大鼠尾加压素II收缩大鼠肺动脉干与蛋白激酶C通路相关性研究

1、大鼠尾加压素ii收缩大鼠肺动脉干与蛋白激酶c通路相关性研宄作者：薛必成陈少贤粪永生徐正王良兴范小芳 【摘要】目的研究大鼠尾加压素-ii收缩大鼠离体肺动脉干环与细胞信号转导通路蛋白激酶c通道的关系。方法 从雄性sprague-dauley大鼠中分离出肺动脉干，切成3 4mm的血管环，用ruii预收缩血管达坪台期后，加入蛋白激 酶c通道阻断剂h-7，制备h-7(100 umol/l)浓度一效应 舒张曲线，最后分别计算ec 50和emax。结果h_7呈浓度依 赖性舒张大鼠ruii预收缩的肺动脉干-log ec50= 土，emax=(土)。结论细胞信号转导通路蛋白激酶c通道的激 活参与大鼠尾加压素-i

2、i收缩大鼠肺动脉干效应。【关键词】尾加压素-ii蛋白激酶c肺动脉干【a btract 】 stoinvestigatetheiobjective theaimofourstudywa nfluenceofproteinkiansecinhibitiononcedvasoconstrictioruncuspulmonaliswa alesprague-dawleyr at ，raturotens inllindun. methods themaintsdissectedfromthem arteryringwidthwas3ofproteinkina secchannel, h-7 (10 0

3、y mol/l) werea.ddedi ntomediumafterraturotensinllinducedvasoconstrictionhadreachedplateautoconstructtherelaxantonsecurvesandtheirs h-7causedconcentlaxationsofraturot edarteries -log e theresponsetolonmo 1/lraturotensinii inducedratmainpulmtionisrelatedtotheconcentration-respec50andemax. resultration

4、-dependentreensinllprecontractc50 = 土，emax= （土）%of.conclusion ratuiionaryarterycontracactivat i onofprotei nkinasecsignaltran sducitonpathway.【keywords 】urotensinil proteinkinasec truncuspulmonalis尾加压素-n (ruii)是最早从硬骨鱼尾部神经内分泌系统中提取出来的多肽1 ，随后，两栖类及哺乳类动物大 脑中也发现ruii，起生物学效应的羧基末端是环形六肽结构， 它在从鱼到人的物种中呈高度的保守性2。

5、ruii受体为 g蛋白藕联受体gpr-14 3 ，它是迄今为止所发现的最强效 血管收缩活性肽4。ruii收缩血管效应与多条细胞信号 转导通路有关，例如已有的研究结果，表明ruii收缩血管 作用与激活ca离子通道、rho激酶、蛋白激酶c、酪氨酸激 酶及磷酯酶c通路等有关5。另外，研究表明ruii还通 过c-src/pkc/map k细胞信号转导途径调节血管平滑肌细胞的增生6，还可以通过激活pkc与mapk增加细胞内钙离子 浓度7。ruii是大鼠离体肺动脉干的有效收缩剂，并且其 收缩作用可被mapk阻断剂pd98059所阻断7，8，形成肺 动脉高压后，肺动脉干对ruii的收缩反应增强9。因此， 研

6、究ruii收缩肺动脉效应与pkc通路的关系，对于阐明ruii 对肺动脉的作用机制以及在肺动脉高压形成与发展等病理 过程中所起的作用有着重要意义。1材料与方法 材料雄性sprague-dawley大鼠（350450g）用戊巴比妥纳麻 醉后，分离出肺动脉干，剔除周围结缔组织后切成3_4mm动 脉环，垂直悬挂在含15mlkreb' s液的浴槽中。kreb's液成 份:nac 1，kc1，kh2p04, mgs04，cac12，nahco s 325，glucose 11 edta23umo 1/l。kreb's 液 ph，温度（3 7±1）°c，并持续通

7、含95%025%c02的气体。血管环在最适前负荷下平衡90min 后加入60mmol/l浓度的kc1。浴槽中的液体每隔30m in换 一次。平衡结束后，先用6（himol/lkcl预收缩血管环。经过 反复冲洗待血管张力回至基线后，向浴槽加入新鲜配制的 ruii，使最终浓度为10nmol/l,血管环的张力变化通过张力 换能器用多道生理记录仪记录。药品ruii购自sigma，用 lmmo/1 l醋酸盐母液用蒸馏水保存在_20°c条件下，h_7（购 自sigma）溶解在dmso中，其余试剂均达到分析纯水准。所有试剂均在实验当天配制，避光保存在冰箱中。方法在ruii预收缩大鼠离体肺动脉干环迗

8、到坪台期后，向浴 槽内加入累积浓度h_7(looumol/l)，每隔5min加一次药， 观察pkc通道阻断剂h-7对大鼠ru ii预收缩血管的舒张效 应。统计学分析根据不同药物浓度下的血管舒张值制备剂量-效应曲线 在每次实验中分别计算抑制血管收缩值的百分数，最后的值 用(x土s)表示，ec50与ema x值用scatchar法将浓度-效 应曲线转化为直线后通过回归运算求得。计算公式为e=cx emaxcxec50 , e为舒张效应值，c为药物浓度，ec 50为达 最大舒张反应一半所需药物浓度，emax为最大舒张幅度。2结果pkc通道阻断剂h-7呈剂量依赖性舒张ruii(10nmol/l) 预收

9、缩的大鼠肺离体主动脉环。-log ec 50 =土 (n=13),emax=(±)%。见表1和图1。表1 h-7对大鼠尾加 压素-ii收缩血管的影响(略)注：n=130；不同h-7浓度舒张幅度比较，r 3讨论p<本研究证实pkc通道阻断剂h-7呈剂量依赖性舒张 ruii(10nmol/l)预收缩的大鼠肺离体主动脉环，-log ec5 0 =±、emax=(±)%，提示ruii收缩肺动脉干部份通过 pkc细胞信号转导通路介导，与文献相一致，即ruii收缩大 鼠胸主动脉可被pk c通道阻断剂che 1 rythrine及npc-15437 部份阻断5。自从发现r

10、uii是迄今为止最强效的血管收缩活性肽后， 国内外针对ruii收缩分离自各种物种离体血管环的效应做 了大量研究，尤其是在其动脉收缩效应的细胞信号转导通路 机制方面。目前已发现ruii与多条细胞信号转导通路相关， 从而逐步揭示ruii的生物学效应作用机制，进而揭示其在 病理生理学方面的作用机制5，8，10。然而以往对 ru ii收缩血管效应研究多集中在胸主动脉等大血管上，有 关ruii对肺动脉干的效应及其细胞信号转导通路少有拫道。 已知，ruii不但是最强效的血管收缩物质，还是强有效的血 管舒张剂，有报道ruii可以舒张分离自人体的肺小动脉环 11，因此，研究ruii对肺动脉的效应以及其相关的细

11、胞 信号转导通路对于揭示ruii对肺动脉的作用机制方面，特 别是在相关疾病如肺动脉高压的形成与发展过程中的病理 生理学作用方面，显得很有必要。作者此前的研究8，证实ruii是大鼠离体肺动脉干 环的强效血管收缩剂：_logec50=士，emax=(±)%(以60mmo 1/lkc1的收缩幅度为100%),并首次证实其收缩效应部份通 过mapk介导。本研究结果表明ruii收缩大鼠肺动脉干环部份通过pkc通路介导，结合ruii通过pkc，mapk细胞信号 转导通路调节血管平滑肌细胞增生8。相信通过未来进一步的研究，可以逐渐揭示ruii在诸 如低氧肺动脉高压等相关病理生理过程中的作用机制。资

12、助基金项目：浙江省教育厅科学基金2 0020468号 【参考文献】ip earsond,shivelyje, clarkbr,etal. urote nsinil:asomatostatin-likepeptideinthecaudalneurosecret orysystemofnatlaca dsciusa, 1980, 77 (8):50215024.2coulo uarny,l i hrmanni,je gous,etofthecdnaen codingtheurotensinilprecursorinfrogandhumanrevealsintenseexpressionoftheu

13、rotensinllgeneinmotoneuronsofthespinalnatlacadsciusa, 1998，95 (26):1580315808.3liuq,pongs s,zengz,etofuroten sinllastheendogeno usligandfortheorphang-protein-coupledreceptorbiophysre scommun, 1999, 266(1 ): 174178. 4amesrs , sarauhm,chambersj k,etal. humanurotensin-iiisapotentvasoconstrictorandagoni

14、stfortheorphanre ceptor，1999，401:28 2286.5sauzeauvl,mel 1 ionnece, bertog lioj，etal. humanurotensinll-inducedcoalsmoothmusclecelldiatedbyrhoaandres, 6watanabet,ptai. synergisticeff thmildlyoxidizedldascularsmoothmuscl e7chenya-hong,zhntractionandarteriproliferationareme 2001, 88(11):11021104.akalar,

15、katagirit ， eectofurotensinllwilondnasynthesisinv ，2001，104(1): 161 8.aoming-wu,ya0wan-z henetal. thesignal transductionpathwa yintheproliferationofairwaysmoothmus rotensinmedical jou rnal，xx，8陈少贤，薛必成，龚永生， 鼠肺动脉干与mapk相关. xx ,19(10):13651368.9macleanmr,alexan etal .contractilerespon niiinratandhumanpclecellsinducedbyu 117(1):37 41.等.大鼠加压素-ii收缩大 中国病理生理杂志，derd,stirrata ，sestohumanurotensi ulmonaryarteries：e factorsandchronichffectofendothelial ypoxiainthejpharma col, 2000，130(2):20 1 204.lobottrillfe, douglassa, hileycr, etal. humanurotensin-iiisan