植物生物学实验_二_2根系活力的测定a-萘胺氧化法

1、实验二、根系活力的测定实验二、根系活力的测定 a a- -萘胺氧化法萘胺氧化法 植物生物学实验(二)植物生理学基础与综合实验一、实验目的一、实验目的 了解根系活力的生理意义； 掌握a-萘胺氧化法, 测定根系活力的原理与方法。 掌握分光光度计的使用过程和注意事项二、实验原理二、实验原理（一）植物根系的生理功能: 输导 固着 合成 贮藏根系吸收无机盐的过程：根系吸收无机盐的过程： 部位：根尖根尖，根毛区最活跃。 步骤1.呼吸释放co2；2.形成h2co3；3.h+与hco3 -吸附在根表面。4.溶液中阴阳离子分别与hco3 -、 h+交换。5.吸收，进入根内部。6.运输。 根系活力即根的生长情况和

2、代谢水平。它直接影响植物地上部的生长和营养状况以及产量。 植物根系中的过氧化物酶能氧化-萘胺，生成红色的-羟基-1-萘胺，并沉淀于根表面，将根系染成红色。 一般来说根呼吸强度越大，即该酶的活力越强，对-萘胺的氧化力也越强，染色也越深。 可以根据根系表面着色深浅，观察并判断根系活力大小，也可通过测定溶液中未被氧化的-萘胺的量，以测定根系活力。（二）根系活力的意义与测定方法（二）根系活力的意义与测定方法定性观察定性观察 根系表面红色越深，说明根系活力越强。定量测定定量测定 剩余的-萘胺在中可与对氨基苯磺酸（sulfanil-amide）和亚硝酸盐作用生成稳定的红色偶氮染料。定量测定定量测定对-苯磺

3、酸-偶氮-萘胺生成的红色偶氮化合物在ph 7.0时在处有最大吸收峰，可用分光光度法测定光吸收值，从而利用此反应来间接测定溶液中-萘胺的量。 注意：注意： od510越大-萘胺剩余越多根系活力越弱 反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以反应需要在相同条件下进行。三、实验材料与仪器设备 （一）实验材料 水稻(oryza sativa l.)等水生植物的须根系。 （二）仪器与用品 分光光度计、天平、恒温培养箱、三角烧瓶、量筒、移液管、剪刀、玻棒。（三）试剂 -萘胺溶液：先用少量的95%，然后加水定容。分别配制50

4、 g/ml、25 g/ml溶液。 0.1 mol/l磷酸缓冲液，ph 7.0。 1%对氨基苯磺酸溶液：溶解于30%的溶液中。 0.01%亚硝酸钠溶液。四、实验步骤 ：处理：1. 挖取处于不同生长状态的须根系植株（如水稻、豌豆苗根系等）数株，洗净根部后再用滤纸吸去根上附着的水分。2.观察观察 将植株根系浸入盛有25 g/ml -萘胺溶液并用黑纸包裹的容器中，静置24-36小时后观察根系着色情况。 比较不同植株根系活力大小，并与植物生长势比较，分析植物生长势与根系活力之间的关系。 （二）定量测定（二）定量测定 取50 g/ml 的-萘胺溶液和0.1 mol/l ph 7.0的磷酸缓冲液各25 ml

5、，置于三角瓶中，混匀。 称取根系2 g浸没于三角瓶中的溶液中。 同样地，取50 g/ml的-萘胺溶液和0.1 mol/l ph 7.0的磷酸缓冲液各25 ml，置于另一三角瓶中，混匀，不放根系作为对照。步骤步骤1、实验处理、实验处理步骤步骤2、实验初始值测定、实验初始值测定 5min后，分别从两瓶中各取2 ml溶液，按照步骤4作。 记录od（实验组）与od0（对照组）。步骤步骤3、实验终了值测定、实验终了值测定 将两三角瓶置于25恒温箱中避光保温60min后，各取2 ml ，按照步骤4作第二次测定。 记录 od（实验组）与od0（对照组）。步骤步骤4、a a-萘胺含量测定萘胺含量测定 取2 m

6、l培养液加10 ml水混匀，再加入1 ml对氨基苯磺酸溶液与1 ml亚硝酸钠溶液，混匀，观察溶液颜色变化，再定容至25 ml。 室温25min后，于510nm处测定吸光度（od）值。步骤步骤5标准曲线制作：标准曲线制作： 以50 g/ml的-萘胺溶液为母液，配置40、30、20、10、5、0 g/ml的溶液各10 ml。 各取2 ml，按照步骤3分别反应，并测定od值。以od值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制-萘胺溶液的标准曲线。或者根据浓度与od值关系直接计算回归方程。6换算浓度换算浓度 分别查对标准曲线，或利用回归方程直接计算出实验组与对照组溶液实验前后对应的-萘胺浓度（ c、c与 c0、c0 ）。7计算根系活力计算根系活力 根据实验结果计算不同植株根系对-萘胺的生物氧化强度（mg -萘胺/gfwh），并与植物生长势比较，分析它们之间的关系。 a-萘胺生物氧化强度= 48ml（c-c）-48ml（c0-c0） 2g1h 五、思考题五、思考题为什么利用a-萘胺氧化法测定植物的根系活