miR-499a-5p通过靶向APC减轻氧化应激对心肌细胞损伤的研究

1、    mir-499a-5p通过靶向apc减轻氧化应激对心肌细胞损伤的研究    武国利 张宁 田蜜 田征 许金鹏 马竞 杨泽峰【摘  要】目的：探讨mir-499a-5p通过靶向apc减轻氧化应激对心肌细胞损伤的研究。方法：将h9c2细胞培养时使用含dmem培养基（10 %胎牛血清）进行常规的培养、传代，将正常培养的h9c2细胞标记为对照组，将其用h2o2（100、200、400、800mol/l）处理4 h，检测细胞的存活率，筛选400mol/l的浓度建立氧化应激损伤模型，标记为模型组，比较两组的心肌mir-499-5p表达及apc表达。

2、结果：模型组mir-499-5p表达明显低于对照组，而apc表达明显高于对照组（p<0.05）。结论：mir-499a-5p可调控h2o2诱导的心肌细胞增殖、凋亡和氧化应激，其机制与靶向抑制apc有关，为氧化应激引起的心肌细胞损伤提供了新的治疗靶点。【关键词】心肌细胞损伤;氧化应激;mir-499a-5p;apcr197      a      1672-3783（2020）07-0108-01氧化应激引起的心肌细胞凋亡是很多心脏疾病的重要作用机制，这也是心血管疾病治疗的研究热点。mirna在人类疾病中的重要作用已经得到大量研究

3、的认可，但是心血管疾病mir-499a-5p在心肌细胞损伤中的功能尚未完全清楚1。活化蛋白c（apc）是一种重要的生理抗凝剂，其由蛋白c介导的细胞途径发挥直接的细胞调控，如抗炎活性、抗凋亡活性和内皮保护障碍。据报道，apc在缺血再灌注心肌损伤中具有有益作用，对心肌细胞凋亡和炎症具有抑制作用2。但是，其与mir-499a-5p在心肌氧化应激损伤中的作用关系尚未清楚。本研究旨在探索mir-499a-5p在h2o2诱导的心肌细胞损伤中的作用及其与apc之间的关系，以期可为氧化应激引起的心肌细胞损伤的治疗提供新靶点。1.资料与方法1.1一般资料 采用深圳市百恩维生物科技有限公司生产的大鼠心肌细胞h9c

4、2，使用含dmem培养基（10 %胎牛血清）进行常规的培养、传代。将正常培养的h9c2细胞标记为对照组，将其用h2o2（100、200、400、800 mol/l）处理4 h，检测细胞的存活率，筛选400mol/l的浓度建立氧化应激损伤模型，标记为模型组。1.2mir-499a-5p、apc的表达检测方法： 采用qrt-pcr检测，收集细胞，将细胞用trizol法提取细胞中的总rna，再用反转录试剂盒将其合成cdna。最后用qrt-pcr试剂盒操作，检测细胞中mir-499a-5p、apc的表达。以u6、gapdh为内参，2-ct检测细胞中mir-499a-5p、apc的相对表达量。20 l逆

5、转录反应混合物在42孵育15 min，加热到95反应2min。qrt-pcr条件在9510 s，然后 95，5 s，60，30 s，72，1 min，45个循环。引物信息（5'-3'）：mir-499a-5p 上游引物5'-aacaucacagcaagucugugcu-3'，下游引物mir-499a-5p 5'-uuaagacuugcagugauguuu-3'u6上游引物5'-ctcgcttcggcagcaca-3' ，下游引物5'-aacgcttcacgaatttgcgt-3'apc上游引物5'-ggac

6、tacaggccattgcagaa-3'，5'-ggctacatctccaaaagtcaa-3'gapdh上游引物 5'-accacagtccatgccatcac-3'，下游引物5'-tccaccaccctgttgctgta-3'3。1.3统计学方法 应用 spss20.0 统计学软件，计量资料用均数±标准差（ ±s）表示，采用t检验，p<0.05为有统计学意义。2.结果2.1两组mir-499a-5p、apc表达比较，见表1。3.讨论mir-499-5p是进化上高度保守的肌肉特异性micro rna，其在心室中

7、的表达明显升高。临床研究表明，在心肌缺血缺氧或氧化应激状态下，心肌细胞的mir-499表达发生改变，表现为mir-499表达降低，抵抗心肌细胞缺氧性损害。本研究结果显示，模型组的mir-499-5p表达明显低于对照组，而apc水平明显高于对照组（p<0.05）。提示mir-499-5p可能参与心肌氧化应激的病理过程中，而apc过表达能逆转mir-499-5p对心肌细胞的损伤4。综上所述，mir-499a-5p可调控心肌细胞的增殖、凋亡和氧化应激反应，临床可通过靶向抑制apc，减轻氧化应激对心肌细胞损伤。参考文献1 王晓景，张明星，陈小亮.mir-20a-5p通过靶向mrtfa緩解ox-ldl诱导的内皮细胞损伤j.中国动脉硬化杂志，2019，27（9）：743-750.2 王彦利，李纪明，罗进光.mir-137靶向下调setd7表达对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激的影响研究j.分子诊断与治疗杂志，2019，11（6）：462-467.3 吴丽梦，李恩，周小翠等.mir- 499-5p干预对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响j.郑州大学学报（医学