大鼠肠管外翻模型对葛根素吸收机制的研究

1、大鼠肠管外翻模型对葛根素吸收机制的研究作者：崔升淼，赵春顺，何仲贵 【摘要】目的建立准确、灵敏、可靠的葛根素高效液相色谱测定方法，研究葛根素是否存在分肠段吸收的差异并 考察肠上皮组织上的p-糖蛋白对葛根素吸收的影响。方法在 不同肠段的肠管外翻模型中加入葛根素krebs液，在不同时间点取样并测定囊内药物浓度，比较不同肠段对葛根素通透 能力的差异，同时观察p-糖蛋白抑制剂地高辛和维拉帕米对 葛根素吸收的影响。结果葛根素在空肠、回肠和结肠的吸收 均具有自身浓度抑制作用。随着p -糖蛋白抑制剂地高辛和 维拉帕米浓度的增大，葛根素的肠黏膜透过性增强，当浓度 分别达到50mg l-1和200m g l-1

2、时，这种作用具有一定 的饱和性。结论葛根素在各肠段的吸收有可能存在主动转运 的过程，葛根素是p_糖蛋白的底物。【关键词】葛根素；肠管外翻模型；吸收；维拉帕米；地高辛）:objectivet,sensitiveandrelia erarin,andtostudyt teristicsofpuerari inalsections(jejunabstractodevelopanaccurate blehplcmethodforpu heabsorptioncharacnindifferentintestum,ileumandcolon)a glycoproteinontheatsacwasused.

3、 sacconbssolutionwasimmerutioncontainingpuensidethesacwascolltrationwasdeterminoxinandverapamilwe fluenceofp-glycopr onofpuerarin. resultheconcentrationofbsorptionacrossint increasedintheratj on,butthereexiteda processforpuerarinheconcentrationofverapamilanddigoxin nacrossintestinalm theratjejunum,i

4、leuheconcentrationofdndtheinfluenceofp- bsorptionevertedgu tainingdrugfreekresedintothekrebssolrarin. thesolutioniectedanddrugconcen edbyhplcmethod. dig reusedtostudythein oteinontheabsorptitswithanincreaseofpuerarin,puerarinaestinalmembranewasejunum,ileumandcol saturabletransport.withanincreaseoft,

5、puerarinabsorptio embraneincreasedinmandcolon,butwhent igoxinandverapamiltheincreasehadasatlusiontheabsorptiowas50and200mg l-1， urableprocess. conenofpuerarinacrossi nactivetransportat coproteintransport er.keywords :puerantestinalsacmaybeaionmediatedbyp-glyrin； evertedgutsac；absorption；erapamil；dig

6、oxin葛根素是从豆科植物野葛中提取的有效成分，有扩张冠 脉、增加冠脉血流量、降低血压、减慢心率、降低心肌耗氧 量等作用1。临床上主要用于治疗冠心病、心绞痛并发呼 吸道和肺部感染、眼底病、心肌炎等多种疾病。葛根素口服 生物利用度差2是其口服给药的一大不足。药物的生物 利用度不高可能是多种因素造成的，其中p-糖蛋白的外排作 用是目前研究较多的因素之一。p-糖蛋白底物具有atp依赖 性的药物外排泵的功能，能将细胞内的药物泵出细胞外使细 胞内的药物浓度降低3。肠管外翻模型在研究p -糖蛋白 对药物吸收的影响因素方面文献报道较多4，因此，本研 究旨在运用肠管外翻模型研究葛根素的吸收机制，探讨各肠 段和

7、p_糖蛋白抑制剂对葛根素吸收的影响。1仪器与材料仪器w aters高效液相色谱仪。药物葛根素；维拉帕米；地高辛；甲醇；其他试剂均为分析纯。动物wistar大鼠，雌雄兼用，体重200220g，沈阳药科大学实验动物中心提供。合格证号：辽实动质字033号。2方法与结果实验模型的建立取三颈烧瓶，加入10 0ml供试液作为供 药体系。实验前将大鼠禁食过夜，用20%的乌拉坦腹腔注射麻 醉。沿腹中线打开腹腔，剪下实验的肠段，去除肠系膜，一 端用细线扎紧，用细玻璃棒轻柔地将肠管翻转使黏膜面朝 外，另一端绑扎于玻璃管一端，用注射器从玻璃管向肠内注 满空白krebs营养液，作为受药体系。然后将其放入三颈烧 瓶中，

8、受药体系液面高于供药体系液面，在烧瓶中通入气体， 整个装置放入37°c恒温水浴中进行实验。分析方法建立 hplc分析条件流动相：甲醇-水；色谱柱：diamonsilc18；检测波长 uv250nm；柱温：40°c；流速：ml*min-l。方法的专属性用空白营养液按“”项下操作，收集肠内溶液。在上述 色谱条件下，考察空白肠内液对葛根素是否有干扰。结果表 明，空白肠营养液中的物质对葛根素色谱峰无干扰。见图1。 标准曲线用营养液分别配制浓度为1，2，5，10，5 0，100和 250mg - l-1的葛根素溶液，于上述色谱条件下测定，将葛根 素色谱峰面积对浓度进行线性回归，所得线

9、性方程即为标准 曲线方程：a=408 05c-5766，r2=9。上述结果表明，葛根素在1250mg l-1浓度范围内，色谱峰面积与浓度呈良好的 线性关系。回收率和精密度用空白营养液按“”项下操作对各肠段进行实验，收集 肠内溶液。以此溶液分别配制浓度为1，5, 50和250mg*l-l 的葛根素溶液，依上法操作，按未知样本随标准曲线同时测 定，计算葛根素的回收率和精密度。1，5, 50和250mg*l-l 的葛根素溶液的回收率分别为，和，其相应的rsd分 别为，和。葛根素在肠营养液中稳定性用空白营养液按“”项下操作对各肠段进行实验，收集 肠内溶液。以此溶液分别配制浓度为1，5, 50和250m

10、g -l-1 的葛根素溶液，置于37°c的水浴中孵育，定时取样，测定葛 根素的浓度。浓度为1，5，50和250mg*l-l的葛根素溶液 在8h内无明显变化，其相应的rsd分别为，和，表 明葛根素在肠营养液中能够稳定存在。葛根素肠吸收实验用krebs营养液配制含有浓度为2, 10，50，10 0和250mg l-1的葛根素营养液对空肠、回肠 和结肠进行实验，并分别于，1，2h取出受药体系溶液进行 hplc测定，并记录体积，同时补充空白krebs营养液。用 含loorng l-1的葛根素营养液配制含有5，20, 5 omg . l-1地高辛溶液和10，10 0, 200mg *l-1维拉

11、帕米溶液，并分别 对空肠、回肠和结肠进行实验，于，1，2h取出受药体系溶 液进行hp lc测定，并记录体积，同时补充空白krebs营养 液。葛根素在各肠段的透过性分别以浓度为2，10，50，10 0和250mg，l-l的葛根素营养液对各肠段进行实验。结果表 明，各肠段对葛根素的透过性在较低浓度时无显著性差异， 而浓度达250mg - l-1时各肠段具有显著性差异；各肠段对 葛根素的透过量与浓度呈非线性关系，提示葛根素在各肠段 的吸收有可能存在主动转运的过程。p-糖蛋白抑制剂对葛根素肠吸收的影响考察了葛根素 浓度为100mg*l-l时不同浓度的地高辛和维拉帕米对葛根 素在各肠段的透过性。结果表明

12、，加入地高辛和维拉帕米后， 葛根素的肠黏膜透过性增加，且当地高辛和维拉帕米达到一 定浓度时，肠黏膜的透药量基本保持不变，因此葛根素的肠 吸收有可能存在主动转运的过程，此主动转运可被地高辛和 维拉帕米抑制，由于地高辛和维拉帕米为p_糖蛋白抑制剂， 因此可以初步确定葛根素肠吸收的主动转运载体可能为p- 糖蛋白，这一载体具有外排泵的作用，可将药物从浆膜侧转 运到黏膜侧。表1地高辛和维拉帕米对葛根素肠吸收的影 响3讨论本实验中曾经采用在体肠循环法和在体单向灌流法两 种方法对葛根素的肠吸收进行了实验，结果发现，葛根素在 大鼠肠黏膜的吸收差，其原因可能是：葛根素的8位碳上链 有一个吡喃葡萄糖，由于空间位阻

13、的原因使其不易透过肠黏 膜；另外，在实验中采用了酚红作为灌流液体积变化的标示 物，有研究表明5，在体肠循环实验中长时间的循环灌流 酚红能够被小肠吸收，平均吸收速率约6% h-1,说明酚红 不适于在体肠循环实验中作为灌流液体积的标示物，否则将 导致药物的固有吸收速率常数偏小，尤其是难吸收的药物。 基于以上原因，本文采用了大鼠肠管外翻法考察了葛根素在 肠黏膜的吸收性质。在肠管外翻模型中，测定的是药物从肠黏膜侧到浆膜侧 的透过量，这直接反映了药物在肠黏膜细胞层中的转运过程 主要包括：主动转运、促进扩散、被动扩散和胞饮作用，但 前两者均需要有载体参与，因而该种转运过程存在饱和性。 实验结果表明，葛根素

14、在肠黏膜的透过性受浓度的影响，存 在着自身浓度抑制作用，可知葛根素在肠黏膜的转运除被动 扩散外，还可能存在主动转运过程。地高辛和维拉帕米是p-糖蛋白的抑制剂，二者可抑制肠 黏膜p-糖蛋白的活性，从而增加药物的吸收，但这种抑制作 用存在着一定的饱和性，这正与本文实验结果相一致，从而 进一步证明葛根素经肠黏膜的转运存在外排泵p-糖蛋白的作用。【参考文献】1 吴凯.葛根素注射液的临床应用j.天津药学， 2002，14(6)： 14.2 张志荣，游学均，魏振平，等.愈风宁心胶囊在兔体 内的药动学和生物利用度研究j.中国药学杂 志，1997,32 (4):224.3 彭文兴，汪新亮，李焕德.体内药物相互作用新位点