流式基本介绍

1、To help all people live healthy livesTo help all people live healthy lives 1973年BD推出世界第一台流式细胞仪 FACS I（Fluorescence Activated Cell Sorter） 1980年中国的第一台流式细胞仪FACS II 生物学、免疫学、遗传学、药理学、肿瘤学、 血液学、临床检验等领域 FACS流式细胞仪市场占有率：全球75%， 中国70% 台式机台式机 FACSCalibur FACSCalibur =双激光： 488nm/635nm =四荧光六分析参数 =动化程度高 =分析速度快 =灵活的

2、设计 =细胞分选系统 细胞富集系统 大型机大型机 FACS Vantage SE FACS Vantage SE =多激光多波长 =八特征参数 =设计灵活 =高速分选 =单细胞点对点分选 流式细胞术的基本概念流式细胞术的基本概念 =流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM） 是一种可以快速、准确、客观，并且同时 检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性， 并加以定量的技术，同时可以对特定群体 加以分选 =研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生 物及人工合成微球等 =研究的微粒特性包括多种物理及生物学特 征，并加以定量 流式细胞仪仪器结构流式细胞仪仪器结构 液流系统液流系统 光学系统光学

3、系统 激光光源 光收集系统 电子系统电子系统 光电转换 数据处理系统 10-15% zDNA倍体分析： 结合临床病理的形态学诊断，对一些恶性肿瘤进行早 期诊断，跟踪随访和早期治疗，大大提高一些肿瘤的 治愈率和生存率。尤其对一些细胞抽吸物、体液、组 织液的脱落细胞的分析，意义尤为重要。 z增殖状态分析： 反映了肿瘤的生长速度和侵袭性 DNA细胞周期分析（ModFIT） 细胞凋亡的分析细胞凋亡的分析 z细胞凋亡与细胞坏死是两个不同的过程 z细胞凋亡的主要检查手段 y形态学检查 yLadders实验 y流式细胞仪检查 z与凋亡相关的病理过程 yHIV y自身免疫性疾病 y肿瘤 细胞凋亡的分析细胞凋亡

4、的分析 z细胞凋亡的主要表现 y细胞内酶改变：Caspase-3活化 y细胞膜不对称性改变，磷脂酰丝氨酸外翻，但仍然保 持膜的完整性：Annexin V/PI y细胞核DNA的断裂改变：TUNNEL实验（APO-BRDU， APO-DIRECT） z凋亡相关蛋白： yFas yBcl-2 细胞凋亡细胞凋亡Caspases-3Caspases-3 细胞凋亡细胞凋亡Annexin Annexin 细胞凋亡细胞凋亡BrdUBrdU To help all people live healthy livesTo help all people live healthy lives 1973年BD推出世

5、界第一台流式细胞仪 FACS I（Fluorescence Activated Cell Sorter） 1980年中国的第一台流式细胞仪FACS II 生物学、免疫学、遗传学、药理学、肿瘤学、 血液学、临床检验等领域 FACS流式细胞仪市场占有率：全球75%， 中国70% 双激光立体空间激发系统双激光立体空间激发系统 临床意义临床意义 z了解在不同情况下体内免疫功能状态 z辅助临床疾病的诊断 z探索疾病的发病机理、病程、预后 z监测、指导临床治疗方案 z免疫系统疾病 z免疫缺陷病，AIDS z移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测 z肿瘤病人化疗后免疫力检测 临床意义临床意义 z了解在不同

6、情况下体内免疫功能状态 z辅助临床疾病的诊断 z探索疾病的发病机理、病程、预后 z监测、指导临床治疗方案 z免疫系统疾病 z免疫缺陷病，AIDS z移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测 z肿瘤病人化疗后免疫力检测 T T淋巴细胞的体外激活淋巴细胞的体外激活 与细胞因子的检测与细胞因子的检测 z 免疫调节: y细胞因子/受体相互作用、 共受体/配体相互作用 z 病因学研究: y AIDS、癌症、自身免疫性疾病 z 病毒细菌抗原引发T细胞亚群反应 z 机会感染导致细胞介导免疫反应 z 药物/疫苗疗效评价 z 化疗免疫状态评价 z 各种状态下免疫状态评价： y移植、寄生虫、营养失调、创伤手术、烧伤等 造血干细胞计数造血干细胞计数 z造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分 化的造血细胞。 z造血干细胞的特征是： y大小（FSC）和颗粒度（SSC）介于成熟淋巴细胞、大 淋巴细胞相似 y细胞内含有较多核酸物质 yCD3