222动物细胞融合与单克隆抗体

1、一、动物细胞融合一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用一、动物细胞融合1、概念：、概念：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程2、原理：、原理：细胞膜的流动性3、动物动物细胞细胞融合融合的过的过程：程：诱导方式诱导方式物理法：离心、振动、电刺激物理法：离心、振动、电刺激化学法：聚乙二醇作诱导剂化学法：聚乙二醇作诱导剂生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒细胞细胞a细胞细胞b杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的思考讨论：为什么

2、细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？病毒需要灭活？丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性 （诱导细胞融合）（诱导细胞融合）3、动物动物细胞细胞融合融合的过的过程：程：有何同？不同？比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）

3、物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体 抗体是机体受抗原刺激后产生抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。 效应效应b细胞产生抗体。细胞产生抗体。什么是抗体？什么是抗体？b淋巴细胞受抗原刺激后，分化淋巴细胞受抗原刺激后，分化产生的效应产生的效应b细胞可以产生抗体。细胞可以产生抗体。动物体内的效应动物体内的效应b细胞可以产生细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性

4、免疫作用。原具有特异性免疫作用。每一个效应每一个效应b细胞只能产生一种细胞只能产生一种抗体。抗体。 抗体抗体抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激效应效应b抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一效应筛选单一效应b细胞细胞不能增值，产生大量抗体不能增值，产生大量抗体产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏 由单个效应由单个效应b细胞经过无性繁殖细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为异性强的抗体称为单克隆抗体单克隆抗体。 特点：特点：特

5、异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 1、单克隆抗体概念：、单克隆抗体概念： 利用淋巴细胞产生抗体的功能利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞交瘤细胞设计方案：设计方案：一个效应一个效应b b细胞只分泌一种特异性抗体细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖- -化学性质单一、特异性强的抗体化学性质单一、特异

6、性强的抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞 ？ ？诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？ 能产生特能产生特定抗体定抗体筛选筛选 相应抗原相应抗原 效应效应b细细胞胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞筛选筛选 2、单克隆抗体、单克隆抗体制备过程制备过程：aa型、型、bb型型ab型杂交瘤细胞型杂交瘤细胞 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原效应效应b细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗

7、体生物体生物体思考：思考：1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与效应、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与效应b细胞融细胞融合？合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有效应质，不仅具有效应b细胞分泌抗体的能力，而且还有无细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，

8、灵敏度高，优越性十分明显灵敏度高，优越性十分明显。应用主要有：应用主要有：1、用作诊断试剂、用作诊断试剂2、作为载体，运载抗癌药物，形成、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”治疗肿治疗肿瘤瘤资料资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以

9、鉴别和定位体内位体内“病灶病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。踪及心肌梗塞的诊断。3、单克隆抗体、单克隆抗体的应用的应用：小结小结两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高强、灵敏度高 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实

10、验方案3、图中、图中b为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_2、a是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_4、c过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体效应效应b细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50b体外培养体外

11、培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔ac生物体生物体1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）a动物细胞融合动物细胞融合b胚胎移植胚胎移植c动物细胞培养动物细胞培养d核移植核移植在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）确的是（）a结果是相同的结果是相同的b杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同c操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同d诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和b淋巴细胞