正交试验法优选枣仁安神胶囊提取工艺

1、正交试验法优选枣仁安神胶囊提取工艺 摘要 目的：优选枣仁安神胶囊提取的最佳工艺条件。方法：以浸膏中酸枣仁皂苷a和b的含量为指标，用高效液相色谱测定，采用l9（34）正交试验优选提取工艺。结果：最佳工艺条件为8倍量水，煎煮3次，每次1.5 h。结论：优选的枣仁安神胶囊提取工艺稳定、可行，提取率高。 关键词 正交试验 枣仁安神胶囊 酸枣仁皂苷a 酸枣仁皂苷b 中图分类号 r284.2文献标识码 a 文章编号 1673-7210（2011）02（b）-047-02 study on optimizing the decocting extraction for zaoren anshen capsu

2、les by orthogonal design method yu qi (department of pharmacy, the central hospital of loudi city, hunan province, loudi 417000, china) abstract objective: to study on optimizing decocting extraction for zaoren anshen capsules by orthogonal design method. methods: optimized the decocting extraction

3、with l9(34) orthogonal test, the yields of extracts, the content of the jujubaside a and jujubaside b were used as evaluating criteria. they was determined by hplc. results: the optimal condition was 8 folds amount of water, 3 times, 1.5 hours each time. conclusion: the optimized extractive technolo

4、gy is stable and efficient with high yields. key words orthogonal test; zaoren anshen capsules; jujubaside a; jujubaside b 酸枣仁胶囊是由酸枣仁、丹参、五味子（醋炙）组成，具有养心安神、镇静催眠之功效，用于失眠、头昏、健忘等的治疗。酸枣仁为方中君药，其中酸枣仁皂苷a和酸枣仁皂苷b为酸枣仁镇静催眠的主要成分1。笔者参照文献2-7，以出膏率、酸枣仁皂苷a、酸枣仁皂苷b为指标，采用正交试验法对酸枣仁等药材的煎煮工艺进行优选，以期获得最佳工艺条件。 1 仪器与试药 岛津lc-10a

5、高效液相色谱仪和alltech 2000蒸发光散射检测器；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；酸枣仁皂苷a和b对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110734-200509、110814-200607，供含量测定用）。 2 方法与结果 2.1 水煎煮组正交试验设计 采用正交试验法对酸枣仁、丹参和五味子水提工艺进行优选。以提取次数（a）、提取时间（b）、加水量（c）为试验因素，各3个水平，以出膏率和酸枣仁皂苷a和b含量作为考察指标进行试验。因素水平见表1。 表 1 提取因素水平表 tab.1 factors and levels tablet of extraction 2.2 出膏率的计算 分

6、别按处方量称取药材适量，用水浸泡0.5 h，大火煮沸后，分别按照正交试验表中的时间以文火煎煮，过滤，合并水煎液，浓缩，置干燥恒重的蒸发皿中，并置于50干燥箱内至完全干燥，取出，置于干燥器内放冷并称重，计算出膏率。 2.3浸膏中酸枣仁皂苷a和b含量测定 2.3.1 色谱条件agilent zorbax c18（4.6 mm250 mm，5 m）色谱柱；柱温：25；流动相：甲醇-水-冰醋酸（70282），流速：1.0 ml/min，飘移管温度：105，气体流速：1.2 l/min，进样量：10 l。 2.3.2 对照品溶液制备分别精密称取酸枣仁皂苷a和b对照品适量，加甲醇溶液分别配制成浓度为2.1

7、0 mg/ml的酸枣仁皂苷a溶液和浓度为2.24 mg/ml的酸枣仁皂苷b溶液，作为对照品溶液。 2.3.3 供试品溶液制备取本品内容物5 g，精密称定，加甲醇回流提取2次，每次加甲醇25 ml，回流1 h，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水30 ml溶剂，转入分液漏斗中，加水饱和的正丁醇溶液振摇提取3次，每次30 ml，合并正丁醇溶液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次50 ml，分取正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇溶液使溶解，转入10 ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。 2.3.4 线性关系考察精密吸取酸枣仁皂苷a和b对照品溶液（酸枣仁皂苷a浓度为6.14 mg/m

8、l、酸枣仁皂苷b浓度为6.56 mg/ml）0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 ml，分别置5 ml量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，按上述色谱条件进行分析，测定其色谱峰面积，以色谱峰面积a为纵坐标，含量c（g/ml）为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程为酸枣仁皂苷a：y=21 851.2x-415.2（r=0.999 7），酸枣仁皂苷b：y=19 251.2x-145.2（r=0.999 8），结果表明酸枣仁皂苷a浓度在0.3683.680 mg/ml、酸枣仁皂苷b在0.3943.936 mg/ml范围内呈良好的线性关系。 2.3.5 含量测定分别精密吸取对照品、供试品溶液各10 l，注入液

9、相色谱仪，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算含量。 2.4 水煎煮组最佳工艺确定 对正交试验结果进行极差和方差分析，结果见表2、3。 表 2l9（34）正交试验结果 tab.2 result ofl9(34) orthogonal test 综合评分=（出膏率/最大出膏率）1000.2+（酸枣仁皂苷a含量/酸枣仁皂苷a最高含量）1000.4+（酸枣仁皂苷b含量/酸枣仁皂苷b最高含量）1000.4。 表 3正交试验方差分析 tab.3 variance analysis of orthogonal test f0.05（2，2）=19.0 由表2可知，3个因素的极差大小顺序为abc，提取次数

10、对提取工艺的影响最大，其次为提取时间，加水量影响最小。 由表3可知，因素a对本方的提取有显著性影响，因素b、c无显著性影响，故确定最佳提取工艺为a3b1c1，即用8倍量水，提取3次，每次1.5 h。 2.5 验证实验 按优选的最佳工艺提取3批样品，进行验证实验，得3批样品出膏率分别为24.14%、23.09%、24.47%，酸枣仁皂苷a含量分别为241.56、244.15、234.12 g/g，酸枣仁皂苷b含量分别为210.45、214.58、208.66 g/g，验证结果表明工艺基本稳定可行。 3 讨论 酸枣仁为方中君药，其中酸枣仁皂苷a、b为酸枣仁镇静催眠的主要成分，且易溶于水。水煎煮法能

11、提取出较多的成分，且符合中医传统用药习惯，溶剂价廉、易得，结合实际生产中能耗、成本、安全性等因素考虑，确定水为提取溶剂。 正交试验结果所得的最佳工艺条件为a3b1c3，但其生产成本较高、生产周期较长，不符合生产实际，所以此工艺缺乏合理性。故选取了较符合生产实际的a3b1c1组合，并进行了工艺验证实验。结果表明，a3b1c1组合的浸膏得率和酸枣仁皂苷a、b提取率较高、稳定性较好，故选择a3b1c1，在提高提取率、保证疗效的同时达到了节约成本、缩短生产周期、经济效益的目的。 参考文献 1王浴生,邓文龙.中药药理与应用 m.2版.北京:人民卫生出版社,2000:1208. 2王瑞,毕开顺.正交试验法优选解毒宣透汤提取工艺j.沈阳药科大学学报,2002,19(4):284-286 3马玲云,吴朝阳.rp-hplc-elsd法同时测定中药及保健食品中酸枣仁皂苷a和b含量的方法验证j.临床合理用药,2010,7(3):37-38 4张淑玲,沙玫,陆军,等.正交试验法优选和丹舒胶囊提取工艺j.广东药学院学报,2010,26(1):41-44 5姚椹婷,张丽,李媛,等.正交试验优选复方jtl胶囊的煎煮提取