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文档简介

1、L/O/G/O根瘤菌的分离与鉴定(1) 照相(2) 挖掘和根瘤保存根瘤选取：大个、新鲜、粉红色、尽量多取。根瘤采集：1.主根上可以剥取少量根皮以保证根瘤完整。 2.侧根上的可带少许根。 采集采集农大豆2号保豆3号保存 每个单株植物的根瘤收集在一个卫生纸包中，每个采集点的多个植株放在一个装有硅胶的自封袋中。分离及纯化用无菌水浸泡干燥根瘤菌直至其复原。2 .用95%的酒精浸泡35分钟，用5%的NaClO3 浸泡1分钟， 用无菌水清洗 57次（换水）。（在超净台上操作，并且在酒精灯附近，防止染菌）分离及纯化(1) 根瘤浸泡(2) 根瘤消毒分离及纯化 3.用牙签（灭菌时尖头朝上，平头朝下）的平头端在灭

2、菌的玻璃平皿上将根瘤刺破（必要时可以滴加一滴无菌水）。用灭菌接种环蘸取菌液在YMA固体培养基上划线。用灭菌接种环蘸取同种菌液，在载玻片上进行革兰氏染色，镜检。分离及纯化消毒刺破划线分离及纯化4.待平板出现菌落后，观察，选取目的菌落再次划线纯化，镜检。5.纯化后的菌划线在试管斜面培养基上，供保菌。分离及纯化挑菌，摇菌稀释1万倍稀释2万倍稀释100万倍保菌使用YMA液体+20%甘油，吹打斜面上的菌，吸取保存。使用YMA液体+20%甘油，吸取摇好的单个菌斑菌液。提取基因组DNA260/280:1.97260/230:2.02 浓度：570ng/鉴定 16S rDNA序列测定：方法同书。 其中：dNTP：2.5mm 引物：10m 测序后，在NCBI

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