ge离子交换层析柱protocol0001

1、GE离子交换层析柱protocol 5ml （举例子）Preparation1. Buffer:（pH根据蛋白的pl进行调整，pH尽量远离pl。pHpl,过Q柱；pHpl,过S柱）A: 50mM Tris-HClB: 50mM Trls-HClIM NaCl过滤除杂质，4C静置过夜除气泡。2. Protein:用 滤器过滤除质：或者分装于EP管，14000rpm, 4C离心20min,去除沉淀。3 .Prepare enough tubes有流速时.禁止将泵的探头暴您到空气中!！柱子在仪器上时，无论何时均要限压!Procedure1打开仪器总开关，电脑。检查：泵的探头是否放入纯水中。先泵： M

2、anual-pump-pump basic wash-A on ,B on-insert-execute洗系统：Manual-pump-flow-lOml/min-insert-executeManual-other-End time-volume-40 ml2安装柱子给流速：Manual-pump-flow-3ml/min-insert-execute（仪器显示系统压力为*Mpa）限压力：Manual-Alarms-Alarms pressure-+Mpa-insert-execute 是 Hitrap Q 柱子的最大限圧）装柱子：先装上而，再下而，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。3清洗柱子

3、限压力：Manual-Alarms-Alarms pressure-+jMpa-insert-execute给流速：Manual-pump-flow-lml/min-insert-execute （低流速卜装柱子）Manual-other-End time-volume-10 ml（第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子，必须先用纯水洗以上cv：柱体积, 其中 Hitrap QHP5ml 的 CV 是 5ml）停流速：End装溶液：将A泵放入buffer A,将B泵放入buffer B.（必须在零流速下操作）限压力:Manual-Alarms-Alarms pressure+Mpa-insert

4、-execute 低盐洗：Man ual-pump-gradie nt0%B-insertexecuteManu al-pump-flow-3ml/min-insert-execute淸洗至基线走平（大约需要20ml）髙盐洗：Man ual-pump-gradie nt200%BinsertexecuteManual-pump-flow-3ml/min-insert-execute淸洗至基线定到平低 盐洗：Manual-pump-gradient-O%B-insert-executeManual-pump-flow-3ml/min-insert-execute淸洗至基线走平停流速：End4上样

5、品选择合适的上样环，例如5ml loop.用纯水淸洗loop三次，再用buffer A 洗loop三次，赶走气泡：同时淸洗上样口。将样品置于上样口，用针筒抽吸样品进入loop。（切忌吸入气泡）5运行程序File-设宦的程序-show detail确认无误-START.特別注意更改压力，上样量大小。6清洗柱子（同3）限压力（勿忘）-低盐洗-高盐洗-低盐洗最后还要用水洗柱子。停流速：End装溶液：将A泵，B泵用水淸洗后，放入纯水中。（必须在零流速卜操作）水洗：Manual-pumpgr adient-O%B-insert-executeMan ual-pump-flow-3ml/min-insert-execute淸洗至基线疋平7卸柱子限压力：Manual-Alarms-Alarms pressureF*)Mpa-insert-execute 是 Hitrap Q柱子的最大限压，*: