葡萄糖氧化酶法测定血糖浓

1、1.掌握血糖测定原理，计算方法，参考正常值，临床意义。 2.了解尿糖的测定及意义。 1.收集耳缘静脉血,制备血浆,葡萄糖氧化法比色测定血糖浓度。 2.收集尿液,班氏法测定。 一.实验要求 二.实验内容 血糖（blood glucose,BG）指血浆（清）中的糖类物质，主 要为葡萄糖。 一.血糖的来源： 食物、糖原的分解、糖异生。 二. 血糖的去路： 有氧氧化、转换成非糖物质、尿排出、糖酵解。 血糖血糖 1.正常血糖浓度: 3.9-6.1 mmol/L(成年人空腹) 低血糖: 低于 2.8 mmol/L 高血糖: 超过 7.8 mmol/L 2. 低血糖的因素：胰岛素、磺脲类药、饮酒、严重饥 饿

2、 高血糖的因素：进食、情绪紧张时、糖尿病. 3. 糖尿病的诊断和治疗监视、新生儿低血糖症等. 肾上腺素由肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺激素。 肾上腺素升高血糖机制：肾上腺素升高血糖机制： 在应激状态、内脏神经刺激和低血糖等情况下， 肾上腺素被释放入血液循环，促进糖原分解并升 高血糖，促进脂肪分解，促进非糖物质向血糖的 转化，使血糖浓度增大。 肾上腺素肾上腺素 adrenaline;epinephrine 一、血糖测定一、血糖测定 福林-酚试剂法 葡萄糖氧化酶法 邻甲苯胺法 葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖氧化酶法原理 葡萄糖葡萄糖O2H2O葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2 葡萄糖氧化酶（葡萄糖氧化酶（GOD）

3、氧化，37oC H2O2 苯酚苯酚 4-氨基安替吡啉氨基安替吡啉 H2O 红色红色醌亚胺 + + O2 37oC 辣根过氧化物酶（辣根过氧化物酶（POD） Trinder反应反应 溶液在505nm下有吸收峰,可用比色法测定,得出葡萄糖的浓度。 标准浓度法 A标=KC标L A样=KC样L C样= A样 A标 C标 【试剂】 酶酚混合试剂（PH7.0） 5mmol/L葡萄糖标准应用液 班氏试剂 【器材】 试管、试管架、吸量管、移液枪、恒温 水浴、722型分光光度计。 实验前准备实验前准备 【标本】 1.血浆 应在血液采集1小时内尽早分离。 具体操作具体操作 （1）称重； （2）取血： 找到耳缘静脉

4、，二甲苯擦拭，涂薄层凡士林（有何作 用）。 用三棱针刺破耳缘静脉放血(自然血流)，将血液收集于 草酸钠抗凝管内（边接边摇,以防凝固），取约5ml 。 离心，2000rpm，10min，取上清，编号； （3）注射激素后再取血: 皮下注射肾上腺素(0.4mg/kg体重)， 记录在注射时间。 30min后取血5ml于抗凝管内, 离心，2000rpm，10min， 取上清，编号。 （4）取4支试管，按下表加入试剂: 标准标准(ml)正常正常 (ml)注射后注射后(ml)空白空白(ml) 血清样品血清样品 葡萄糖标准液葡萄糖标准液 蒸馏水蒸馏水 酶酚混合试剂酶酚混合试剂 0.02 3.00 0.02 3

5、.00 0.02 3.00 0.02 3.00 将各管充分混匀，37 水浴中保温15min；取出 冷却至室温后，505nm处比色；以空白管调零，读取 标准管及测定管光密度值。 计算： 测定管测定管葡萄糖含量葡萄糖含量 （mmol/L） 测定管光密度测定管光密度 标准管光密度标准管光密度 5 1.注射前后的血糖浓度 2. 注射后血糖浓度增高率 A A肾 肾-A -A正 正 A A正 正 100%增高率增高率 = 结果记录结果记录 标准标准(ml)正常正常 (ml)注射激素后注射激素后(ml)空白空白(ml) A 血糖浓度 增高率 尿糖是指尿中的糖类，主要是 指尿中的葡萄糖。正常情况下， 肾小管能

6、将肾小球滤过的葡萄 糖全部重吸收回血液，当血糖 肾糖阈8.96-10.08mmol/L,超过 肾小管的重吸收能力,部分葡萄 糖随尿排出。尿糖的测定虽然 不能单纯作为糖尿病的诊断标 准，但是从某种层面上也能反 映一些问题。 血血 浆浆 尿糖尿糖 尿糖尿糖 动脉血血细胞、大分子蛋白质等 部分水、 无机盐、 葡萄糖、 维生素、 尿素等 重吸收 近 端 小 管 二、 二、二、 1.班氏定性试验： 2.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：反应原理同血糖 葡萄糖氧化酶法。 尿糖测定尿糖测定 班氏定性试验原理：班氏定性试验原理： 利用葡萄糖或其它还原性物质在碱性高温环境中，将反应液中 Cu2+还原为亚铜离子Cu

7、+，形成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化 亚铜。根据显色的程度，可对尿葡萄糖作定性及半定量检测。 (CHOH)(CHOH)n n CHOCHO CHCH2 2OHOH + + 2Cu2Cu2+ 2+ + + 4OH4OH- - COOHCOOH (CHOH)(CHOH)n n CHCH2 2OHOH + + 2CuOH + +H H 2 2O O 2CuOHH H2 2O O+ + CuCu2 2O O 醛糖醛糖醛糖酸醛糖酸 黄色或红色黄色或红色 操作步骤 20滴班氏剂A尿液2滴 B尿液2滴 煮沸5min煮沸5min 葡萄糖含量葡萄糖含量(g/L)试管变化试管变化结果符号结果符号 无糖 试剂仍清晰

8、呈蓝色，如有多量尿 酸存在也可能少许蓝灰色沉淀 微量0.5以下仅冷却后有少量绿色沉淀+ 少量0.51煮沸约1min后，出现少量黄绿色 沉淀 + 中等量12煮沸约15s，即呈土黄色沉淀+ 多量2以上开始煮时，即呈多量红棕色沉淀 + 【注意事项】 1.操作到位，取量要准确，吸量管不能混用。 2.血清分离后要及时的测定以免影响实验结果。 3.试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。不可入 口！避免接触皮肤及粘膜。 应采取必要的预防措施 使用试剂。 结果分析 三.测定的血糖浓度异常： 反应不彻底引起的（偏低） 葡萄糖标准溶液浓度有问题（偏高或偏低） 移液器引起的（偏高或偏低） 一.结果可报告范围：

9、 本法对葡萄糖的检测范围为0.0622.2 mmol/L。当样品测 定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 4稀释， 重新测定，结果乘以5。 二.当样品中抗坏血酸浓度 852 mol/L，胆红素浓度 684 mol/L， 血红蛋白浓度 2.00 g/L，甘油三酯浓度 22.6 mmol/L时没有观察 到干扰。 本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应， 第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物 质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争 过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑 制，使测定结果偏低。 （1）葡萄

10、糖）葡萄糖O2H2O葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2 （2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚 H2O 红色醌式物质红色醌式物质 过氧化物酶过氧化物酶 （POD） Trinder反反 应应 【讨论】 【思考题】【思考题】 1.为什么要在饥饿条件下采血？ 血糖主要来源是食物，进食会增高血糖浓度。 2.除糖尿病外，若血糖浓度测定结果不正常 可考虑哪些原因？ 注射葡萄糖、饮食、糖代谢疾病、应激反应 3.本法测定血糖为何不需制备血滤液？ 血滤液除蛋白，对血糖测定没有影响。 4.为什么取血前要涂凡士林？ 起润滑，防渗血作用。 血糖（blood glucose,BG）指血浆（清）中的糖类物质，主 要为葡

11、萄糖。 一.血糖的来源： 食物、糖原的分解、糖异生。 二. 血糖的去路： 有氧氧化、转换成非糖物质、尿排出、糖酵解。 血糖血糖 1.正常血糖浓度: 3.9-6.1 mmol/L(成年人空腹) 低血糖: 低于 2.8 mmol/L 高血糖: 超过 7.8 mmol/L 2. 低血糖的因素：胰岛素、磺脲类药、饮酒、严重饥 饿 高血糖的因素：进食、情绪紧张时、糖尿病. 3. 糖尿病的诊断和治疗监视、新生儿低血糖症等. 【试剂】 酶酚混合试剂（PH7.0） 5mmol/L葡萄糖标准应用液 班氏试剂 【器材】 试管、试管架、吸量管、移液枪、恒温 水浴、722型分光光度计。 实验前准备实验前准备 【标本】 1.血浆 应在血液采集1小时内尽早分离。 计算： 测定管测定管葡萄糖含量葡萄糖含量 （mmol/L） 测定管光密度测定管光密度 标准管光密度标准管光密度 5 1.注射前后的血糖浓度 2. 注射后血糖浓度增高率 A A肾 肾-A -A正 正 A A正 正 100%增高率增高率 = 1.班氏定性试验： 2.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：反应原理同血糖 葡萄糖氧化酶法。 尿糖测定尿糖测定 本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应， 第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二