研究成功，突破了慢病毒不能免疫的理论，对慢

16、病毒的免疫预防提供能免疫的理论，对慢病毒的免疫预防提供了战略性的理论依据，蕴含着慢病毒免疫了战略性的理论依据，蕴含着慢病毒免疫的巨大信息，为一系列人畜慢病毒免疫的的巨大信息，为一系列人畜慢病毒免疫的研究开辟了新的路线，马传贫疫苗作用机研究开辟了新的路线，马传贫疫苗作用机理的阐明将为理的阐明将为AIDSAIDS疫苗的研究提供借鉴。疫苗的研究提供借鉴。.原来，马传贫疫苗是采用传统的细胞学方原来，马传贫疫苗是采用传统的细胞学方法研制出来的，这种旨在使病毒在细胞传法研制出来的，这种旨在使病毒在细胞传代培养的过程中减低毒力的方法，不但所代培养的过程中减低毒力的方法，不但所用的时间较长，而且由于受到技术手

17、段的用的时间较长，而且由于受到技术手段的限制，研究者只能看到它最终的结果，却限制，研究者只能看到它最终的结果，却并不能了解其中的免疫机理，无从知晓一并不能了解其中的免疫机理，无从知晓一个原本可以使动物致死的病毒究竟何时变个原本可以使动物致死的病毒究竟何时变成有免疫保护作用的疫苗了。如今，运用成有免疫保护作用的疫苗了。如今，运用现代分子生物学技术就能弥补传统细胞学现代分子生物学技术就能弥补传统细胞学技术知其然、不知其所以然的缺憾。技术知其然、不知其所以然的缺憾。.马传贫病毒与艾滋病病毒的主要遗传信息的基因马传贫病毒与艾滋病病毒的主要遗传信息的基因结构完全相同，所以，只要找到马传贫病毒基因结构完全

18、相同，所以，只要找到马传贫病毒基因中的有毒部分，就可以确定中的有毒部分，就可以确定HIVHIV中带毒基因的位置；中带毒基因的位置；如果将如果将HIVHIV的这部分基因减掉后其毒性也随之消失的这部分基因减掉后其毒性也随之消失的话，艾滋病致人死地的谜底就将被揭开。因此，的话，艾滋病致人死地的谜底就将被揭开。因此，首当其冲的是要找到马传贫病毒中这段关键的致首当其冲的是要找到马传贫病毒中这段关键的致病基因。此时，保存了病基因。此时，保存了2020年的马传贫疫苗几百代年的马传贫疫苗几百代传代样本就派上了大用场传代样本就派上了大用场各代病毒的毒力是各代病毒的毒力是怎样减下来的，免疫原性是怎样提上去的，这些怎样减下来的，免疫原性是怎样提上去的，这些信息对于艾滋病疫苗的研制有着重要的指导作用。信息对于艾滋病疫苗的研制有着重要的指导作用。.在完成了一系列不同层面的基因对比后，在完成了一系列不同层面的基因对比后，研究人员终于找到了那些缺失或突变的基研究人员终于找到了那些缺失或突变的基因位点，并以实验证实了马传贫疫苗的减因位点，并以实验证实了马传贫疫苗的减毒原理：这些位点中的某些突变，就是使毒原理：这些位点中的某些突变，就是使马传贫病毒从