食品中防腐剂苯甲酸和山梨酸的测定.

1、实验 9.3 食品中防腐剂苯甲酸 (钠和山梨酸 (钾的测定薄层色谱法一、实验目的掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。学会制备聚酰胺薄层板。二、仪器吹风机 层析缸 玻璃板 10 ×18cm 玻璃板 50×80 cm 微量注射器 10L喷雾器三、试剂与试样聚酰胺粉 200目乙醚 可溶淀粉无水硫酸钠 盐酸溶液 6mol ? L-14%氯化钠酸性溶液 于 4%氯化风俗溶液中加入少量 mol ? L-1 盐酸溶液展开剂 :(1 正丁醇:氨水:无水乙醇 =7:1:2(2异丙醇 :氨水:无水乙醇 =7:1:2显色剂:0.04%溴甲酚紫的 50%乙醇溶液用 0.1mol ? L-1氢氧

2、化钠调至 PH=8苯甲酸标准溶液 :精密称取苯甲酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量 瓶中,并用 乙醇稀释至刻度摇匀 ,此溶液每亳升相当于 2mg 苯甲酸。山梨酸标准溶液 :精密称取山梨酸 0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量 瓶中,并用 乙醇稀释至刻度摇匀 ,此溶液每亳升相当于 2mg 山梨酸试样 酱油、水果汁、果酱等四、实验步骤1、试样提取 试样溶液的制备称取 2.5g 混合均匀的试样 ,置于 25mL 带塞量筒中 ,加 0.5mL , 6 mol? L-1盐酸酸 化 ,用乙 醚提取两次 (15mL 、 10mL 每次振摇 1min , 将上层乙

3、醚提取液吸入另一 25mL 带塞量筒中 , 合并乙醚提取液。用 3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次 ,静置 15min ,乙醚层通过无水硫酸 钠脱水后过滤于 25mL 容量瓶中。加乙醚稀释至刻度 , 摇匀。吸取 10.00mL 乙醚提取液分两次置于 10mL 离心管中, 在约 40水浴上除去乙 醚, 加入 0.1mL 乙醇溶解残渣 ,制成试样测定液备用。2、聚酰胺粉板的制备称取 1.6g 聚酰胺粉 ,加 4g 可溶性淀粉 ,加 15mL 水,研磨 35min,使其均匀即可涂 10×18cm 厚度 0.3mm 的薄层板两块。 涂好的薄层板置于水平大玻璃板上 , 于室温 干燥后, 于 80

4、 干燥 1h 取出,置于干燥器中保存。3、点样在薄层板下端 2cm 的基线处,用 10ul 微量注射器 ,分别点 1L、 2L试 样溶液 和 1 L、 2 L苯 甲酸、山梨酸标准溶液。4、展开与显色层析缸内倒入适量展开剂 ,在层析缸周围贴上滤纸 ,待滤纸湿润后 ,展开剂液层厚 约 0.50.7cm,让展开剂在层析缸内饱和 10min , 将点样后的薄层板放入层析缸内 ,使 薄层下 端浸入展开剂中约 0.5cm , 迅速盖紧缸盖 , 进行展开, 如图 8 12。待展开剂 前沿上展至 10cm 时 , 取出吹干,喷显色剂 ,斑点呈黄色 ,背景为蓝色。5、定性和半定量测定把试样斑点与标准斑点比较 ,

5、以比移值 （Rf 值定性 ,在此实验条件下苯甲酸和山 梨酸的 比移值分别为 0.73、 0.82。比较试样斑点与标准斑点面积大小及颜色深浅进行含量计算。根据测定结果按下式计算试样中苯甲酸、山梨酸含量。计算:式中:X 试样中苯甲酸 （山梨酸的含量 , g ? kg-1;A 测定用试样溶液中苯甲酸 （山梨酸的质量 , mg ;m 试样的质量 , g ;V1溶解苯甲酸 （山梨酸时 ,加乙醇体积 , mL ;V2测定时点样的体积 , mL ;25试样乙醚提取液的总体积 , mL;10测定时吸取乙醚提取液的体积 , mL 。五、说明和注意事项1、此方法用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸含量的测定。苯

6、甲酸及 其钠盐、山梨 酸及其钠盐是食品常用防腐剂 , 主要用于酸性食品的防腐。 国家规定 在不同食品中其最大使 用量为 0.21.0 g? kg-1。 如碳酸饮料中苯甲酸或山梨酸的最 大使用量为 0.2 g? kg-1。 酱油、 食 醋中苯甲酸钠或山梨酸钠最大使用量为 1.0 g? kg-1。因此 ,测定食品防腐剂的含量以控制其 用量,对保证食品质量 ,保障人民健康具 有十分重要的意义。2、本方法测定原理为 :试样经酸化 ,使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸、山 梨酸,再用 乙醚提取, 乙醚提取液经氯化钠酸性溶液洗涤 ,并用无水硫酸钠脱水后 ,将 乙醚蒸出, 残渣用乙醇溶解后 ,点样于聚酰胺薄层板上 ,经展开,显色后,根据比移值与 标准比较定性 ,根 据斑点面积和颜色深浅进行半定量测定。3、试样中如含有二氧化碳、酒精时应加热除去 ,富含脂肪和蛋白质的试样应除 去脂肪和蛋 白质 ,以防用乙醚萃取时发生乳化。4、本方法灵敏度高 ,但操作繁琐 ,重现性差 ,现今多用气相色谱法测定 ,试样经酸 化后, 用乙醚提取苯甲酸、 山梨酸后 , 用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行 分离和测定 , 与 标准系列比较定量。也可采用高效液相色谱法测定 , 利用被分离组分在固定相和移动相中分配系数 的不同, 使被 测组