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文档简介
1、 一、微生物 1微生物的培养及其利用 (1)消毒是杀死物体表面或内部一部分有害的微生物;灭菌则是杀死物体内外所有的微生物。 (2)选择培养基上一般只能生长特定的目的微生物,而鉴别培养基可以存在其他种类微生物且能鉴别特定微生物。 (3)微生物最常用的碳源是糖类,最常用的氮源是氨盐、硝酸盐。 (4)微生物的纯化与分离一般用平板划线法、稀释涂布平板法,微生物数目统计用稀释涂布平板法。第1页/共27页 (5)无菌技术 高温加热灭菌,其原理就是使细菌体内蛋白质变性,而达到杀灭细菌的作用。 化学药剂的灭菌消毒方法,其作用原理是使细菌体内蛋白质变性,但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内,因此化
2、学方法难以消灭孢子和芽孢。 体积分数为70%的乙醇杀菌效果最强。浓度过低,杀菌力弱;浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其内,杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿,则可选择75%的酒精进行消毒。第2页/共27页 灭菌的目的:无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还能有效避免操作者自身被微生物感染。 培养基的制作是否合格的验证:如果未接种的培养基在恒温箱中保温12天后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则需要重新制备。第3页/共27页 2生物技术在食品加工及其他方面的应用 (1)在发酵技术中要应用到微生物,果酒制作的主要菌种是酵母菌,果醋制作的主
3、要菌种是醋酸菌,腐乳制作的主要菌种是毛霉、酵母、青霉、曲霉,泡菜制作的主要菌种是乳酸菌。 (2)果酒制作时,葡萄汁装入发酵瓶时,要留1/3的空间,目的是让酵母菌大量繁殖,但发酵时一定要严格密封,否则将产生醋酸;果醋制作时,应适时的通入空气;泡菜制作时则需封坛发酵。 (3)为防止发酵液被污染,发酵瓶要用70%酒精消毒。第4页/共27页 (4)腐乳的制作时豆腐含水量以70%为宜,配制卤汤时酒量一般应控制在12%左右。腌制腐乳时,随着豆腐层的加高增加盐的用量。 (5)植物组织培养中,先使用生长素,后使用细胞分裂素,有利于细胞分裂,但细胞不分化。 (6)生长素用量比细胞分裂素用量,比值高时,有利于根的
4、分化、抑制芽的形成。第5页/共27页 1酵母菌是一种真菌,与人们的日常生活密切相关,也是现代技术研究常用的模式生物,请回答: (1)土壤中富含各种微生物,将其浸出液接种到特定培养基上,可得到酵母菌,这一过程叫做_,这种特定培养基可称为_。 (2)用酵母菌发面做馒头时,在发酵的面团里加入一些纯碱的主要作用是_。 (3)制作果酒时,将酵母菌加入到葡萄汁中,控制好发酵条件,10 d后得到散发着酒香的成品,此过程的原理是_。第6页/共27页 (4)苹果醋也是受现代人所青睐的健康饮品之一,其生产过程中则利用了代谢类型为_的_的发酵作用,该过程需要控制的温度条件是_。 解析:土壤浸出液接种到特定培养基上,
5、可得到酵母菌,这属于酵母菌的分离,所用的特定培养基为选择培养基。用酵母菌发面做馒头时,酵母菌呼吸作用产生二氧化碳,二氧化碳溶于水形成碳酸,发酵的面团里加入一些纯碱可中和碳酸。酵母菌酿酒是利用酵母菌无氧呼吸能产生酒精。果醋是醋酸菌的发酵产物,发酵温度为3035 ,醋酸菌的代谢类型为异养需氧型。 答案:(1)酵母菌的分离选择培养基(2)中和发酵时产生的酸类物质(3)在无氧条件下,酵母菌进行酒精发酵(4)异养需氧型醋酸菌3035 第7页/共27页 二、酶的应用 1探究温度和pH对酶的影响实验过程中,应先将底物或酶溶液处理成相应的温度或pH,再将底物与酶混合。 2在探究酶的最适温度或pH时,温度梯度或
6、pH梯度不能设置得太大,否则就算某种温度下反应最快,也不能称为最适温度或最适pH。 3果胶酶和纤维素酶都是复合酶,并不特指某一种酶,而是一类酶的总称。 4固定化细胞使用的都是活细胞,在应用时要注意为其提供适宜的生存条件,故固定化酵母时,海藻酸钠溶化后需冷却后再与酵母液混合。第8页/共27页 5影响果胶酶活性的实验设计技巧 在设计实验检验影响果胶酶活性的因素时,要注意以下几点: (1)无论是研究温度,还是研究pH对酶活性影响时,注意设置合适的梯度。 (2)实验时,要保证酶促反应在恒温或恒定酸碱度的条件下进行,否则,会影响实验结果。 (3)必须设计对照实验,这就要求在实验中,所用一切试剂,包括蒸馏
7、水,都要做到量的一致性,保证唯一变量,尽量避免干扰因素。 (4)梯度实验是无法得到酶的最适温度或最适酸碱度的,只能得到一个大致的适宜范围。第9页/共27页 2实验研究pH对酶活性的影响,准备5支含有等量胃蛋白酶溶液但pH各不相同的试管,每支试管加1块1 cm3的正方体凝固蛋白块,试管均置于25 室温条件下,将各试管中蛋白块消失的时间记录于下表: (1)酶活性最强时的pH是_。 ( 2 ) 蛋 白 块 消 失 的 时 间 与 酶 活 性 强 弱 的 关 系 是 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。第10页/共27页 (3)请以两种方法改进实验,使实验在更短的时
8、间内完成: _; _。 (4)在人体消化道中,能分泌这个实验中酶的部位是_。 (5)为了确认蛋白块的消失是由于酶的作用,还需要对该实验如何设计? _。 解析:本题考查了酶活性的影响条件及其实验设计。在其他条件相同的情况下,利用酶的特性和有关生物学知识,设计一定的浓度梯度进行对照,记录酶分解完蛋白块的时间,判断蛋白酶的适宜pH。第11页/共27页 答案:(1)2.0(2)酶活性越大,蛋白质分解越快,蛋白块消失的时间越短(3)将题干所给温度由25 升高至大约37 将原题中正方体蛋白块处理得更小(如切成0.50.50.50.125 cm3)(4)胃(5)另增加一支试管,放入等量的蛋白块,并且将pH调
9、得适当,但不加酶溶液第12页/共27页 一、测定微生物数量的方法 1显微镜直接计数法 (1)原理:利用特定细菌计数板或血球计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 (2)方法:用计数板计数。 (3)缺点:不能区分死菌与活菌。第13页/共27页 2间接计数法(活菌计数法) (1)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少个活菌。 (2)方法:平板划线法、稀释混合平板法、稀释涂布平板法。 (3)缺点:当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的是一个菌落。 (4)注意事项:设置重复组,增强实验
10、的说服力与准确性。为了保证结果准确,一般选择菌落数在30300的平板进行计数。 第14页/共27页 1(2013年崇文模拟)请回答下列与大肠杆菌有关的问题: (1)从生态系统的成分上看,大肠杆菌属于_;它的同化作用类型是_。 (2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。 将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1 000 mL。根据用途划分该培养基属于_培养基(选择、鉴别)。该培养基中的碳源是_。第15页/共27页 (3)培养大肠杆菌时,常用的接种方法是平板划线法和_。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行_。 (4)现有一升水样,用无菌吸管吸取1 mL水样至盛有9 mL无菌水的试管中,
11、依次稀释103稀释度。各取0.1 mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养,记录的菌落数分别为55、56、57,则每升原水样中大肠杆菌数为_。 (5)以下微生物发酵生产特定产物时,所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是(多选)_。 A制作果酒B由果酒制作果醋 C制作泡菜 D制作腐乳第16页/共27页 (6)利用培养基不仅可以分离培养微生物,也可以进行植物组织培养。与微生物培养明显不同的是,用于组织培养的培养基中还需要加入_。 解析:(1)大肠杆菌不能制造有机物,必须利用现成的有机物来合成组成自身的物质,属于异养型生物,在生态系统中主要分解有机物,属于分解者。(2)根据表中培养基
12、的组成可看出,该培养基中的碳源是乳糖、蔗糖(蛋白胨),由于在培养基中添加了显色剂,可判断此培养基为鉴别培养基。(3)培养大肠杆菌等微生物时,常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行灭菌。(4)根据公式计算:每升原水样中大肠杆菌数(555657)30.11031035.6108。 第17页/共27页 (5)制作果酒用到的微生物是酵母菌,属于真核生物;由果酒制作果醋和制作泡菜用的微生物分别是醋酸菌和乳酸菌,二者都是原核生物;制作腐乳用到的微生物是霉菌,属于真核生物,而大肠杆菌属于原核生物。(6)植物组织培养与微生物培养明显不同的就是,组织培养的培养基中还需
13、要加入植物激素(主要是生长素和细胞分裂素,作用是诱导根、芽的分化)。 答案:(1)分解者异养型(2)鉴别乳糖、蔗糖(蛋白胨)(3)稀释涂布平板法灭菌(4)5.6108(5)BC(6)植物激素(或生长素和细胞分裂素)第18页/共27页 二、PCR技术及植物组织培养 1比较细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR)第19页/共27页第20页/共27页 2.分离DNA、PCR技术、分离蛋白质三者比较第21页/共27页 3.归纳外植体污染的原因 植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差,对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长,如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受
14、到微生物的污染,就会导致实验前功尽弃,因此要进行严格的无菌操作。 (1)培养材料的取材应很好地加以选择,老的材料比幼嫩的材料带菌多,田间比温室生长的材料带菌多。第22页/共27页 (2)消毒材料不彻底,植物组织只能进行表面灭菌,对材料内部所带的细菌、霉菌等杂菌往往难以对付,可在培养基中添加抗生素解决。 (3)人为污染,如使用未消毒工具或呼吸排出细菌;手接触材料或器皿边缘,使用过操作器具未消毒而再继续使用,造成交叉污染;接种室空气污染,使真菌孢子在培养基上繁殖。第23页/共27页 2多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。请回答下列有关PCR技术的基本原理及应用问题。 (1)
15、DNA的两条链是反向平行的,通常将_的末端称为5端,当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后,DNA聚合酶就能从引物的_开始延伸DNA链。 (2)PCR利用DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题,但又导致了DNA聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代,科学家从一种Taq细菌中分离到_,它的发现和应用解决了上述问题。要将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来,所用的培养基叫_。 (3)PCR的每次循环可以分为_三步。假设在PCR反应中,只有一个DNA片段作为模板,请计算在5次循环后,反应物中大约有_个这样的DNA片段。第24页/共27页 解析:(1)DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已经存在的核酸的3羟基上,与DNA母链结合的RNA引物就提供这个羟基。(
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