药物中特殊杂质的检查

1、实验二实验二 药物中特殊杂质的检查药物中特殊杂质的检查一、目的要求一、目的要求1.掌握本实验中药物特殊杂质的来源； 2.掌握特殊杂质检查的操作方法。 二、实验原理二、实验原理 特殊杂质：指某特殊杂质：指某一个或某一类药物一个或某一类药物的生产或贮藏过程的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。在中国药典正文各药品的质量标准中。 1.阿司匹林中的阿司匹林中的游离水杨酸游离水杨酸: -杂质来源

2、：原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水杂质来源：原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水解产生（贮存过程中水解）解产生（贮存过程中水解） -检查原理：阿司匹林无游离酚羟基，不与高铁盐溶液作检查原理：阿司匹林无游离酚羟基，不与高铁盐溶液作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出1g的游离的游离水杨酸。水杨酸。紫堇色水杨酸643FeClpH原理：2.甾体激素中的有关物质：-来源来源 原料、中间体、异构体、降解产物原料、中间体、异构体、降解产物-特点特点 （1）可能存在多个甾体杂质）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似）结构类似本实验中，氢化可的松中“其他

3、甾体”（现版药典称“有关物质”）的检查采用TLC法。 3.盐酸普鲁卡因注射液中的盐酸普鲁卡因注射液中的对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸：-杂质来源：杂质来源： 水解产生水解产生对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸，进一步脱羧、，进一步脱羧、氧化成氧化成有色杂质，有色杂质，使注射剂颜色变黄、疗效下降、使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性毒性增加。增加。 检查方法检查方法 ： TLC法法NH2COOHNH2NH2COOCH2CH2N(C2H5)2H2O- CO2OOO三、仪器与试药仪器与试药 阿司匹林原料药；阿司匹林原料药； 盐酸溶液（盐酸溶液（9100）；）； 硫酸铁铵指示液；硫酸铁铵指示液； 水杨酸对照品；水杨酸对照

4、品； 冰醋酸；乙醇；甲醇；冰醋酸；乙醇；甲醇； 硅胶硅胶G；硅胶；硅胶H； 四氮唑蓝的甲醇溶液；四氮唑蓝的甲醇溶液； 氢氧化钠溶液；氢氧化钠溶液； 羧甲基纤维素钠水溶液；羧甲基纤维素钠水溶液； 二氯甲烷；乙醚；二氯甲烷；乙醚； 盐酸普鲁卡因注射液；盐酸普鲁卡因注射液； 对氨基苯甲酸对照品；苯；丙酮；对二甲氨基苯甲醛对氨基苯甲酸对照品；苯；丙酮；对二甲氨基苯甲醛溶液等。溶液等。 电子天平；纳氏比色管；薄层板；展开槽；干燥箱等。电子天平；纳氏比色管；薄层板；展开槽；干燥箱等。 四、实验内容四、实验内容（一）阿司匹林肠溶衣中游离水杨酸的检查（一）阿司匹林肠溶衣中游离水杨酸的检查检查检查: 取本品取本

5、品30片（片（0.025g/片），研细，用乙醇片），研细，用乙醇15ml分分次研磨，并移入次研磨，并移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤过，精密量取续滤液度，摇匀，立即滤过，精密量取续滤液2ml，置，置50ml纳纳氏比色管中，用水稀释至氏比色管中，用水稀释至50ml，立即加新制的稀硫酸铁，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液铵溶液3ml，摇匀，摇匀，20秒钟内如显色，与对照液（精密秒钟内如显色，与对照液（精密量取量取0.01%水杨酸标准溶液水杨酸标准溶液4.5ml，加乙醇，加乙醇3ml，0.05%酒酒石酸溶液石酸溶液1ml，用水稀释至，用水稀释至50m

6、l，再加上述新制的稀硫，再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液酸铁铵溶液3ml，摇匀）比较，不得更深（，摇匀）比较，不得更深（1.5%）。）。 （二）氢化可的松中有关物质的检查（二）氢化可的松中有关物质的检查1. 供试品溶液和对照品溶液的制备供试品溶液和对照品溶液的制备 取本品，加氯仿取本品，加氯仿-甲甲醇（醇（9:1）制成每）制成每1ml中含中含3.0mg的溶液，作为供试品溶的溶液，作为供试品溶液。精密量取适量，加氯仿液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（甲醇（9:1）制成每）制成每1ml中中含含60m mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。2. 检查检查 吸取上述两种溶液各吸取上述两种溶液各

7、5l （毛细管高度约毛细管高度约2.0cm），）， 分别点于同一硅胶分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷薄层板上，以二氯甲烷-乙醚乙醚-甲醇甲醇-水（水（385：60：30：2）为展开剂，展开后，晾干，在）为展开剂，展开后，晾干，在105干燥干燥10min，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。（三）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查（三）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查检查检查 吸取上述两

8、种溶液各吸取上述两种溶液各10l（毛细管高度约毛细管高度约2.0cm），），分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上。以苯薄层板上。以苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14：1：1：4）为）为展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸，加入冰醋酸5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更杂质斑点，其颜色与对照溶液的

9、主斑点比较，不得更深。深。TLC检查结果观察：供供试试品品对对照照品品控制杂质斑点个数以控制杂质控制杂质斑点个数以控制杂质种类；种类；供试品溶液所显杂质斑点不得供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点。深于对照溶液的主斑点。 五、注意事项五、注意事项1. 在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液所用的比色管须经所用的比色管须经干燥干燥后使用，且供试品须用乙醇溶后使用，且供试品须用乙醇溶解后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。解后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。2. 游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用游离水杨酸检查时，供试品溶

10、液要临用现配现配，避免阿，避免阿司匹林水解造成的误差。司匹林水解造成的误差。3. 进行水杨酸检查时，应在进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性中性或弱酸性溶液（溶液（pH46）中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会分解褪色。分解褪色。4. 点样时，宜点样时，宜分次分次点加，每次点加后，待其自然干燥或温热气流点加，每次点加后，待其自然干燥或温热气流吹干；点样基线距底边吹干；点样基线距底边2.0cm，样点一般为圆点，直径为，样点一般为圆点，直径为2mm4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般约

11、为一般约为1.5cm2.0cm。5. 展开前，薄层板需饱和展开前，薄层板需饱和3-5min。6. 展开时，薄层板浸入展开剂的深度为距底边展开时，薄层板浸入展开剂的深度为距底边0.5cm1.0cm（切（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至10cm15cm，取出，晾干，按规定方法检测。层析缸必须密闭，否则影响分取出，晾干，按规定方法检测。层析缸必须密闭，否则影响分离效果。实验完毕，离效果。实验完毕，展开剂应回收展开剂应回收。7. 碱性四氮唑蓝试液应临用新配，新鲜试剂应呈黄色，颜色变深碱性四氮唑蓝试液应临用新配，新鲜试剂应呈黄色，颜色变深后不宜使用。后不宜使用。8. 自身对照法仅限于杂质斑点与主成分斑点颜色相同或相近时使自身对照法仅限于杂质斑点与主成分斑点颜色相同或相近时使用。用。*杂质检查完毕的杂质检查完毕的实验内容实验内容-G板和板和H板的制备板的制备（每人做一个每人做一个G和一个和一个H 板）板） 玻璃板洗净，吹干，待用。玻璃板洗净，吹干，待用。 1.G板：玻璃背面先贴上标签板：玻璃背面先贴上标签（G板），板），取硅胶取硅胶G粉粉5g，加，加18毫升水，向同一个方向研磨混合，毫升水，向同一个方向研磨混合，去除表面气泡，从中心倒入洁净玻璃板，研钵去除表面气泡