人教选修一微生物的实验室培养时PPT课件

1、到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关第1页/共55页微生物包括哪五类：真菌原生动物 原核生物界 原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识微生物基础知识第2页/共55页微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻、原核细胞特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.第3页/共55页细菌的外形与大小细菌的外形与大小细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不

2、分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞，通常用适当染料，通常用适当染料后显微镜观察后显微镜观察图1-1 常见的三种细菌典型形态A.球菌 B.杆菌 C.弧菌第4页/共55页细菌细胞由外向里依次有、菌菌（、，。细菌的构造细菌的构造第5页/共55页* *细胞壁细胞壁 细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？ 伤寒杆菌细胞壁中含毒素第6页/共55页 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌

3、.第7页/共55页菌落：菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。第8页/共55页菌落细菌的菌落特征因种而异 第9页/共55页1、结构：单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）第10页/共55页链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的 应用:第11页/共55页病毒的结构第12页/共55页病毒 第13页/共

4、55页SARS病毒、 禽流感病毒第14页/共55页朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）第15页/共55页2、病毒的增殖：第16页/共55页真菌第17页/共55页如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构酵母菌和霉菌青霉第18页/共55页生殖直立菌丝 营养菌丝腐生生活孢子生殖第19页/共55页细菌的营养类型细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。 自养菌（自养菌（autotrophautotroph） 异养菌（异养菌（heterotrophheterotroph） 腐生菌腐生菌 寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部

5、分病原菌第20页/共55页微生物包括哪五类：真菌原生动物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小。通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构，且体内一般不含有叶绿素，不能进行光合作用。 原核生物界 原生生物界真菌界病毒界第21页/共55页第22页/共55页1、了解培养基的基础知识，掌握培养基的配制、分装方法。2、掌握常用的消毒和灭菌的方法，进行无菌技术的操作 一、教学目标无菌技术的操作。二、课题重点和难点：第23页/共55页一、基础知识：（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机

6、盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 第24页/共55页（一）.培养基：微生物生存的环境和营养物质1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？水、无机盐、碳源、氮源碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物氮源NH4、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有机物为异养型微生物提供碳源、氮源、能源第25页/共55页（一）.培养基：1.基本成分：水、无机盐、碳源、氮源2.特殊营养：维生素、碱基

7、等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求：4.种类：固体培养基液体培养基有无 凝固剂琼脂分离 鉴定工业 生产化学成分：物理性质：天然培养基 合成培养基第26页/共55页培养基类型 配制特点主要应用物理性质固体培养基 加入琼脂较多微生物的分离、计数等半固体培养基加入琼脂较少观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等液体培养基 不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物选择培养基添加（或缺少）某种化学物质 培养、分离出特定的

8、微生物第27页/共55页选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞第28页/共55页 这些营养成分是构成细胞结构的元素和化合物的基本元素，碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。1、从细胞的化学元素组成来看，

9、培养基中为什么都含有这些营养成分？课堂探究课堂探究第29页/共55页牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂20.0g分析营养构成？第30页/共55页无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。第31页/共55页消毒 1、无菌技术的种类灭菌 使用较为温和的物理和化学方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子。使用较为强烈的理化因素杀死物

10、体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。第32页/共55页 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒； 将培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌； 接种的过程要在酒精灯火焰附近进行。 避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触第33页/共55页1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min9(牛奶）3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源（酒精擦拭双手4、紫外线消毒：（工作台、接种室）(能使蛋白质变性，还能损伤D

11、NA的结构）(1)消毒的方法3.常用的消毒与灭菌的方法第34页/共55页（1）、灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。试管口或瓶口等容易被污染的部位3、常用的消毒与灭菌的方法（2）、干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160170OC中加热12h即可。（3）、高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压蒸汽灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持1530min即可。第35页/共55页1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170 下加热1-2h。3、高压蒸气

12、灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.(2)灭菌的方法：第36页/共55页1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。P15-16旁栏思考第37页/共55页4.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。课堂探究课堂探究第38页/共5

13、5页拓展延伸定义常用方法微生物培养和组培的应用消毒使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分菌体,但不伤及活组织煮沸玻璃仪器紫外线实验室、操作台、衣物等酒精溶液手、外植体等次氯酸钠溶液等外植体灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有菌体、芽孢和孢子高压蒸汽培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等灼烧接种环、涂布器等干热玻璃仪器第39页/共55页单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：三.菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基培养基上大量繁殖子细胞群体第40页/共55页1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种

14、的保存第41页/共55页三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）第42页/共55页培养基的配制原则培养基的配制原则 目的要明确目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。制量。 营养要协调营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。 pHpH要适宜要适宜：细菌培养基：细菌培养基pHpH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。第43页/共55页（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：（根据微生物生长时对营养物质的需求）物质

15、物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至1000mL1000mL2.称量 准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。三、实验操作思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几种营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？第44页/共55页 3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，不断用玻璃棒搅拌，原因：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。待溶

16、解后，加自来水定溶至100mL。（熔化后灭菌前应该调节PH) 4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（35套，用几层报纸包好）一起放到高压蒸汽灭菌锅内灭菌。 5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板。第45页/共55页思考思考3溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热? 加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么?可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中,减少误差作为凝固剂第46页/共55页思考思考4 在灭菌前在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的

17、是什么？ 培养皿能否用高压蒸汽灭菌？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞；在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌第47页/共55页第48页/共55页倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？ 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第49页/共55页 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使

18、培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第50页/共55页1计算、称量2溶化3调pH：pH764过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6加塞7包扎操作步骤第51页/共55页 8灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。 9倒平板: 待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 10无菌检查： 将灭菌的培养基放入37的温室中培养244