检验检测项目测定方法(1)

1、常规检测项目的测定方法常规检测项目的测定方法主讲人：杨敏主讲人：杨敏2分类固定时间法终点法一点终点法连续监测法两点终点法免疫比浊法免疫比浊法离子选择电极法离子选择电极法一点终点法一点终点法即在时间即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。选择一个时间点测定吸光度值。通常在反应终点附近连续读两个吸光度，通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。断反应是否达到平衡。多用于多用于GLU TG CHGLU TG CH等的测定。等的测定。2021-11-274Al

2、 T（时间）（时间）AS+R(吸光度）吸光度）一点终点法反应曲线一点终点法反应曲线二点终点法二点终点法 第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度度Am，经过一定时间后反应达终点后测第，经过一定时间后反应达终点后测第二个吸光度值二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结利用两吸光度之差计算结果。果。 第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关，相当于样品空样品的非特异性反应有关，相当于样品空白，可有效的消除样品自身的吸光度，如白，可有效的消除样品自身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。溶血，黄疸，脂血等的干扰。

3、2021-11-276AnTAR2AmS+R1(吸光度）吸光度）（时间）（时间）两点终点两点终点Ax=样本空白样本空白An - k0 Am（体积校正因子）（体积校正因子）k0 =Sv+RlSv+R1+R2固定时间法固定时间法 指在时间指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，吸光度曲线上选择两个测光点，这两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光这两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，利用这两点吸光度差值计算结果。度，利用这两点吸光度差值计算结果。 如：苦味酸法测肌酐如：苦味酸法测肌酐 固定时间法固定时间法 计算公式： C=(A2-A1)*K A1A2T(吸光度）吸光度）免疫比浊法免疫比浊法 通过物质对光

4、的散射或透射来测定物质含量的方法：通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的方法： 散射比浊：特定蛋白分析仪散射比浊：特定蛋白分析仪 透射比浊：自动生化分析仪透射比浊：自动生化分析仪 通常作两点终点法分析，多采用多点校准。通常作两点终点法分析，多采用多点校准。 应用：用应用：用Ab测定测定Ag（主要为微量蛋白：（主要为微量蛋白：IG、 APOA1/B、ASO、RF、CRP等），要求等），要求Ab 过量，过量，此时此时Ag-Ab复合物的生成量随复合物的生成量随Ag的增加而递增，的增加而递增，光散光散/透射射强度与抗原量成正比。透射射强度与抗原量成正比。连续监测法连续监测法 根据反应速度与待测物的浓

5、度成正比，通根据反应速度与待测物的浓度成正比，通过测定一段时间内吸光度的变化速率过测定一段时间内吸光度的变化速率（ A/min ）来计算待测物的浓度。）来计算待测物的浓度。 酶活性测定常用酶活性测定常用酶促反应曲线酶促反应曲线离子选择电极法 溶液中被测离子接触电极时，在离子选择电极膜基质的含水层内发生离子迁移，迁移离子的电荷改变存在着电势，产生了跨膜电位，在测量电极与参比电极之间产生一个电位差。这种电位变化由离子活度决定，并与离子浓度成比例。临床举例临床举例1.终点法：终点法：总胆红素及结合胆红素（氧化法或重氮法）、总胆红素及结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯（氧化酶法）葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯（氧化酶法）尿酸（尿酸酶法）、尿酸（尿酸酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）钙（偶氮砷钙（偶氮砷法）法）磷（紫外法）磷（紫外法）镁（二甲苯胺蓝法）镁（二甲苯胺蓝法）2固定时间法固定时间法肌酐（苦味酸法）3连续监测法连续监测法ALT、AST、LDH、ALP、GGT、AMY、CK4透射