课题1菊花的组织培养

1、椒草的叶片长成新植株椒草的叶片长成新植株 大自然中存在着许多有趣的植物无性生殖大自然中存在着许多有趣的植物无性生殖现象。现象。导入新课导入新课马铃薯块茎发芽生根马铃薯块茎发芽生根 这些现象引起了科学家的兴趣，这些现象引起了科学家的兴趣，促使他们去思考、解释。促使他们去思考、解释。 1902年，一位德年，一位德国的植物学家大胆地国的植物学家大胆地预言：预言：“植物的体细植物的体细胞在一定条件下，可胞在一定条件下，可以如同受精卵一样，以如同受精卵一样，具有潜在的发育成植具有潜在的发育成植株的能力株的能力。” 1958年，年， 美国美国科学家斯图尔德将胡科学家斯图尔德将胡萝卜韧皮部的一些细萝卜韧皮部

2、的一些细胞进行培养，由于细胞进行培养，由于细胞分化而最终发育成胞分化而最终发育成完整的新植株。完整的新植株。 这个实验结果在生物学界引起了很大的轰这个实验结果在生物学界引起了很大的轰动，它表明已经高度分化的植物细胞仍然具有动，它表明已经高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的能力。发育成完整植株的能力。 已经分化的细胞所具有的这种潜在发育能已经分化的细胞所具有的这种潜在发育能力称作力称作细胞全能性细胞全能性。 这个科学发现使得科学家开始这个科学发现使得科学家开始思考：既然胡萝卜的单个细胞能发思考：既然胡萝卜的单个细胞能发育为完整植株，小块的植物组织就育为完整植株，小块的植物组织就更不应该有什

3、么问题。更不应该有什么问题。 经过很多年的研究，如今植物组织培养经过很多年的研究，如今植物组织培养已经不再神秘，而发展成为一项常规技术。已经不再神秘，而发展成为一项常规技术。课题课题1菊花的组织培养菊花的组织培养专题专题3 植物的组织培养技术植物的组织培养技术知识与能力知识与能力 说明植物组织培养的原理，熟悉植物组织说明植物组织培养的原理，熟悉植物组织培养的基本过程，了解影响植物组织培养的各培养的基本过程，了解影响植物组织培养的各种因素，掌握植物组织培养的基本技术。种因素，掌握植物组织培养的基本技术。教学目标教学目标过程与方法过程与方法进行菊花或其他植物的组织培养。进行菊花或其他植物的组织培养

4、。情感态度与价值观情感态度与价值观 了解植物组织培养技术在生产中了解植物组织培养技术在生产中的应用价值。的应用价值。植物组织培养过程中使用的无菌技术。植物组织培养过程中使用的无菌技术。重点与难点重点与难点一、一、 基础知识基础知识1、植物组织培养的基本过程、植物组织培养的基本过程（1）细胞分化）细胞分化 植物组织植物组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织菊花叶片的愈伤组织菊花叶片的愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织胡萝卜的愈伤组织胡萝卜的愈伤组织细胞排列疏松而无规则细胞排列疏松而无规则, ,是高度液泡化的、是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。成无定形状态的薄壁细胞。（2）植物细胞的脱分化）

5、植物细胞的脱分化（3）植物细胞的再分化）植物细胞的再分化离体的植物离体的植物器官、组织、器官、组织、细胞细胞脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织再分化再分化根、芽根、芽植植物物体体植物组织培养过程示意图植物组织培养过程示意图2、影响植物组织培养的因素、影响植物组织培养的因素（1）植物材料的选择）植物材料的选择不同不同的植的植物组物组织培织培养的养的难易难易程度程度差别差别很大很大未开花的菊花植株未开花的菊花植株（2）相对特殊的营养、环境等条件，适）相对特殊的营养、环境等条件，适宜的培养基宜的培养基ms培养基主要成分包括：培养基主要成分包括：大量元素：大量元素：n、p、k、ca、mg 、s等等微量元素：

6、微量元素：b、mn、cu、zn、fe、mo、i、co等等有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素植物激素 你能说出各种营养物质的作用吗？同你能说出各种营养物质的作用吗？同专题专题2中微生物培养基的配方相比，中微生物培养基的配方相比，ms培培养基的配方有哪些明显的不同？养基的配方有哪些明显的不同？ 答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为

7、了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主，微生物培养基以有机营养为主，ms培养基则需培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。须的大量元素和微量元素两大类。（3）植物激素）植物激素常用的植物激素：常用的植物激素：等。等。生长素类：生长素类：2，4二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（2，4d）、吲哚乙）、吲哚乙酸（酸（iaa）、萘乙酸（）、萘乙酸（naa）、吲哚丁酸（）、吲哚丁酸（iba）细胞分裂素类：

8、细胞分裂素类：激动素（激动素（kt）、）、6苄基嘌呤（苄基嘌呤（ 6ba）、玉米素（）、玉米素（zt）赤霉素类：赤霉素类：赤霉酸（赤霉酸（ga3）等。）等。作用：作用： 启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。 在在生长素生长素存在的情况下，存在的情况下，细胞分裂素细胞分裂素的作用呈现的作用呈现加强加强的趋势。的趋势。使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素，后使先使用生长素，后使用细胞分裂素用细胞分裂素有利于细胞分裂，但有利于细胞分裂，但不利分化不利分化先使用细胞分裂素后先使用细胞分裂素后使用生长素使用生长素细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化同时

9、使用同时使用分化频率高分化频率高 按不同顺序使用这两种激素，会得到不按不同顺序使用这两种激素，会得到不同的实验结果同的实验结果（4）其他因素）其他因素菊花组织培养：菊花组织培养：ph控制在控制在5.8左右，温度控制在左右，温度控制在1822每日用日光灯照射每日用日光灯照射12h二、二、 实验操作实验操作1、制备、制备ms固体培养基固体培养基 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。不必添加植物激素。2、外植体消毒、外植体消毒选取生长旺盛的菊花茎段嫩枝选取生长旺盛的菊花茎段嫩枝刷洗刷洗流水冲洗流水冲洗20min吸干表面水分吸干表面水分70的酒

10、精消的酒精消毒毒67s无菌水清洗无菌水清洗吸干表面水分吸干表面水分0.1的氯化汞溶液的氯化汞溶液 12min无菌水清洗无菌水清洗3次次3、接种、接种工作台使用前用工作台使用前用70%酒精消毒；每次使用器械酒精消毒；每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。后，都需要用火焰灼烧灭菌。插入菊花茎段时应注意方向，不要倒插。插入菊花茎段时应注意方向，不要倒插。每瓶接种每瓶接种68块外植体，接种后，将封口膜重块外植体，接种后，将封口膜重新扎好。新扎好。你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置

11、对照实验可以取用一以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。明培养基制作合格，没有被杂菌污染。思考思考4、培养、培养 无菌箱定期消毒，培养温度控制在无菌箱定期消毒，培养温度控制在18-22，每日光照每日光照12h。5、移栽、移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过用流水清洗根部

12、的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。6、栽培、栽培适时浇水、施肥，直至开花。适时浇水、施肥，直至开花。视频一：视频一：菊花的组织培养菊花的组织培养1视频二：视频二：菊花的组织培养菊花的组织培养2三、三、 结果分析与评价结果分析与评价1、对接种操作中污染情况的分析、对接种操作中污染情况的分析 接种接种3-4天后，在接种操作中被杂菌污染的天后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。培养物会表现出被污染的现象。 适时统计污染率，分析接种操作是否符合适时统计污染率，分析接种操作是否符合无菌要求。无菌要求。2、是否完成了对植

13、物组织的脱分化和再、是否完成了对植物组织的脱分化和再分化分化 观察实验结果，看是否培养出愈伤组织，记观察实验结果，看是否培养出愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织。录多长时间长出愈伤组织。 统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间。和芽的比例和时间。3、是否进行了统计、对照与记录、是否进行了统计、对照与记录4、生根苗的移栽是否合格、生根苗的移栽是否合格统计自己移栽的成活率，看移栽是否合格。统计自己移栽的成活率，看移栽是否合格。四、四、 课题延伸课题延伸 一般来说，容易进行无性繁殖的植物，一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养。也容

14、易进行组织培养。如：如：月季月季 秋海棠秋海棠芦荟芦荟基础基础知识知识实验操作实验操作植物组织植物组织培养的基培养的基本过程本过程细胞分化细胞分化影响因素影响因素外植体消毒外植体消毒培养培养脱分化脱分化植物材料植物材料再分化再分化概念概念培养基培养基制备制备ms培养基培养基移栽移栽菊菊花花的的组组织织培培养养 其他因素其他因素配制母液配制母液接种接种植物激素植物激素结果分析与评价结果分析与评价课题延伸课题延伸特点特点愈伤组织愈伤组织配置培养基配置培养基灭菌灭菌栽培栽培课堂小结课堂小结 1. 答：植物组织培养所利用的植物材料体积答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，组织培养的培养基同样适合于某些微生物