高中生物___检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

1、第一章第一章 细胞的分子组成细胞的分子组成第三节第三节 有机化合物及生物大分子有机化合物及生物大分子实验实验1：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验原理：实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。有机化合物产生特定的颜色反应。化学试剂化学试剂+ +有机化合物有机化合物特定的颜色特定的颜色还原糖还原糖 + 斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀脂肪脂肪 + 苏丹苏丹（或苏丹（或苏丹）染液）染液橘黄色（或红色）橘黄色

2、（或红色） 蛋白质蛋白质 + 双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色淀粉淀粉 + 碘碘蓝色蓝色水浴加热水浴加热斐林试剂与双缩脲试剂的比较斐林试剂与双缩脲试剂的比较斐林试剂用的是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水斐林试剂用的是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水浴加热。双缩脲试剂用的是浴加热。双缩脲试剂用的是A液和液和B液，先加液，先加A液，后滴液，后滴B液，不用水浴加热。液，不用水浴加热。双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键的化合物与碱性硫酸双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键的化合物与碱性硫酸铜作用，生成蓝紫色的复合物铜作用，生成蓝紫色的复合物斐林试剂与双缩脲试剂都由斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和和

3、CuSO4组成，但二者有如组成，但二者有如下三点不同：下三点不同：溶液浓度不同。溶液浓度不同。斐林试剂中斐林试剂中NaOH的浓度为的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓度为的浓度为0.05g/mL；双缩脲试剂中；双缩脲试剂中NaOH的浓度为的浓度为0.1g/mL，CuSO4的浓度为的浓度为0.01g/mL。使用原理不同。使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2溶液；溶液；双缩脲试剂实质是在碱性环境下的双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2。使用方法不同。使用方法不同。使用斐林试剂时，先把使用斐林试剂时，先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用

4、双缩脲试剂时，先加入溶液混合，然后立即使用。使用双缩脲试剂时，先加入NaOH溶液，然后再加入溶液，然后再加入CuSO4溶液溶液。一、可溶性还原糖的检测：一、可溶性还原糖的检测：（1）原理：还原糖）原理：还原糖 + 斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀。砖红色沉淀。（2）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为白色或近于白色的植物组织。白色或近于白色的植物组织。（3）检测过程：）检测过程：水浴加热水浴加热振荡混匀振荡混匀5065水浴水浴加热加热2min2mL组织组织样液样液刚配制的斐刚配制的斐林试剂林试剂2mL呈现浅蓝色呈现浅蓝色变成砖红色（变成砖红色（Cu

5、2O）还原糖：含有半缩醛羟基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和还原糖：含有半缩醛羟基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。 当质量浓度为当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量的氢氧化钠溶液与质量浓度为浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的蓝色的Cu（OH）2悬浊液。悬浊液。 Cu（OH）2与葡萄糖、与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中沉淀。因此，利用该反应，可证

6、明样液中含可溶性还原糖。含可溶性还原糖。RCHO+2Cu(OH)RCHO+2Cu(OH)2 2RCOOH+CuRCOOH+Cu2 2O+2HO+2H2 2O O甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。加，或者久置后才用。制备组织样液制备组织样液梨或苹果梨或苹果研磨研磨取取5g，放入研钵中，放入研钵中洗净、去皮、切块洗净、去皮、切块过滤过滤滤液滤液（用单层纱布）（用单层纱布）显色反应显色反应 向试管中加入向试管中加入2ml组织样液组织样液向试管中加入向试管中加入2ml新配制的斐林试剂新配制的斐林试剂或本尼迪特试剂或本尼迪特试剂振荡混匀振

7、荡混匀5065水水浴加热浴加热2min观察现象观察现象 观察溶液颜色变化：浅蓝色观察溶液颜色变化：浅蓝色棕色棕色砖红色砖红色结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃2 ml组织样液组织样液1 ml新配制的斐林试剂新配制的斐林试剂50 65水浴加热水浴加热约约2min观察颜色变化观察颜色变化砖红色砖红色浅蓝色浅蓝色棕棕 色色【斐林试剂斐林试剂】：甲液：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液，乙液：溶液，乙液：0.05 g/mL的的CuSO4溶液，使用前等体积混合均

8、匀（生成浅蓝色溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色的的Cu（OH）2悬浊液），现配现用（时间一长，悬浊液），现配现用（时间一长，Cu（OH）2 沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。还原糖的检测结果还原糖的检测结果斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的Cu2O沉淀。沉淀。-CHO+Cu(OH)2悬浊液悬浊液-COOH+Cu2O（砖红色）（砖红色）二、脂肪的检测二、脂肪的检测（1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。）选材：经浸泡去种皮的花生种子。（2）检测过程：）检测过程：制片制片选

9、取最薄的切片置于洁净的载玻片中央选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央制成临时装片：滴制成临时装片：滴1 2滴蒸馏水，盖上盖玻片滴蒸馏水，盖上盖玻片染色：在薄片上滴加染色：在薄片上滴加2 3滴苏丹滴苏丹染液染液，染色，染色2 3min洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精的酒精1 2滴滴镜检观察：镜检观察：在低倍镜下寻找到已着色的在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。苏三（苏丹苏三（苏丹）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪）切片：切片：花生种子（浸泡花生种子（浸泡h），去

10、皮，将子叶削成薄片。），去皮，将子叶削成薄片。视野中视野中有橘黄有橘黄色颗粒色颗粒橘黄色小圆颗粒橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒即为脂肪颗粒脂肪脂肪 + 苏丹苏丹（或苏丹（或苏丹）染液）染液 橘黄色（或红色）橘黄色（或红色）注意事项：注意事项：（1）若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡34小时，浸小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。（2）染色后一定要用）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解的酒精溶液洗去浮

11、色（酒精能溶解苏丹苏丹），染色和洗浮色时间不宜过长。），染色和洗浮色时间不宜过长。三、蛋白质的检测：三、蛋白质的检测：（1）原理：蛋白质）原理：蛋白质 + 双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色络合物紫色络合物（2）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆（3）检测过程：）检测过程：2 ml组织样液组织样液2 ml双缩脲试剂双缩脲试剂A液，摇匀液，摇匀3-4滴双缩脲试剂滴双缩脲试剂B液，摇匀液，摇匀观察颜色变化观察颜色变化紫色紫色双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质）双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质） 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。将尿素加热，两分子尿

12、素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为反应式为: 双缩脲（双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）在碱性环境（）在碱性环境（NaOH）中）中能和能和Cu2+作用生成紫色的络化物，这个反应叫做双缩脲反应。作用生成紫色的络化物，这个反应叫做双缩脲反应。蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。双缩脲双缩脲双缩脲试剂双缩脲试剂无色无色紫色紫色（创造碱性条件）（创造碱性条件）（提供（提供Cu2+）双缩脲试双缩脲试剂剂B 3-4滴滴双缩脲试双缩脲试剂剂A 2mL2mL组织组织样

13、液样液在碱性条件（在碱性条件（NaOH）下，蛋白质中的肽键）下，蛋白质中的肽键与与Cu2作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先加作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先加A再加再加B，且且A多多B少，如果少，如果B过量，过量， Cu2的蓝色就会遮盖生成的紫色。的蓝色就会遮盖生成的紫色。制备组织样液制备组织样液黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液）黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液）黄豆黄豆浸泡浸泡研磨研磨过滤过滤滤液滤液去皮、切片去皮、切片蛋清液蛋清液鸡蛋鸡蛋鸡蛋清稀释液鸡蛋清稀释液稀释稀释显色反应显色反应向试管中注入向试管中注入2ml组织样液组织样液向试管中注入向试管中注入2ml双缩脲试剂双缩脲试剂A加入加

14、入3-4滴双缩滴双缩脲试剂脲试剂B观察现象观察现象观察颜色变化：无观察颜色变化：无紫色紫色结论：加入双缩脲试剂结论：加入双缩脲试剂A后，颜色呈现为无色，加入后，颜色呈现为无色，加入B后，变为后，变为紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。蛋白质的检测结果蛋白质的检测结果注意事项：注意事项：（1）如果用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，否则反应）如果用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，否则反应后的产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗后的产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。刷干净。 （2）【双缩脲试剂双缩脲试剂】：A液液：0.1g/m

15、L NaOH，B液：液：0.01g/mL CuSO4。先加。先加A液后加液后加B液，且液，且B不能过量，不需要加热。不能过量，不需要加热。（3）过量的双缩脲试剂）过量的双缩脲试剂B会与试剂会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。掩盖生成的紫色。（4）先加入）先加入A液液2ml，摇匀；再加入，摇匀；再加入B液液3-4滴，摇匀。滴，摇匀。四、淀粉的检测：四、淀粉的检测：（2）选材：马铃薯匀浆）选材：马铃薯匀浆（1）原理：淀粉）原理：淀粉 + 碘碘 蓝色蓝色（3）检测过程：）检测过程：2 ml组织样液组织样液2滴碘液滴碘液观察颜色变化观察颜色变化蓝色蓝色蓝（蓝色）点（淀

16、粉）点（碘）蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘）制备组织样液制备组织样液马铃薯块茎马铃薯块茎研磨研磨取取5g，放入研钵中，放入研钵中洗净、去皮、切块洗净、去皮、切块过滤过滤滤液滤液显色反应显色反应向试管中注入向试管中注入2ml组织样液组织样液加入加入5滴碘滴碘-碘化钾碘化钾观察现象观察现象观察溶液颜色变化：无色观察溶液颜色变化：无色蓝色蓝色结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。苹果、梨、白萝卜苹果、梨、白萝卜斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀花生种子花生种子苏丹苏丹染液染液苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色红色红色豆浆、牛奶、鸡蛋清豆浆、牛奶、鸡蛋清双缩脲

17、试剂双缩脲试剂紫色紫色面粉、马铃薯匀浆液面粉、马铃薯匀浆液碘液碘液蓝色蓝色注：鉴定还原糖需加热；脂肪的鉴定不一定要用显注：鉴定还原糖需加热；脂肪的鉴定不一定要用显微镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。微镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。五、观察五、观察DNA、RNA在细胞中的分布在细胞中的分布实验原理：实验原理：（1）DNA主要分布在细胞核内，主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。大部分存在于细胞质中。（2）甲基绿和吡罗红两种染色剂对）甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和和RNA的亲和力不同，的亲和力不同，甲基绿使甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。呈现

18、红色。（3）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和和RNA在细胞中的分布。在细胞中的分布。（4） 盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的同时使染色体中的DNA和蛋白质分离，有利于和蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结和染色剂结合。合。甲基绿使甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色，通过观呈现红色，通过观察两种颜色出现的部位来判断察两种颜色出现的部位来判断DNA和和RNA在细胞中的分布。在细胞中的分布。方法步骤：方法步骤：（1）取材和制片）取材和制片在洁净的载玻片上滴在洁净的载玻片上滴1滴滴0.9%NaCl溶液溶液用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上将涂有将涂有口腔上皮细胞口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯上烘干的载玻片在酒精灯上烘干（2）水解：）水解：将烘干的载玻片放入盛有将烘干的载玻片放入盛有30 mL 8%盐酸盐酸的小烧杯中，的小烧杯中，30水浴保温水浴保温5 min（3）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10秒