大鼠腺性膀胱炎的模型建立及尿流动力学检查

1、大鼠腺性膀胱炎的模型建立及尿流动力学检查王先海丁才学(湖北省公安县中医院湖北公安434300)【摘要】目的研究一种发病机制、病理改变与临床相似的sd大鼠腺性膀胱炎模 型制备方法与技术，并同时探讨腺性膀胱炎的致病因素。方法将90只sd雌性 大鼠随机分成a、b、c、d、e5组。45d后行尿流动力学检查，随后收集膀胱标 木进行病理学检查。结果a组sd大歐尿流动力学检查提示储尿期膀胱逼尿肌 不稳定，与b、c、d、e组相比有显著的差异(p<0.001)。a组膀胱标木的腺 性膀胱炎发生率显著高于b、c、d、e组(p<0.001); b、c、d、e组腺性膀胱 炎发生率差异没有显著

2、性意义(p&gt；0.05)o结论使用大肠杆菌多次膀胱灌注 雌性sd大鼠能诱导产生的腺性膀胱炎动物模型，尿流动力学检查可以作为评估 腺性膀胱炎机能学改变的方法之一。【关键词】腺性膀胱炎大肠埃希菌尿流动力学腺性膀胱炎是一种在膀胱黏膜和黏膜下层发生黏液腺增生的疾病，是膀胱尿路上皮受慢性刺激诱导产生的一种化生性改变1。腺性膀胱炎的病因目前 仍然未明确，多数研究2,3认为膀胱慢性感染、梗阻、结石、异物等慢性刺激是 腺性膀胱炎的病因。为进一步研究腺性膀胱炎的致病原因，木实验力求在腺性膀 胱炎的3种主要可能的致病因素中寻找主要的致病因素，并对各组大鼠行尿流动 力学检查，确立应用尿流动力学评估腺性膀

3、胱炎动物模型的可能性。1材料与方法1.1实验动物及材料成年雌性健康sd大鼠90只，体重(240±25g),由平中科技大学同济医学院实验动物学部提供,分笼例养，自 由饮水，适应性饲养1周。dh5α大肠埃希菌菌种由华中科技大学同济医学 院附属同济医院检验科提供。结石粉末取自同济医院泌尿外科泌尿系结石患者 pcn碎石后收集的结石,研磨成粉末。1.2实验方法1.2.1将90只sd雌性大鼠随机分成a、b、c、d、e5组。a、b、c、d 组各20只，e组10只。a组：每隔2d经尿道向膀胱内灌注dh5α大肠埃 希菌的溶液0.2ml,共15次，正常

4、饮食。b组：隔2d经尿道向膀胱内灌注结石 粉末加生理盐水混悬液，共15次。c组：行下尿路梗阻术后饲养45d。d组：隔 2d向膀胱内灌注生理盐水，共15次。b、c组动物饮水中按照每500ml水加入 16万单位庆大霉素液。e组：标准饲养45d,不做任何干预。1.2.2大肠埃希菌溶液的制备在无菌条件下从-70°c冰箱取出 dh5α大肠杆菌菌种，挑起菌种接种在装奋5ml / lb培养液的无菌离心试管 中，置于37°c恒温摇床，转速150转/分。10小吋后用分光光度仪测定人肠杆菌 的浓度，保持浓度在108109cfu/100μl。1.2.3结石粉末生

5、理盐水混悬液的制备将人泌尿系结石研磨至粉末状， 加入生理盐水，摇匀备用。1.2.4膀胱内灌注方法1%的戊巴比妥钠按照30mg / kg体重腹腔注射 麻醉sd大鼠，仰卧固定后常规消毒会阴部。将无菌硬膜外导管用无菌液体石蜡 润滑后提起尿道外口的皮肤，沿尿道后壁插入尿道3cm以上。通过抽吸导管排 除大鼠残余尿液，分别用lml注射器向大鼠膀胱注入0.2ml大肠埃希菌溶液（a 组）、0.2ml结石粉末生理盐水混悬液（b组），0.2ml生理盐水（d组），然后退 出导管，将大鼠放入鼠笼等待自然苏醒。1.2.5下尿路梗阻模型的建立参照文献3的方法，用3-0可吸收线经sd 大鼠阴道前壁缝扎悬吊尿道，松紧以硬膜外

6、导管可以上下滑动为适度。然后退出 导管，将大鼠放入鼠笼等待自然苏醒。1.2.6灌注15次，45天后将所有大鼠用25%乌拉坦溶液按l.og / kg的 剂量麻醉下将硬膜外导管消毒液体石蜡润滑后插入大鼠膀胱，大约距尿道外u 3cm,轻轻按压膀胱区排除残余尿液，接微量泵，将膀胱灌注流量调为0.3ml / min, 用尿流动力学仪，测量各组大鼠的尿流动力学改变。根据结果比较并判定。1.2.7将各组大鼠用25%乌拉坦溶液按l.og / kg的剂量麻醉下仰卧固定， 剪开会阴部皮肤，提起人歐膀胱底部，逆行分离致尿道近端剪断，取出膀胱后观察膀胱的大体形态后迅速将膀胱体部和膀胱三角处标本通过固定、脱水、透明、

7、浸蜡、包埋蜡块、切片、展片、he染色。做好切片，置于10倍放大镜下观察膀 胱粘膜固有层是否有腺体样结构、囊腔和bmnn巢。1.2.8统计学处理用spss11.0统计软件进行统计学分析，各组间比较 采用&chi;2检验，以p<0.05为显著性标准。2结果2.1尿流动力学检查结果观察表1排尿压测定结果和膀胱最大容量测定结果5组动物排尿压和动物膀胱最大容量没有显著的差异。用x2检验计算p<0.001，按&alpha;=0.05，人肠杆菌组储尿期不稳定膀 胱图形显著高于对照组。2.2膀胱大体病理观察取标本过程中观察各组大鼠膀胱大体形态和膀 胱三角区黏膜大体外观，发现a组5只

8、大鼠膀胱增大，膀胱壁明显增厚，20只 大鼠膀胱三角区黏膜全部明显充血，未见明显滤泡和绒毛。b组大鼠膀胱外观大 致正常，18只sd大鼠膀胱内有明显膀胱结石存在，其中6只膀胱三角区黏膜奋 充血表现。c组人鼠膀胱冇16只膀胱体积明显增大，所冇大鼠膀胱三角区黏膜 光滑，颜色均一淡红。d组大鼠膀胱外观正常，膀胱三角粘膜16只与空白组粘 膜类似，4只膀胱三角区有充血表现。e组大鼠膀胱外观正常，膀胱三角粘膜光 滑，颜色均一淡红。2.3膀胱三角粘膜显微镜下病理改变a组：所有大鼠膀胱黏膜均有炎 性细胞浸润，15只（75%）膀胱三角区黏膜固有层出现bmrw巢及囊腔，其中5 只（25%）同时出现腺体样结构。b组：6

9、只（30%）可见膀胱三角区冇少许炎性 细胞浸润，其中1只（5%）可见黏膜固有层出现brurw巢及囊腔。c组：膀胱粘 膜正常，细胞大小一致，未见bruun巢，腺体细胞和炎症细胞浸润。d组：15 只膀胱三角粘膜正常，细胞大小一致，冇5只膀胱三角冇少许炎症细胞浸润，在这其中有2只有brunn巢和囊腔。e组:膀胱粘膜正常，细胞大小一致，未见bruun 巢，腺体细胞和炎症细胞浸润。大肠杆菌试验组（a组）与苏他组相比，出现腺 性膀胱炎改变的比例明显增多，统计学上有显著性差异；而b、c、d、e组相比， 无显著性差异。3讨论腺性膀胱炎是膀胱移行上皮化生为腺性上皮，但是腺性膀胱炎的病因并 没有完全明确。一般学者

10、认为长期慢性感染刺激因素导致膀胱粘膜固奋层出现腺 性膀胱炎改变。腺性膀胱炎的发生与发展是一个渐变的过程：移行上皮单纯增生 -brunn芽一bmrw巢一囊性膀胱炎一腺性膀胱炎4。本实验旨在从腺性膀胱炎的3种主要可能的致病因素中寻找主要的致 病因素。实验发现膀胱内灌注大肠杆菌导致5只大鼠出现膀胱壁增生肥厚、15 只膀胱三角区黏膜固有层出现bmnn巢、囊腔，其中冇5只同吋出现腺体样结构； 而在抗生素预防下结石组中有1只有brunn巢和囊腔发生，下尿路梗阻组则未见 腺性膀胱炎发生。而生理盐水对照组其中奋2只有brunn巢和囊腔发生。正常对 照组则未见异常。证实了大肠埃希菌的慢性感染是导致腺性膀胱炎的主

11、要病因, 下尿路梗阻以及结石刺激可能是继发感染，间接导致腺性膀胱炎的发生。该模型的成功构建为腺性膀胱炎的病因预防起到指导性作用，冋吋为腺 性膀胱炎的诊断和药物治疗的研究提供了与人类的腺性膀胱炎临床表现、病理特 点具有很大的相似性的动物模型，特别是确立了腺性膀胱炎动物模型的尿流动力 学检查方法，为腺性膀胱炎的动态观察和治疗效果的评估提供了一个可供选择的 方法。参考文献1erturke, erturk e, sheinfeld j,et al. metaplastic cystitis complicated with vonbrunn nests, cystitis cystica, and intestinal type of glandular metaplasia j】.urology， 1988 aug, 32（2）:165-167.2】闽立贵，牛宏伟.腺性膀胱炎（附172例报告）.中华泌尿外科杂志，2003, 24 (5)： 308-310.3l0pez-beltran a, cheng l, andersson l,etal. preneoplastic non-papillarylesionsand