维生素c的定量测定

1、华南师范大学实验报告学生姓名 叶洁丽学 号20070004006专 业 综合理科二班年级、班级 2007 级课程名称 生物化学 实验项目 维生素 C 的定量测定（ 2,6-二氯酚靛酚滴定法） 实验类型 验证 设计 综合 实验时间 2008 年 11 月 3 日 实验指导老师 陈文利 徐杰 实验评分、目的1学习并掌握定量测定维生素 C 的原理和方法。2掌握微量滴定法的基本操作技术。二、原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗 坏血酸（ ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体 对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致

2、癌物的阻断作用。维生素 C 是具有 L 系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植 物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等） 、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿 等）中的含量更为丰富。维生素 C（抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料2，6 一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。HO CHO OHO CHCHO CClOHClCH 2OH2， 6二氯 酚靛酚 （红色 ）还原 型抗 坏血酸OOH还原 型 2 ， 6二氯 酚靛酚 （无色 ）ClCH 2OH氧 化型脱氢抗 坏血酸OHCCCCC O O H OClN（蓝 色 ）氧化型 2， 6 一二氯酚靛酚在

3、酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用 此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时， 在抗坏血酸未全部氧化前， 则滴下染料立即被还原 成无色， 一旦溶淀中的抗坏血酸全部被氧化时， 则滴下的染料立即使溶液显示粉红色， 此时 为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时2，6 一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。三、材料、试剂与器具）材料花椰菜）试剂1、标准抗坏血酸溶液2、 2%草酸溶液3、1%草酸溶液4、 0.01% 2,6 一二氯酚靛溶液）器具1、锥形瓶若干2、移液管若干3、容量瓶一个（ 100 毫升）4、微量滴定管（3 毫升）5、漏斗一个6 、研

4、钵四、实验内容（一）提取称取 1.8克花椰菜，剪碎加 2%的草酸几毫升，置研钵中研成浆，倒入100 毫升的容量瓶内，用 2% 草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。（二）滴定1、标定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准维生素 C溶液 1ml,加9ml 1%草酸加入 50ml锥形瓶中，同时量取 10ml 草酸加入 另一个 50ml 锥形瓶中作空白对照，用已标定的2，6一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现， 15 秒不退色。记录所用的毫升数， 计算每毫升 2，6 一二氯酚靛酚所能氧给维生素 C 的毫克数（K）。锥形瓶号1（标准）2（空白对照）标准维生素 C 溶液（ ml）11% 草酸（ ml

5、）910操作用已标定的 2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现， 15 秒不退色记录（所用的毫升数 ml ）3.150.37计算： K=0.1mg/ （V 标V 空） =0.1mg/（3.15 0.37）ml=0.03597mg/ml2、样品的测定：取 50ml 锥形瓶 2 个，分别加入滤液 10ml ，用已标定的 2，6 一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持 15 秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值V1。锥形瓶号1（滤液）2（滤液）3（空白）滤液（ ml ）10101% 草酸（ ml）10操作用已标定的 2，6 一二氯

6、酚靛酚滴定至粉红色出现， 15 秒不退色记录（所用的毫升数 ml ）1.451.440.32平均值（ ml）1.445 （ V1）0.32分析：两次滴定的结果分别为 4.45ml 和 4.44ml，比较接近，只相差了 0.01，说明滴定 结果还是比较准确的，这就要求每一步操作都要很正确且准确。此次空白滴定和前面在标 定 2， 6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时的空白滴定分别为0.37ml 和 0.32ml，相差了 0.05ml ，误差相对比较大。根据分析可能是1.滴定终点时溶液变红程度所选取的标准不够一致，有少许不同； 2.滴定过程中溶液溅到了锥形瓶壁而没有弄回溶液中；影响了实验结果。（三）结果计算

7、 根据实验数据计算出每 100g样品的维生素 C 含量： 维生素 C （ mg/100g 样品） = （V1 V2） K V 100W V3式中： V 1为滴定样品液所用去染料体积（ ml ）;V 2为滴定空白所用去染料体积（ ml）;V 3为样品测定时所用滤液体积（ 10ml）; 为样品提取液的总体积；K 为 1 毫升染料能氧化维生素 C 的量（ mg） ;W 为称取样品重量 （g ） 。（V V ） K V计算：维生素 C（mg/100g 样品） = 1 2100=（ 4.445 0.32） 0.03597W V3 100 100/1.8 10=82.43mg/100g根据查得值 8510

8、0 mg/100g（ 数据来源 ） 此结果是比较接近的，但还是偏少了。通过分析，偏少的原因可能是1. 在标定 2， 6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时，滴定标准维生素 C 溶液过程中，变红程 度较深时才停止滴定，所用 2， 6一二氯酚靛酚溶液增多，导致最终算出的K 值偏小；2. 在标定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时， 滴定标准维生素 C 溶液过程中， 有少许 2， 6 一二氯酚靛酚溶液滴到锥形瓶壁了，所用2， 6 一二氯酚靛酚溶液增多，导致最终算出的 K 值偏小； 所以这两个原因共同导致了最终的实验结果比查得值偏小。不过同时也还有可能是数 据本身，因为我查的的数据是温州花椰菜的维生素含量，而实验

9、室的花椰菜不一定是 产自温州，地域、季节都会影响到其中维生素的含量。五、注意事项1滴定时速度要尽可能快， 因样品内一般都含有一些能特将2，6 一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素 C 弱。2滴定所用染料要在 14ml 之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。3. 抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2% 草酸可抑制该酶， 1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（ 8%即可）则 Fe2+不会很快与染料起作用。4. 样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。5. 在生物组织内

10、和组织提取物内， 抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式 存在。它们同样地具有维生素 C 的生理作用，但不能将 2，6 一二氯酚靛酚还原脱色。6. 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。7. 样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢， 因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色， 于 15s 内不消退为终点。 【 1】六、实验讨论思考题：（一）、为了测得准确的维生素 C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？答： 1. 量取液体时一定要精确，注意读数时视线一定要与液体凹液面最低处相持平；2. 滴定

11、时一定要控制好滴定速度，不要一下子滴下太多2， 6 一二氯酚靛酚溶液，导致滴定过量，若发生此种情况要重新做一次，不能取巧；3. 滴定过程要注意观察锥形瓶中溶液的颜色，准确判断滴定终点， 即以微红色能保持 15 秒不退色为止， 而且每次滴定终点的微红色都要采取同样的标准，即变红程度要一样。（二）、试简述维生素 C 的生理意义。答： 1 、合成 Collagen （胶原蛋白） - 以形成软骨、 骨质、 牙釉质及血管上皮重要基质。2、促进脯胺酸转变为氢脯胺酸之反应，而氢脯胺酸为构成胶原重要成分之一，因此维 生素 C 可促进胶原之生成。3、维持结缔组织之正常 - 因为胶原是构成结缔组织之细胞间质。4、参加体内氧化还原反应 - 维生素 C可参加酪胺酸及某些物质的氧化反应。5、制造肾上腺类固醇激素。6、增进伤口愈合及增加对受伤及感染等压力的感受力。7、在受感染、 发热时， 此维生素之损失亦随之增加， 故其对刺激之反应扮演重要角色。8、解毒作用；9、改善心肌功能，减低毛细血管脆性，增加机体抵抗力；10、对抗游离基，有助于防癌，降低胆固醇，防止坏血病。【 2】现在我们做生物化学实验的时候，主要都是两人一组搭配合作，当中就涉及到怎样分 工、怎样