GC-定性与定量 6

1、1第五节第五节 色谱数据处理、定性与色谱数据处理、定性与定量及色谱分析方法的建立定量及色谱分析方法的建立2一、 色谱数据处理色谱数据处理二、二、 气相色谱的定性气相色谱的定性三、三、 气相色谱的定量气相色谱的定量四、四、 色谱方法的开发色谱方法的开发五、气相色谱的应用五、气相色谱的应用3一、色谱数据处理一、色谱数据处理1。什么是数据处理什么是数据处理对来自检测器的模拟信号进行转换、记录、并按对来自检测器的模拟信号进行转换、记录、并按方法要求加工成所需的分析结果方法要求加工成所需的分析结果4一、色谱数据处理一、色谱数据处理2.数据处理的基本流程5一、色谱数据处理一、色谱数据处理峰峰面面积积积积分

2、分6一、色谱数据处理一、色谱数据处理3.几种常见的峰积分模式表示符号几种常见的峰积分模式表示符号A A：峰的积分中止：峰的积分中止B B：峰在基线上开始或结束：峰在基线上开始或结束H H：峰在水平基线上开始或结束：峰在水平基线上开始或结束N N：一个负峰：一个负峰P P：峰开始或结束于基线渗透点：峰开始或结束于基线渗透点S S：溶剂峰（只能是峰符号的第二个字母）：溶剂峰（只能是峰符号的第二个字母）T T：峰开始或结束于切线斜滑点：峰开始或结束于切线斜滑点V V：在峰谷处峰开始或峰结束：在峰谷处峰开始或峰结束7一、色谱数据处理一、色谱数据处理4.4.积分参数积分参数: :阈值阈值, ,峰宽峰宽,

3、 ,最小峰面积最小峰面积, ,峰高峰高, , 斜率灵敏度斜率灵敏度5.5.数据处理系统的性能评价数据处理系统的性能评价(1) (1) 模数转换的线性范围模数转换的线性范围(2) (2) 采样频率采样频率(3) (3) 基线的处理方式基线的处理方式(4)(4)异常峰（拖尾峰、肩峰、小峰等）的处理异常峰（拖尾峰、肩峰、小峰等）的处理(5)(5)定量定量8二、气相色谱定性二、气相色谱定性1.1.用已知纯物质对照定性用已知纯物质对照定性 这是气相色谱定性分析中这是气相色谱定性分析中最方便最方便，最可靠最可靠的方法。下图为是进行对照定性的示意图。这的方法。下图为是进行对照定性的示意图。这个方法个方法基于

4、在一定操作条件下基于在一定操作条件下，各组分的保留各组分的保留时间是一定值的原理时间是一定值的原理。如果未知样品较复杂，。如果未知样品较复杂，可采用在可采用在未知混合物中加入已知物未知混合物中加入已知物，通过未知，通过未知物中哪个峰增大，来确定未知物中成分。物中哪个峰增大，来确定未知物中成分。 请看一个例子（下图）9二、气相色谱定性二、气相色谱定性10二、气相色谱定性二、气相色谱定性2.2.用经验规律和文献值进行定性分析用经验规律和文献值进行定性分析 气相色谱中的经验规律或文献值定性。气相色谱中的经验规律或文献值定性。 （1）碳数规律碳数规律 在一定温度下，同系物的调整保在一定温度下，同系物的

5、调整保留时间的对数与分子中碳原子数成线性关系，即留时间的对数与分子中碳原子数成线性关系，即式中式中A1和和C1是常数，是常数，n为分子中的碳原子数（为分子中的碳原子数（n3）。该式）。该式说明，如果知道说明，如果知道某一同系物中两个或更多组分某一同系物中两个或更多组分的调整保留的调整保留值，则可根据上式推知同系物中其它组分的调整保留值。值，则可根据上式推知同系物中其它组分的调整保留值。 11lgCnAtr11二、气相色谱定性二、气相色谱定性 （2）沸点规律沸点规律 同族具有相同碳数碳链的异构体化同族具有相同碳数碳链的异构体化合物，其调整保留时间的对数和它们合物，其调整保留时间的对数和它们的沸点

6、呈线性关系，即的沸点呈线性关系，即 式中式中A2和和C2均为常数，均为常数，Tb为组分的沸点（为组分的沸点（K）。由）。由此可见，根据此可见，根据同族同数碳链异构体同族同数碳链异构体中几个已知组分中几个已知组分的调整保留时间的对数值，可求得同族中具有相同的调整保留时间的对数值，可求得同族中具有相同碳数的其他异构体的调整保留时间。碳数的其他异构体的调整保留时间。 22lgCTAtbr12（二）气相色谱定性（二）气相色谱定性文献值定性文献值定性 a 根据相对保留值定性根据相对保留值定性 利用相对保留值定性比用保留值定性更为方便、可靠。利用相对保留值定性比用保留值定性更为方便、可靠。在用保留值定性时

7、，必须使两次分析条件完全一致，有时不在用保留值定性时，必须使两次分析条件完全一致，有时不易做到。而用相对保留值定性时，只要保持柱温不变即可。易做到。而用相对保留值定性时，只要保持柱温不变即可。要求找一个基准物质，一般选用苯、正丁烷、环己烷等作为要求找一个基准物质，一般选用苯、正丁烷、环己烷等作为基准物。所选用的基准物的保留值尽量接近待测样品组分的基准物。所选用的基准物的保留值尽量接近待测样品组分的保留值。保留值。13 b b 根据保留指数定性根据保留指数定性 保留指数又称保留指数又称Kovats指数，用指数，用I表示，是一种重现性较其表示，是一种重现性较其他保留数据都好的定性参数，可根据所用固

8、定相和柱温直接他保留数据都好的定性参数，可根据所用固定相和柱温直接与文献值对照，而不需标准样品。与文献值对照，而不需标准样品。 那么，那么， 保留指数是如何计算的呢？保留指数是如何计算的呢？人为规定正构烷烃的保留指数为其碳数乘人为规定正构烷烃的保留指数为其碳数乘100,如正己烷和如正己烷和正辛烷的保留指数分别为正辛烷的保留指数分别为600和和800。至于其他物质的保留。至于其他物质的保留指数，则可采用两个相邻正构烷烃保留指数进行标定。测指数，则可采用两个相邻正构烷烃保留指数进行标定。测定时，将碳数为定时，将碳数为n和和n+1的正构烷烃加于样品的正构烷烃加于样品x中进行分析，中进行分析，若测得它

9、们的调整保留时间分别为若测得它们的调整保留时间分别为tr（Cn），），tr（Cn+1；）和；）和tr（x）且）且tr（Cn）tr（x）tr（Cn+1）时，则组分时，则组分X的保留指数可按下式计算的保留指数可按下式计算，14 注意：注意： 在与文献值对照时，一定要重视文献在与文献值对照时，一定要重视文献值的实验条件，如固定液、柱温等。而且要用值的实验条件，如固定液、柱温等。而且要用几个已知组分进行验证几个已知组分进行验证。 )(lg) 1(lg)(lg)(lg*100nrnrnrrxCtCtCtxtnI153.双柱、多柱定性双柱、多柱定性 对于复杂样品的分析，利用双柱或多柱法对于复杂样品的分析，

10、利用双柱或多柱法更有效、可靠，使原来一根柱子上可能出现更有效、可靠，使原来一根柱子上可能出现相同保留值的两种组分，在另一柱上就有可相同保留值的两种组分，在另一柱上就有可能出现不同的保留值。能出现不同的保留值。4.采用选择性检测器采用选择性检测器 气相色谱与质谱、气相色谱与质谱、Fourier红外光谱、原红外光谱、原子发射光谱等仪器联用是目前解决复杂样品子发射光谱等仪器联用是目前解决复杂样品定性分析最有效工具之一。定性分析最有效工具之一。 16 （四）气相色谱定量方法气相色谱定量方法 气相色谱定量分析的基础是根据检测器对溶质产生的响气相色谱定量分析的基础是根据检测器对溶质产生的响应信号与溶质的量

11、成正比的原理，通过色谱图上的峰面积应信号与溶质的量成正比的原理，通过色谱图上的峰面积或峰高，计算样品中溶质的含量。或峰高，计算样品中溶质的含量。1峰面积测量方法峰面积测量方法 峰面积是色谱定量数据，峰面积测量的准确与否直接影响峰面积是色谱定量数据，峰面积测量的准确与否直接影响定量结果。对于不同峰形的色谱峰采用不同的测量方法。定量结果。对于不同峰形的色谱峰采用不同的测量方法。（l）对称形峰面积的测量）对称形峰面积的测量峰高乘半峰宽法峰高乘半峰宽法 A=1.065hW12 （2）不对称峰面积的测量一）不对称峰面积的测量一峰高乘平均峰宽法峰高乘平均峰宽法 A=1/2h（W0.15W0.85） 式中式

12、中W0.15和和 W0.85分别为峰高分别为峰高0.15倍和倍和0.85倍处的峰宽。倍处的峰宽。 17（2） 定量校正因子定量校正因子 （1）绝对校正因子）绝对校正因子 单位峰面积所对应的组分的量。单位峰面积所对应的组分的量。iiiAmf 由于组分的量由于组分的量mi不易测量，无法准确测定绝对校正不易测量，无法准确测定绝对校正因子。在实际工作中，以相对定量校正因子因子。在实际工作中，以相对定量校正因子fi代替定代替定量校正因子。量校正因子。（2）相对定量校正因子）相对定量校正因子fi定义为：定义为：样品中各组分的定量样品中各组分的定量校正因子与标准物的定量校正因子之比。校正因子与标准物的定量校

13、正因子之比。用下式表示用下式表示18（四）气相色谱定量（四）气相色谱定量式中式中m和和A分别代表质量和面积，下标分别代表质量和面积，下标i和和s分别代表待测组分分别代表待测组分和标准物。和标准物。热导检测器热导检测器标准物用标准物用苯苯，氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器用用正庚烷正庚烷。fi表示相对质量校正因子，可用相对摩尔校正因子表示相对质量校正因子，可用相对摩尔校正因子fi(M)和相对体积校正因子和相对体积校正因子fi(V)表示。表示。siissiimAmAfff相对校正因子只与试样、标准物质和检测器类型有关，与操相对校正因子只与试样、标准物质和检测器类型有关，与操作条件、柱温、载气流

14、速、固定液性质无关。作条件、柱温、载气流速、固定液性质无关。19（四）气相色谱定量（四）气相色谱定量 相对校正因子测定方法相对校正因子测定方法 准确准确称量被测组分和标准物质称量被测组分和标准物质，混合后在实验条件下分别进样分析（注意进样量应在线性混合后在实验条件下分别进样分析（注意进样量应在线性范围之内），范围之内），分别测量分别测量相应的相应的峰面积峰面积，然后通过公式计算，然后通过公式计算校正因子，可测量数次，取其平均值。校正因子，可测量数次，取其平均值。488. 12525031300siissiimAmAfff20（四）气相色谱定量（四）气相色谱定量（3）常用的定量计算方法常用的定量

15、计算方法（l l）归一化法）归一化法 归一化法是气相色谱中常用的一种定量方法。使归一化法是气相色谱中常用的一种定量方法。使用的前提条件是试样各组分必须全部出峰且在检测器用的前提条件是试样各组分必须全部出峰且在检测器能被定量检测，归一化的计算公式为能被定量检测，归一化的计算公式为式中式中Ai为组分为组分i的峰面积，的峰面积，fi为组分为组分i的相对校正因子。的相对校正因子。%100.2211nniiifAfAfAfAx211 2 3 4 5 6 SampleAmmiAi（2）外标法）外标法 外标法是所有定量分析中最通用的一种方法，即所谓校准曲线法。外标法是所有定量分析中最通用的一种方法，即所谓校

16、准曲线法。外外标法简便，不需要校正因子，但进样量要求十分准确，操作条件也需标法简便，不需要校正因子，但进样量要求十分准确，操作条件也需严格控制。严格控制。它适用于日常控制分析和大量同类样品的分析。它适用于日常控制分析和大量同类样品的分析。22SampleStandardsiAssssAisiifAmfAm AsssAisisifAfAmms 为了克服外标法的缺点，可采用内标法。这种方法的特点为了克服外标法的缺点，可采用内标法。这种方法的特点是：选择一内标物质，以是：选择一内标物质，以固定的浓度加入标准溶液和样固定的浓度加入标准溶液和样品溶液中，以抵消实验条件和进样量变化带来的误差。品溶液中，以

17、抵消实验条件和进样量变化带来的误差。（3）内标法）内标法23标样中标样中含含C12C12的质量的质量（ngng) )峰面峰面积积内标内标物物C15C15的质的质量量（ngng) )峰面峰面积积Ai/ASAi/AS0 00 025253103100 025252592590.835 0.835 50505135131.655 1.655 75757577572.442 2.442 100100101410143.271 3.271 某一未知样品中加入内标C15 25ng,在相同色谱条件下测得C12的峰面积是280,C15的峰面积是280。 Ai/AS280/280=1,可计算出可计算出C12的质

18、量是30.58ng241 1、样品来源及其预处理方法、样品来源及其预处理方法（1 1）我们在接到一个未知样品时，就必须了解它的来源，）我们在接到一个未知样品时，就必须了解它的来源，从而估计样品可能含有的组分，以及样品的沸点范围。从而估计样品可能含有的组分，以及样品的沸点范围。（2 2）如能确认样品可直接分析，就要找一种合适的溶剂，）如能确认样品可直接分析，就要找一种合适的溶剂，如丙酮、己烷、氯仿、苯等。一般讲，溶剂应具有较低如丙酮、己烷、氯仿、苯等。一般讲，溶剂应具有较低的沸点。的沸点。（3 3）尽可能避免有水、二氯甲烷和甲醇作溶剂。）尽可能避免有水、二氯甲烷和甲醇作溶剂。（4 4）如果用毛细

19、管柱分析，应注意样品的浓度不要太高，）如果用毛细管柱分析，应注意样品的浓度不要太高，以免造成柱超载，能常样品的浓度为以免造成柱超载，能常样品的浓度为mg/mlmg/ml或更低。或更低。(5)(5)如果样品中有不能用如果样品中有不能用GCGC直接分析的组分直接分析的组分, ,或者样品浓度或者样品浓度太低太低, ,就必须进行必要的预处理就必须进行必要的预处理. .（四）色谱方法的开发（四）色谱方法的开发252.2.确定所需仪器的配置确定所需仪器的配置 仪器的配置就是指用于分析样品的方法采用什么进样装仪器的配置就是指用于分析样品的方法采用什么进样装置、什么载气、什么色谱柱和什么检测器置、什么载气、什

20、么色谱柱和什么检测器 1 1）根据分析对象、分析要求和工作目的，确定气相色谱）根据分析对象、分析要求和工作目的，确定气相色谱仪进样系统、色谱柱和检测器的配置情况。仪进样系统、色谱柱和检测器的配置情况。 2 2）根据所需的气体种类、用量选择采用高压钢瓶或气体根据所需的气体种类、用量选择采用高压钢瓶或气体发生器发生器；所选用的气体净化装置；所选用的气体净化装置。26 色谱方法的建立色谱方法的建立3）色谱柱及柱温的选择色谱柱及柱温的选择 A A、色谱柱类型色谱柱类型 要根据分析对象，选择合适的色谱柱。要根据分析对象，选择合适的色谱柱。 一根一根高效的、质量好的色谱柱应高效的、质量好的色谱柱应选择性好

21、选择性好、内壁惰内壁惰性、温度使用范围广性、温度使用范围广，这取决于色谱柱的内表，这取决于色谱柱的内表面和内表面上的固定相层，固定相在柱内壁是面和内表面上的固定相层，固定相在柱内壁是否形成均匀薄膜。应根据分析对象，选择合适否形成均匀薄膜。应根据分析对象，选择合适的色谱柱，并对色谱柱的性能进行评价。的色谱柱，并对色谱柱的性能进行评价。27 色谱方法的建立色谱方法的建立B B色谱柱柱长和柱内径色谱柱柱长和柱内径 选择色谱柱长时，选择色谱柱长时，应考虑应考虑分离度分离度、分析时间分析时间和和色谱柱色谱柱的成的成本等。分离度与柱长的平方根成正比，而分析时间直接与本等。分离度与柱长的平方根成正比，而分析

22、时间直接与柱长成正比，即如果通过增加色谱柱长，提高分离度，分柱长成正比，即如果通过增加色谱柱长，提高分离度，分离度增大一倍，柱长必须增加三倍，分析时间也增加三倍。离度增大一倍，柱长必须增加三倍，分析时间也增加三倍。 一般填充柱的柱长在一般填充柱的柱长在0.5-50.5-5米之间；对于毛细管柱色谱，一米之间；对于毛细管柱色谱，一般柱长在般柱长在10-3010-30米间可满足大多数分析的需求，对于复杂的米间可满足大多数分析的需求，对于复杂的混合物可采用混合物可采用50m50m、60m 60m 或或100m100m的色谱柱。的色谱柱。28 色谱方法的建立色谱方法的建立 柱径的选择。柱径的选择。内径增

23、大，有较大的样品容量，随着内径增大，有较大的样品容量，随着内径的减小内径的减小，单位时间内的柱效迅速增加，单位时间内的柱效迅速增加，分离度增大，分离度增大，但样品的容量但样品的容量以以r r2 2的关系减小；柱压降以的关系减小；柱压降以1/r1/r4 4的关系增加，的关系增加，对仪器的综合性能有较高的要求，对仪器的综合性能有较高的要求，一般选用一般选用0.2 mm0.2 mm、0.25mm0.25mm、0.32mm0.32mm内径的色谱柱内径的色谱柱。当样品容量是主要的考。当样品容量是主要的考虑因素时虑因素时, ,如气体如气体, ,强挥发性样品强挥发性样品, ,吹扫捕集或顶空进样时，吹扫捕集或

24、顶空进样时，当分辨率的降低可接受时，可考虑采用当分辨率的降低可接受时，可考虑采用0.53mm0.53mm的大口径的大口径柱。柱。如与质谱检测器相联时，需用小口径柱。如与质谱检测器相联时，需用小口径柱。29色谱方法的建立色谱方法的建立C C色谱柱液膜厚度色谱柱液膜厚度 液膜厚度既影响色谱柱性能，又影响分析时间。膜厚为液膜厚度既影响色谱柱性能，又影响分析时间。膜厚为0.250.5um的薄液膜色谱柱，的薄液膜色谱柱，相比变大相比变大，分配比，分配比k k变小变小，洗脱组分快，有，洗脱组分快，有利于利于实实现组分的现组分的快速分离快速分离，适于高沸点化合物适于高沸点化合物、组分密集化合物或热敏化组分密

25、集化合物或热敏化合物的分析合物的分析；同时液相传质阻力下降，柱效变大，但柱容量减小。；同时液相传质阻力下降，柱效变大，但柱容量减小。采用采用18 m的厚液膜柱，柱容量大，可以不经分流直接进的厚液膜柱，柱容量大，可以不经分流直接进1 1 L L的汽油的汽油样品而不引起超载，有利于痕量组分的分析；样品而不引起超载，有利于痕量组分的分析；厚液膜色谱柱有利于厚液膜色谱柱有利于低沸点化合物的分析。低沸点化合物的分析。 在实际工作中，液膜厚度的选择，应与柱内径相联系，柱内径在实际工作中，液膜厚度的选择，应与柱内径相联系，柱内径与液膜厚度的比值在与液膜厚度的比值在40001000之间，如柱直径为之间，如柱直

26、径为0.32mm的毛细管的毛细管柱，以柱，以0.080.25 m的液膜厚度为宜的液膜厚度为宜30（四）色谱方法的建立（四）色谱方法的建立3.确定初始操作条件确定初始操作条件 当样品准备好，且仪器配置确定之后，就可开始进行尝试性分离。当样品准备好，且仪器配置确定之后，就可开始进行尝试性分离。这时要确定初始分离条件，主要包括进样量、进样口温度、检测器温这时要确定初始分离条件，主要包括进样量、进样口温度、检测器温度、色谱柱温度和载气流速。度、色谱柱温度和载气流速。（1）进样量：）进样量：要根据样品浓度、色谱柱容量和检测器灵敏度。样品浓度要根据样品浓度、色谱柱容量和检测器灵敏度。样品浓度不超过不超过m

27、g/ml时填充柱的进样量通常为时填充柱的进样量通常为15ul,而毛细管柱，若分流比而毛细管柱，若分流比为为50：1时，进样量不超过时，进样量不超过2ul。（2）进样品温度）进样品温度：主要由样品的：主要由样品的沸点范围决定沸点范围决定，还要考虑色谱柱的使用还要考虑色谱柱的使用温度温度。首先要保证待测样品全部汽化，其次要保证汽化的样品组分能。首先要保证待测样品全部汽化，其次要保证汽化的样品组分能够全部流出色谱柱，面不会在色谱柱中冷凝。够全部流出色谱柱，面不会在色谱柱中冷凝。一般高于柱温一般高于柱温50100oC，以保证样品快速汽化，但对某些高沸点、热稳定性差的样品，高于或以保证样品快速汽化，但对

28、某些高沸点、热稳定性差的样品，高于或接近其沸点时，已可能分解，可调大分流比，在大量载气稀释下，保接近其沸点时，已可能分解，可调大分流比，在大量载气稀释下，保证微量样品在低于沸点温度下汽化或采用冷柱头进样、程序升温进样证微量样品在低于沸点温度下汽化或采用冷柱头进样、程序升温进样等。等。31（3）色谱柱温（初温、终温、升温速率）的选择）色谱柱温（初温、终温、升温速率）的选择 A、色谱柱温度的确定主要、色谱柱温度的确定主要由样品的复杂程度由样品的复杂程度和和汽化温度汽化温度决定。决定。原则上既要保证待测组分完全分离，以要保证所有级分流出原则上既要保证待测组分完全分离，以要保证所有级分流出色谱柱，且分

29、析时间越短越好。色谱柱，且分析时间越短越好。B、组成简单的样品最好、组成简单的样品最好用恒温分析用恒温分析。C、组成复杂的样品，常需要用、组成复杂的样品，常需要用程序升温分离程序升温分离，因为在恒温条，因为在恒温条件下，如果柱温较低，则低沸点组分分离得好，而高沸点组件下，如果柱温较低，则低沸点组分分离得好，而高沸点组分的流出时间会太长，造成峰展宽，甚至滞留在色谱柱中造分的流出时间会太长，造成峰展宽，甚至滞留在色谱柱中造成柱污染；反之，当柱温太高时，低沸点组分又难以分离。成柱污染；反之，当柱温太高时，低沸点组分又难以分离。D、一般条件下，色谱柱的、一般条件下，色谱柱的初始温度初始温度应接近样品中

30、应接近样品中最轻组分的最轻组分的沸点沸点，而，而最终温度最终温度则取决于则取决于最重组分的沸点最重组分的沸点，升温速率则要，升温速率则要依样品的复杂程度而定。依样品的复杂程度而定。32色谱方法的建立色谱方法的建立（4 4）载气的种类及流速的选择）载气的种类及流速的选择 常用的载气有氢气、氮气、氩气和氦气。从色谱理论知：常用的载气有氢气、氮气、氩气和氦气。从色谱理论知：载气的种类主要是通过被测组分在气体中的扩散系数载气的种类主要是通过被测组分在气体中的扩散系数D DG G影影响分子的纵向扩散项和气相传质阻力项；载气的流速既影响分子的纵向扩散项和气相传质阻力项；载气的流速既影响分子的纵向扩散项，又

31、影响气相传质阻力项。如强调快响分子的纵向扩散项，又影响气相传质阻力项。如强调快速分析，可选用氢气、氦气作载气。如强调柱效，用低扩速分析，可选用氢气、氦气作载气。如强调柱效，用低扩散系数的气体如氮气、氩气作载气。散系数的气体如氮气、氩气作载气。 载气流速可按照最佳流速，如氮气为载气流速可按照最佳流速，如氮气为20cm/s,20cm/s,氦气约为氦气约为25cm/s,25cm/s,氢气约为氢气约为30cm/s30cm/s高高10%10%来设定，然后根据分离情况来设定，然后根据分离情况进行调节进行调节。33色谱方法的建立色谱方法的建立（5）检测器温度的选择）检测器温度的选择 检测器的温度是指检测器加

32、热块温度。检测器的温度是指检测器加热块温度。 检测器温度的检测器温度的设定原则是保证流出色谱柱的组分不会冷凝，同时满足设定原则是保证流出色谱柱的组分不会冷凝，同时满足检测器灵敏度的要求。与样品的沸程范围、检测器类型检测器灵敏度的要求。与样品的沸程范围、检测器类型等有关。等有关。4.分离条件的优化分离条件的优化（1）改变）改变n和和H：采用接近最佳载气流速，采用小内径的色采用接近最佳载气流速，采用小内径的色谱柱，如果是填充柱就采用较小的填料粒度。谱柱，如果是填充柱就采用较小的填料粒度。（2）改变分配比）改变分配比k:改变分配比最简单的方法是改变柱温，改变分配比最简单的方法是改变柱温，降低柱温可明

33、显地提高分配比，降低载气流速也可提高降低柱温可明显地提高分配比，降低载气流速也可提高分配比。分配比。34续前续前（3）改变相对保留值）改变相对保留值相对保留值只与柱温有关相对保留值只与柱温有关,当两个组分的当两个组分的接近接近1时时,改变柱高改变柱高H和改变分配比和改变分配比k都难以在可接受都难以在可接受的时间内实现完全分离的时间内实现完全分离.因此因此,应在保持应在保持k值为值为了了210之间之间的前提下的前提下,设法改变设法改变相对保留值相对保留值.常用的方法是常用的方法是:改变柱温、更换色谱柱、通过改变柱温、更换色谱柱、通过衍生化反应改变待测物的结构衍生化反应改变待测物的结构。35色谱方

34、法的建立色谱方法的建立5 5、色谱的定性和定量、色谱的定性和定量(1)(1)对于简单样品，可通过对于简单样品，可通过标准物质对照标准物质对照来定性。就是在选定来定性。就是在选定的分离分析方法下，分别注射标准样品和实际样品的分离分析方法下，分别注射标准样品和实际样品, ,要据保要据保留值即可确定色谱图上哪个峰是要分析的组分留值即可确定色谱图上哪个峰是要分析的组分. .但要注意但要注意, ,在在同一色谱柱上同一色谱柱上, ,不同化合物可以有相同的保留值不同化合物可以有相同的保留值, ,对未知样品对未知样品的定性仅仅用一个保留值数据是不够的的定性仅仅用一个保留值数据是不够的. .可用双柱或多柱进可用

35、双柱或多柱进行行(2)(2)对于复杂样品对于复杂样品, ,则要通过保留指数或则要通过保留指数或GC/MSGC/MS来定性来定性(3)(3)定量分析定量分析: :是要确定用什么定量方法来测定待测组分的含量是要确定用什么定量方法来测定待测组分的含量 366 6、方法验正、方法验正 (1)(1)方法的线性范围方法的线性范围: :就是检测器响应值与样品浓度成就是检测器响应值与样品浓度成正比的线性范围正比的线性范围, ,其确定通常是采用多于其确定通常是采用多于3 3个不同浓个不同浓度的标准系列进行分析度的标准系列进行分析, ,以峰面积或峰高对浓度进行以峰面积或峰高对浓度进行线性回归线性回归, ,归相关系

36、数大于归相关系数大于0.990.99时时, ,就可认为是线性的就可认为是线性的. .(2)(2)方法检测限方法检测限: :是指方法可检测到的最小样品量是指方法可检测到的最小样品量( (或浓或浓度度). ).检测限的测定可用一个接近检测限浓度的样品检测限的测定可用一个接近检测限浓度的样品进行分析进行分析, ,据所得的色谱峰高来计算据所得的色谱峰高来计算, ,计算公式如下计算公式如下: : DL=3Nc/h DL=3Nc/h37(3)(3)方法的重复性和重现性实验方法的重复性和重现性实验: :重复性重复性是同一个人在同一台仪器是同一个人在同一台仪器上重复进样所得结果的一致性上重复进样所得结果的一致性; ;生现性是指同一方法在不同时生现性是指同一方法在不同时间、地点、不同型号仪器、不同操作人员使用时所得结果的间、地点、不同型号仪器、不同操作人员使用时所得结果的一致性。一致性。 首先应测定重复性，方法如下：在相同条件下连续进样首先应测定重复性，方法如下：在相同条件下连续进样5 51010次，统计待测组分的保留时间和峰面积的相对误差，一般次，统计待测组分的保留时间和峰面积的相对误差，一般要求保留时间的相对误差不大于要求保留时间的相对误差不大于1%1%，峰面积的相对误差不，峰