HIVELISA法检测操作程序

1、HIV ELISA法检测操作程序1简介使用前将试剂盒所有试剂自低温箱内取出置室温复温 30分钟z取出所需的条板，剩余的及时封存。注意不同批号 的试剂不得混淆。本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和口型 (HIV1/2 )抗原(基因重组蛋白)包被的微孔板和酶标记的 HIV1/2抗原及其他试剂组成,应用双抗原夹心法原理 (Sandwish ELISA )检测人血清或血浆中的HIV1/2抗体。2 试剂：试剂盒组成：1HIV酶标板8x12 孔7、显色剂A 液60ml x 1 瓶2、HIV-1型阳性对照lmlx 1 瓶8、显色剂B液60ml x 1瓶3、HIV-H型阳性对照lmlx 1 瓶9、终止液

2、60ml x 1 瓶4 . HIV阴性对照袋1个Imlxl 瓶10启封5 .HIV每标试剂lOmlxl 瓶膜3张3.HIV抗体检测流程自低温箱内取出试剂盒宙己置洗谥缓冲液选择待检标本衽酶标赴做标応在酶标板中加失样品和对照曰 皿冃加入终止液将试剂收回低温冰箱歷理和清占工作区关闭设备电源4. 操作步骤：4.1配液:将50ml浓缩洗涤液用蒸谓水或去离子水20倍 稀释至1000ml备用。4.2编号:Al、A2、A3为阴性对照,A4为HIV-1型阳性 对照，A5为HIV-2型阳性对照z将样品从6号开始 编号，不设空白孔。4. 3加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对 照100uL4.4温育:用封板

3、膜封板后置371C温育302分钟。4.5洗涤:小心将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体, 用洗涤液洗涤5遍。4.6加酶:每孔加人酶标试剂100ule4.7温育:用封板膜封板后置371C温育302分钟。4.8洗涤:小心将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液 体用洗涤液充分洗涤5边。最后一次尽量扣干。4. 9显色：每孔加人显色剂A、B液各50ul ,轻轻振荡 混匀，用封板膜封板后置371C避光显色15分钟。4.10终止:每孔加终止液50 ul ,（注意应与加底物的次序 相同）轻轻振荡混匀。4.11测量：按LAB/SOP/01准备好醃标仪按歴 再按赵 输入数字g ,按赵。仪器显 示临界值测量模式及版本号

4、，并进行自检。调出测量程序:按亟再输入数字ll（本 试剂盒测量程序号是Hir）,按M调出11号程序。将酶标板放在仪器上z按开始”仪器即自动测量 并打印出结果。结束实验时的醃标板应一直避光放置”并在终止 后10分钟内读取结果及光度要求在450nm ,参比 滤光片为630nm.5. 准确性评估5.1 NA 必须 S0.1005.2 cutcoff 值二 NA+0.125.3标本OD值 cutcoff值为阳性5.4标本OD值 cutcoff值为阴性5.5正常时,阴性对照A值应sO.lO ,阳性对照A值应0.80 ,阴性对照值若 0.08 ,以0.08计算。6. 阳性标本的复检对阳性标本应用本试剂盒做

5、双份复检,同时用科华试 齐I盒按LAB/SOP/18进行双份测定。7 质控必要时应检测质控血清盘8 重做如果阳性对照A值孔间之差 30% ,应重复实验,重做 板要求编号与原板相同，作废板的打印结果中应清楚表明此 结果是不可信的。9 最终结果完成实验后，提交结果给资深技术人员作最后核对，然 后再发出报告。10 完成试验10.1检查是否为第二天工作准备了足够的试剂。10.2将以上准备的试剂放回冰箱。103处理各种废物，参见LAB/SOP/07。10.4清理和：肖毒工作区，参见LAB/SOP/08.10.5关闭洗板机，参见LAB/SOP/02.10.6关闭醃标仪，参见LAB/SOP/01。10.7关闭其他所有设备。1九注意事项11.1本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的 HIV初筛实验室。11.2整个HIV检测必须符合全国爰滋病检测工作规范,严 格防止交叉感染。操作时必须戴套，穿工作服,严格健全和 执行消毒隔离制度。113所有监测工作应在质监员的直接监督下完成，发现问题应在第一时间向质监员汇报。11.4 HIV1/2抗体测走结果的判定必须以酶标仪读数为准。11.5洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗 净。11.6所有样品,和各种废弃物都应按传染物处理。11.7用于检测的样品应保持新鲜。11.8所有试剂的配