综合实验二,骨髓细胞染色体畸变试验

1、实验九实验九.骨髓细胞染色体畸变试验骨髓细胞染色体畸变试验一实验目的一实验目的1. 掌握骨髓细胞染色体制片及染色技术：2. 观察骨髓细胞染色体.二。原理：原理：染色体是细胞核中具有特殊结构和遗传功能的小体，当化学物质作用于细胞周期G1期和S期时，诱发染色体型畸变，而作用于G2期时则诱发染色体单体型畸变。给试验的大、小白鼠腹腔注入秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，以便增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下观察染色体数目和形态。 三三. .实验材料：实验材料： 大白鼠（2N=42)或小白鼠（2N=40)四，仪器，药品，用具四，仪器，药品，用具 显微镜，离心机，恒

2、温箱，5mL针管，天平 1. 0.1%秋水仙素：置于棕色瓶中，冰箱保存。2. 2.2%柠檬酸钠。3. pH7.4磷酸缓冲液 4. 0.075mol/L氯化钾溶液。 5. 甲醇(分析纯)：冰乙酸(分析纯)以3 1混合，临用现配。 6. Giemsa应用液：取1mL储备液加入10mL pH7.4磷酸缓冲液。 五五.实验内容和方法：实验内容和方法：1.处死动物前24h，按4mg/kg体重腹腔注入秋水仙素。 2. 取骨髓细胞，大鼠断头处死、小鼠颈椎脱臼，立即剪取后肢，取除肌肉，剥出后肢股骨，用75%酒精擦去肌肉残渣，剪去两端骨骺 用带针头的5ml注射器吸取4mL2.2%柠檬酸钠溶液，将骨髓洗入10mL

3、离心管中，反复冲洗数次直至股骨断面由红色变粉色，然后以1500r/min离心10min，弃去上清液。 3 . 低渗处理低渗处理离心后的沉淀物加入4mL0.075mol/L氯化钾溶液，混匀后在37水浴或恒温箱中放置30min，再以1500r/min离心10min，弃去上清液。 4固定固定将新配制甲醇冰乙酸固定液4mL沿管壁加入样品中，10min后，用吸管将细胞团块打碎继续固定10min，以1500r/min离心10min弃去上清液，再加固定液4mL静置20min后1500r/min离心10min，弃去上清液，用吸管混匀制成0.51.0mL细胞悬液。5制片 自冰水中取出载玻片，倾斜30放置，立即

4、吸取 细胞悬液在玻片的1/3处滴3滴，轻吹细胞悬液扩散平铺于玻片上。将载玻片掠过酒精灯几次，每个样品制23张玻片，空气中自然干燥。 6染片临用时取Giemsa储备液1mL加磷酸缓冲液10mL，置染色缸中，将涂片浸于染液中染色15min左右，取出玻片用水冲洗，空气中自然干燥。7 7镜检镜检7.1在低倍镜下检查制片质量，制片应为全部染色体较集中，而各个染色体分散、互不重叠、长短收缩适中、两条单体分开、清楚地显示出着丝点位置、染色体呈红紫色 8.观察项目和结果判定观察项目和结果判定 8.1每只动物分析100个中期相细胞，观察项目为染色体数目和结构改变。 8.2染色体数目的改变染色体数目的改变 8.2.1非整倍体：亚二倍体或超二倍体。 8.2.2多倍体：染色体成倍增加。.8.3染色体结构的改变。8.3.1断裂：损伤长度大于染色体的宽度。 8.3.2微小体；较断片小而呈圆形。8.3.3有着丝点环：两端形成环状结构，带有着丝点部分，并伴有一双无着