实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定课件

1、2021-7-18 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 1 实验十九实验十九 根瘤或土壤固氮酶根瘤或土壤固氮酶 活性的测定活性的测定 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 2 根瘤或土壤固氮酶活性的测定根瘤或土壤固氮酶活性的测定 u目的要求目的要求 u实验材料实验材料 u实验程序实验程序 u思考题思考题 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 3 目的要求目的要求 u初步掌握根瘤或土壤样品 中固氮酶活性测定的方法 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 4 实验材料实验材料 u豆科植物根瘤或土壤样品。豆科植物根瘤或土壤样品。 u102G型气相色谱仪型气相色谱仪/ u标准乙烯标准乙烯 灵敏度为灵敏

2、度为103，衰减为，衰减为1/128。 u待测样品中乙烯待测样品中乙烯 测定：灵敏度为测定：灵敏度为104，衰减为，衰减为1/1。 （但可根据固氮酶活性，改变灵敏度和衰减）。（但可根据固氮酶活性，改变灵敏度和衰减）。 u乙炔气体。乙炔气体。 u100mL带有异丁基胶塞的血清瓶。带有异丁基胶塞的血清瓶。 u1mL、10mL（密封性能好的）注射器，密封性能好的）注射器，100m mL微量微量 注射器注射器 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 5 实验程序实验程序 u根瘤固氮活性的测定根瘤固氮活性的测定 u土壤固氮酶活性的测定土壤固氮酶活性的测定 u乙烯含量的计算乙烯含量的计算 实验十九根瘤或土壤

3、中固氮酶活性的测定 6 实验程序实验程序 （根瘤固氮活性的测定）（根瘤固氮活性的测定） u从田间挖取豆科植物植株，剪掉地上部分，根部从田间挖取豆科植物植株，剪掉地上部分，根部 洗净，稍干，将结瘤的根系部分分别剪开，主根洗净，稍干，将结瘤的根系部分分别剪开，主根 上的瘤可直接剥下，侧根上的瘤要带少量根剪断，上的瘤可直接剥下，侧根上的瘤要带少量根剪断， 将鲜根瘤称重，收集到将鲜根瘤称重，收集到100mL血清瓶中，立即血清瓶中，立即 用异丁基胶塞密封，然后按瓶子中气相体积用注用异丁基胶塞密封，然后按瓶子中气相体积用注 射器从瓶中抽出射器从瓶中抽出510%的空气，再用注射器注的空气，再用注射器注 入等

4、体积的入等体积的C2H2，280C保温保温2h。取出瓶子，用取出瓶子，用 注射器吸出注射器吸出100uL的混合气体，用气相色谱仪以的混合气体，用气相色谱仪以 外标法测定其固氮酶活性。外标法测定其固氮酶活性。 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 7 实验程序实验程序 （土壤固氮酶活性的测定）（土壤固氮酶活性的测定） u取田间土样取田间土样15g于于100mL血清瓶中，加入血清瓶中，加入 0.1mole/L葡萄糖液葡萄糖液2mL，摇匀，塞上异丁摇匀，塞上异丁 基胶塞，加铝盖密封。用注射器从瓶中抽出基胶塞，加铝盖密封。用注射器从瓶中抽出 5mL乙炔气体，乙炔气体，280C培养培养2d。培养结束后，

5、培养结束后， 用用1mL注射器从瓶中吸出注射器从瓶中吸出0.5mL气样，用气气样，用气 相色谱仪测定其固氮酶活性。相色谱仪测定其固氮酶活性。 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 8 实验程序实验程序 （乙烯含量计算）（乙烯含量计算） u因乙烯峰高与气体中乙烯含量成正比，故可用外标法来因乙烯峰高与气体中乙烯含量成正比，故可用外标法来 测定待测样品中乙烯的量。测定待测样品中乙烯的量。 由乙烯含量的百分比，再根据血清凭中气相体积计算由乙烯含量的百分比，再根据血清凭中气相体积计算m moles数：数： 固氮酶活性用形成固氮酶活性用形成n moles/mg瘤鲜重或瘤鲜重或g干土干土/min表示。表示。 X100 测样中乙烯含量（%）= 标准乙烯气体含量（%）X测样中乙烯气体峰高（mm） 标准乙烯气体峰高（mm） 纯乙烯体积（L）= 测样中乙烯含量百分比 X气相体积（L） 乙烯形成量（n moles）= 纯乙烯气体体积（L） X 109 22.4（L） 实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定 9 思思 考考 题题 u固氮酶活性测定的原理是什固氮酶活性测定的原理是什 么？么？ u为什么测定时要用带异丁基为什么测定时要用带异丁基 胶塞密封的血清瓶？胶塞密封