细胞工程第六章学习教案

1、会计学1第一页，共58页。第1页/共57页第二页，共58页。第2页/共57页第三页，共58页。第3页/共57页第四页，共58页。第4页/共57页第五页，共58页。第5页/共57页第六页，共58页。第6页/共57页第七页，共58页。第7页/共57页第八页，共58页。方便了更换培养液的操作方便了更换培养液的操作(cozu)(cozu)，大大降低了污染，大大降低了污染的概率的概率 培养物可交替地接触培养液和气体环境，培养物可交替地接触培养液和气体环境，利于细胞利于细胞(xbo)或组织成长或组织成长 供新鲜培养液流入小室和旧培养液排出，供新鲜培养液流入小室和旧培养液排出，从而使细胞生活在不断更新的培养

2、液中从而使细胞生活在不断更新的培养液中 第8页/共57页第九页，共58页。3、培养液的发展、培养液的发展天然培养基天然培养基(胎汁、血浆和血清胎汁、血浆和血清) 人工合成人工合成(rn n h chn)培养基（需添加血清）培养基（需添加血清）无血清细胞培养基（用激素、生长因子替代血清）无血清细胞培养基（用激素、生长因子替代血清） 第9页/共57页第十页，共58页。合细胞融合技术进行杂交育种。第10页/共57页第十一页，共58页。许多致畸、致癌物质加入动物细许多致畸、致癌物质加入动物细胞培养液后，培养细胞会发生染胞培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目色体结构和数目(shm)(shm)的变异的

3、变异。 第11页/共57页第十二页，共58页。第12页/共57页第十三页，共58页。第13页/共57页第十四页，共58页。第14页/共57页第十五页，共58页。第15页/共57页第十六页，共58页。第16页/共57页第十七页，共58页。第17页/共57页第十八页，共58页。第18页/共57页第十九页，共58页。第19页/共57页第二十页，共58页。1 组织块；组织块；2组织块碎片；组织块碎片；3消化；消化；4离心；离心；5原代培养；原代培养；6一一传代培养；传代培养；7一液氮罐保存细胞；一液氮罐保存细胞；8复苏培养；复苏培养；9扩大扩大(kud)培养培养；10大规模生物反应器培养大规模生物反应

4、器培养第20页/共57页第二十一页，共58页。第21页/共57页第二十二页，共58页。第22页/共57页第二十三页，共58页。第23页/共57页第二十四页，共58页。搅拌搅拌(jiobn)式生物反式生物反应器应器气升式生物气升式生物(shngw)反应器反应器第24页/共57页第二十五页，共58页。第25页/共57页第二十六页，共58页。1、杂交瘤细胞的筛选方法、杂交瘤细胞的筛选方法HAT培养基筛选培养基筛选B淋巴细胞：淋巴细胞： HGPRT+， TK+ 存活存活(cn hu)，6-10天天骨髓瘤细胞：骨髓瘤细胞：HGPRT-， TK- 死亡死亡杂交瘤细胞：双亲性状，杂交瘤细胞：双亲性状， HG

5、PRT+， TK+ 存活存活(cn hu)第26页/共57页第二十七页，共58页。第27页/共57页第二十八页，共58页。3 2 旋转瓶培养旋转瓶培养14 中空纤维中空纤维(xinwi)培养培养 细胞细胞(xbo)工工厂培养厂培养 微载体微载体(zit)培培养养目前为细胞提供贴附表面目前为细胞提供贴附表面的培养基质主要有的培养基质主要有旋转瓶旋转瓶、中空纤维、细胞工厂和、中空纤维、细胞工厂和微载体微载体等。等。兼具悬浮培养和贴兼具悬浮培养和贴壁培养的优点壁培养的优点第28页/共57页第二十九页，共58页。第29页/共57页第三十页，共58页。三维空间三维空间(snwikngjin)，高密度生长

6、，高密度生长二维空间二维空间(kngjin)，单层生长，单层生长，生长密度低生长密度低体内体内体外体外第30页/共57页第三十一页，共58页。第31页/共57页第三十二页，共58页。中空纤维是细微的管中空纤维是细微的管状结构，管壁为极薄状结构，管壁为极薄的半透膜，水分子的半透膜，水分子(fnz)、小分子、小分子(fnz)营养物质和气营养物质和气体可以通过。管壁表体可以通过。管壁表面有许多海绵状多孔面有许多海绵状多孔结构，细胞能在上面结构，细胞能在上面贴壁生长。贴壁生长。第32页/共57页第三十三页，共58页。 细胞接种细胞接种(jizhng)到中空纤维的外表面，到中空纤维的外表面，而充氧的培养

7、液灌流到而充氧的培养液灌流到中空纤维的内腔。贴附中空纤维的内腔。贴附在外表面的细胞吸取内在外表面的细胞吸取内腔渗出的营养，迅速生腔渗出的营养，迅速生长繁殖。一段时间后细长繁殖。一段时间后细胞占据中空纤维外壁所胞占据中空纤维外壁所有空间，并在纤维表面有空间，并在纤维表面堆积。堆积。第33页/共57页第三十四页，共58页。第34页/共57页第三十五页，共58页。第35页/共57页第三十六页，共58页。既能满足动物细胞的贴壁要求，又能充分利用生物反应器的内部空间。第36页/共57页第三十七页，共58页。第37页/共57页第三十八页，共58页。知识点回顾知识点回顾(hug)第38页/共57页第三十九页

8、，共58页。第39页/共57页第四十页，共58页。第40页/共57页第四十一页，共58页。第41页/共57页第四十二页，共58页。第42页/共57页第四十三页，共58页。第43页/共57页第四十四页，共58页。将细胞和培养液一次性转入生物反应器内，培养将细胞和培养液一次性转入生物反应器内，培养过程中体积不变，不添加其他成分，待细胞增长过程中体积不变，不添加其他成分，待细胞增长(zngzhng)和产物形成积累到适当的时间，一和产物形成积累到适当的时间，一次性收获细胞、产物、培养基。次性收获细胞、产物、培养基。 将终体积将终体积1/31/2的培养的培养(piyng)液装入反应器中，适液装入反应器中

9、，适宜条件下接种细胞，培养宜条件下接种细胞，培养(piyng)过程中流加浓缩的过程中流加浓缩的营养物或培养营养物或培养(piyng)液，使细胞持续生长至较高密液，使细胞持续生长至较高密度、目标产品达到较高水平度、目标产品达到较高水平 在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间取出在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间取出部分培养物，再用新培养液补足到原有体积，维持反部分培养物，再用新培养液补足到原有体积，维持反应器内总体积不变应器内总体积不变将细胞接种于一定体积的培养基，细胞达最大密度将细胞接种于一定体积的培养基，细胞达最大密度之前，以一定速度连续添加新鲜培养基，同时含有之前，以一定速度连

10、续添加新鲜培养基，同时含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积恒定保持培养体积恒定细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断将部分培养基取出，同时连续不断形成过程中，不断将部分培养基取出，同时连续不断地灌注新培养基。取出部分培养基时，绝大部分细胞地灌注新培养基。取出部分培养基时，绝大部分细胞通过细胞截流装置保留在反应器内通过细胞截流装置保留在反应器内 第44页/共57页第四十五页，共58页。第45页/共57页第四十六页，共58页。 动物细胞生物反动物细胞生物反应器是

11、整个动物细胞应器是整个动物细胞大规模培养过程的关大规模培养过程的关键设备，它为动物细键设备，它为动物细胞的生长代谢提供了胞的生长代谢提供了一个最优化的环境，一个最优化的环境，从而从而(cng r)使其在使其在生长代谢过程中产生生长代谢过程中产生出量足质优的所需产出量足质优的所需产物。物。第46页/共57页第四十七页，共58页。第47页/共57页第四十八页，共58页。第48页/共57页第四十九页，共58页。第49页/共57页第五十页，共58页。第50页/共57页第五十一页，共58页。第51页/共57页第五十二页，共58页。第52页/共57页第五十三页，共58页。第53页/共57页第五十四页，共58页。第54页/共57页第五十五页，共58页。第55页/共57页第五十六页，共58页。第56页/共57页第五十七页，共58页。NoImage内容(nirng)总结会计学。目前，利用动物细胞大规模培养技术所生产的生物产品包括酶、单克隆抗体以及多种疫苗等生物制品