第四章定量分析

1、分析方法分析方法方法优点方法优点方法缺点方法缺点适用对象适用对象容量分析法容量分析法简便、准确度简便、准确度好、精密度高好、精密度高专属性差专属性差化学原料药含化学原料药含量测定量测定光谱分析法光谱分析法简便、快速、简便、快速、灵敏度高灵敏度高专属性差专属性差制剂中溶出度、制剂中溶出度、释放度测定释放度测定色谱法色谱法灵敏度高、灵敏度高、专属性好专属性好操作相对复杂操作相对复杂（低）制剂的（低）制剂的含量测定含量测定定量方法特点： 一、容量分析法一、容量分析法 （一）容量分析法的特点（一）容量分析法的特点 操作简单、快速；操作简单、快速； 比较准确（比较准确（RSDRSD0.2%0.2%）；）

2、； 仪器普通易得。仪器普通易得。1. 1. 滴定度（滴定度（T T）的概念）的概念 每每1ml1ml滴定液相当于被测物质的量滴定液相当于被测物质的量(mg)(mg)2. 2. 滴定度的计算滴定度的计算 aA aA + + bB cC bB cC + + dD dD T T = = M Ma/ba/bB B3. 3. 百分含量的计算（原料药）百分含量的计算（原料药） （1 1）直接滴定法）直接滴定法 D% = D% = V V F F T/WT/W 100%100% F F = = 实际浓度实际浓度/ /规定浓度规定浓度 （二）容量分析法的有关计算（二）容量分析法的有关计算（2）剩余滴定法 %m

3、FVVTs ）（百分含量百分含量T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数 V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml） V0滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）F浓度校正因子 ms供试品的质量 %04.100%10010003220. 041.141 . 01062. 005.21%100%WVfT含量%9 .99%10010001301.001.131 .00999.005.1505.25%）（含量片剂含量测定结果的计算 %100/%100%片）标示量（）平均片重（）供试品重（）测得量（标示量每片含量标示量gggg%100%标示量平均片重标示量smTVF烟酸片含量测定烟酸片含量测定 取本品

4、10片片精密称定为3.5840g，研细，精密称取0.3729g，置100 mL锥形瓶中水浴加热溶解后，放冷。加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1005mol/L)滴定至粉红色消耗25.02 mL。每1mL氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当12.31mg的烟酸。求供试品中烟酸的标示百分含量（标示量0.3g/片）。标示量标示量%=V T F 平均片重平均片重W 标示量标示量100 %=25.02 12.31/1000 0.1005/0.10.35840.3729 0.3= 99.17%100 % 二、光谱分析法二、光谱分析法 （一）紫外（一）紫外- -可见分光光度法（可见分光光度法（20

5、0nm200nm760nm)760nm) 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-7g/ml 10-4g/ml 1. 特点特点 准确度高，准确度高，RSD（%） 1.05 拖尾峰 0.95前沿峰siisAAmm和测混匀进样过程：校正因子（f）=AS/CSAR/CR含量（CX）=fAS/CSAX内标法 测定方法：测定方法： 外标法，有外标外标法，有外标标准曲线法和外标一点法标准曲线法和外标一点法 外标一点法：外标一点法：一种浓度对照物对比样品中待测组分含量一种浓度对照物对比样品中待测组分含量前提：截距接近前提：截距接近0，对照品浓度与待测组分浓度接近，对照品浓度与待测组分浓度接近RXRxAACC)(含

6、量内标一点法内标一点法%4 .97%100355. 0/346. 0%346. 03 . 061228455221345352. 1352. 1362. 054678243 . 06125843SSXXRRSSCAAfCCACAf不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法CCl3 C(CH3)2 OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2 CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕红色）（淡棕红色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010 12 )Fe3+ +

7、SCN Fe (SCN) 2+ 定量过量过量例例 泛影酸的测定泛影酸的测定 取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流回流COONaNH2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2ONaClHClOCl

8、CNaOH2 溶液点燃适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析本法简便、快速、破坏完全，尤其用于微量样品分析本法简便、快速、破坏完全，尤其用于微量样品分析正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证一、准确度一、准确度 是指用该方法是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示 （一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1. 原料药原料药 可用已知纯度对照品或样

9、品进行测定；或与已建准确可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体操作：取高、中、低三个浓度，每个浓度三个样本具体操作：取高、中、低三个浓度，每个浓度三个样本, 共共9个数据来评价，回收率的个数据来评价，回收率的RSD2%；UV和和HPLC法，一般回收率可达法，一般回收率可达98%102%；容量法回收率可达容量法回收率可达99

10、.7%100.3%100-%加入量本底量测得量）加样回收率（%100%加入量测得量）回收率（对于化学药，一般中间浓度加入量与供试品中待测定成分量之比控制在1 : 1 左右；建议高、中、低浓度对照品加入量与所取供试品中待测定成分量之比控制在1.2 : 1，1 : 1 ，0.8 :1 左右，应报告已知加入量的回收率（ )。对于中药，一般中间浓度加入量与所取供试品中待测定成分量之比控制在1 : 1左右，高、中、低浓度对照品加入量与所取供试品中待测定成分量之比控制在1 .5：1，1 : 1 ，0.5： 1 左右，应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率（)计算值，以及相对标准

11、偏差（RSD%) 。浓度选择： 二、精密度二、精密度 是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果 之间的接近程度。之间的接近程度。 （一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1. 偏差偏差(deviation , d) d = 测得值测得值-平均值平均值=Xi-X 2. 标准偏差（标准偏差（standard deviation, SD或或S） S =(Xi X)2/(n-1)1/2 3. 相对标准差相对标准差(relative standard deviation, RSD) RSD=标准偏差标准偏差/平均值平均值100%=S/

12、X 100%（二）重复性、中间精密度及重现性（二）重复性、中间精密度及重现性 1. 重复性重复性 在相同条件下在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度由一个分析人员测定所得结果的精密度. 2. 中间精密度中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度。同设备测定结果的精密度。 3. 重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。 三、专属性三、专属性 是指在其他成分是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，可能存在下， 采

13、用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检 查、含量测定方法，均应考察其专属性。查、含量测定方法，均应考察其专属性。 （一）鉴别反应（一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分 的样品均应呈现负反应。的样品均应呈现负反应。 （二）含量测定和杂质测定（二）含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。 图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能图中应注明各组分的位置，色谱法中分

14、离度应符合要求。在能 获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂 质和降解物不能获得的情况下，可用已验证方法和药典方法进质和降解物不能获得的情况下，可用已验证方法和药典方法进 行对照；也可用对试样加速破坏的方法进行验证。行对照；也可用对试样加速破坏的方法进行验证。 四、检测限四、检测限 是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验 指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。 （一）常用的方法（一）

15、常用的方法 1.1.非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地用已知浓度被测物，试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。检测出的最低浓度或量。 2.2.仪器分析方法仪器分析方法 GCGC和和HPLCHPLC法：法： LODLOD = = S S/ /N N = 2 = 2或或3 3 五、定量限五、定量限 是指样品中是指样品中被测物能被定量测定的最低量，被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应其测定结果应 具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求 LOQLOQ. . 常用信噪比法确定定量限，一般以常

16、用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10S/N=10时，相应的浓度时，相应的浓度进行测定。进行测定。 六、线性六、线性 是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈正比关系的程度。呈正比关系的程度。 UVUV法：首先制备一个标准系列，浓度点法：首先制备一个标准系列，浓度点n =5; A = 0.3n =5; A = 0.30.70.7 建立回归方程建立回归方程C = aA + b ;r C = aA + b ;r 0.9990.999。 HPLCHPLC法：制备一个标准系列，浓度点法：制备一个标准系列，浓度点n =5 n =5 7;

17、7; 以以C C对对h h或或A A或与或与 内标物的峰面积之比，建立回归方程内标物的峰面积之比，建立回归方程r r0.9990.999。 七、范围七、范围 是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间适用的高低限度或量的区间。 原料药和制剂含量测定原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的：范围应为测试浓度的80% 120%。 制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的70% 130%。 溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的20%20%。 八、耐用性八、耐用性 是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受承受 程度。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、程度。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、 时间等。时间等。 HPLC法变动因素有：流动相组成与法