儿科学(呼吸)专业毕业论文[精品论文]RSV感染后中性粒细胞TLR4表达与功能研究

1、儿科学(呼吸)专业毕业论文 精品论文 rsv感染后中性粒细胞tlr4表达与功能研究关键词：呼吸道合胞病毒感染 中性粒细胞 tlr4表达 rsv摘要：研究背景呼吸道合胞病毒（rsv）为副粘病毒科肺炎病毒属、有包膜、非节段性的单负链rna病毒。作为引起婴幼儿下呼吸道感染最重要和常见的病毒病原体，rsv感染呼吸道上皮细胞后，诱导产生大量细胞因子、趋化因子、活性氧等活性介质，导致婴幼儿喘息性疾病的发生。近年来发现toll样受体（tlr）在抗病原微生物免疫防御反应中起重要作用，通过识别细菌、病毒和环境中相应抗原的保守结构，启动天然免疫应答，tlr在联系天然免疫和获得性免疫中起桥梁作用。以往研究大多集中在

2、探讨tlr在细菌感染中的作用，随着研究的深入，tlr在病毒感染中的作用日益受到关注。其中，tlr4通过识别rsv融合蛋白（f）蛋白，在rsv感染的发生发展中起着重要作用。我们的研究结果证实rsv感染后气道上皮细胞tlr4表达增加，增加了上皮细胞对随后的环境刺激因素如脂多糖（lps）的敏感性，明显增强炎症反应。 rsv引起的呼吸道感染患儿气道聚集大量中性粒细胞，在清除病原微生物的同时也导致了自身细胞的损伤和死亡。中性粒细胞表达除tlr3以外所有的tlrs。研究证实tlr4表达对中性粒细胞的聚集、黏附、凋亡、细胞因子或趋化因子以及活性氧产生起重要调控作用。教育部新世纪优秀人才支持计划（ncet-0

3、6-0775）资助 迄今为止尚没有治疗rsv感染的特效药，采用糖皮质激素尤其是地塞米松（dexamethasone，dex）治疗rsv引起的喘息性疾病存在争议。一方面，dex可下调心、肺组织及单核细胞tlr4表达，抑制nf-b活性及tnf-等炎症因子产生，促进中性粒细胞凋亡发挥抗炎作用保护机体，另一方面，dex改变th1/th2细胞偏移，促进th2发育，可能加重变态反应性炎症。目前尚未见dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达、炎症因子分泌以及杀菌功能影响的相关研究报道。 本研究拟从rsv感染对中性粒细胞tlr4表达与功能影响，进一步探讨rsv感染免疫发病机理，体外观察dex对rsv感染后中

4、性粒细胞tlr4表达及功能的影响，为寻找防治rsv感染后气道炎症产生的新方法提供理论依据。 第一部分 rsv对中性粒细胞tlr4表达及功能影响 目的探讨rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及il-6、il-8和h2o2水平变化，进一步明确tlr4信号通路在中性粒细胞功能发挥中的作用。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，设：rsv感染组、tlr4阻断组及对照组。其中：rsv感染组加入rsv病毒悬液共同培养，tlr4阻断组预先加入tlr4阻断剂hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。采用流式细胞仪检测中性粒细胞表面tlr4表达，及

5、h2o2产生，培养18h后离心收集上清液，采用elisa方法检测中性粒细胞产生il-6和il-8水平。 结果（1）rsv感染后，tlr4阳性中性粒细胞为28.7985.266较对照组tlr4阳性中性粒细胞（17.4765.853）明显增高；中性粒细胞il-6和il-8的表达均明显增加，rsv感染组il-6和il-8分别为466.0336.478 pg/ml和1528.9672.55 pg/ml，明显高于对照组（il-6：21.20515.059pg/ml；il-8：399.34267.45pg/ml）；rsv感染后中性粒细胞产生h2o2为105.2239.633mfi，较对照组（h2o2：39

6、.0041.30mfi）明显增加。（2）阻断中性粒细胞tlr4信号传导，rsv感染诱导的il-6产生减少（阻断组il-6：391.30743.45pg/ml；rsv感染组il-6：466.0336.478 pg/ml），中性粒细胞产生h2o2增加（阻断组h2o2：116.78712.059 mfi；rsv感染组h2o2：105.2239.633 mfi），il-8产生没有显著影响。 结论 rsv感染可上调中性粒细胞tlr4表达，诱导il-6、il-8及h2o2产生，tlr4信号通路影响rsv感染后中性粒细胞il-6和h2o2产生。 目的地塞米松（dex）治疗rsv感染引起的喘息性疾病的有效性存

7、在争议。动物模型证实dex可通过影响中性粒细胞功能发挥抗炎作用，保护肺组织。本研究旨在探讨dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，细胞因子il-6、il-8分泌以及h2o2产生的影响，并施以阻断剂干预，阐明dex对中性粒细胞的作用与tlr4信号通路的关系，为dex的应用提供理论依据。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，计数，分成五组：rsv组、dex组、rsv+dex组、rsv+dex+hta125组及对照组。rsv组加入rsv病毒悬液共同培养，dex组只加入dex，rsv+dex组加入dex和rsv病毒悬液共同培养，rsv+dex+hta125组预先加入hta125培养0.5h后再

8、加入rsv病毒悬液和dex共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。同时，以布地奈德（bud）作为不同激素对照进行上述试验。1h后流式细胞仪检测中性粒细胞tlr4表达，2h后流式细胞仪检测中性粒细胞h2o2产生，18h后离心收上清液elisa试剂盒检测中性粒细胞分泌的il-6、il-8。 结果（1）dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达：rsv+dex组tlr4阳性中性粒细胞为23.5724.191较rsv组tlr4阳性中性粒细胞（28.7985.266）明显降低；（2）dex显著减少rsv感染的中性粒细胞产生il-6、il-8和h2o2：rsv+dex组il-6、il-

9、8和h2o2分别为377.8612.51pg/ml、724.97656.82pg/ml和89.2211.32mfi，明显低于rsv组（il-6：557.603.34 pg/ml；il-8：1089.55828.57pg/ml；h2o2：105.229.63mfi）。bud下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，减少il-6产生，但对il-8和h2o2没有影响。（3）阻断tlr4，dex对rsv感染中性粒细胞诱导产生il-6的抑制作用进一步增强，逆转dex对rsv感染中性粒细胞h2o2产生的抑制作用：rsv+dex+hta125组il-6（238.4215.37pg/ml）较rsv+dex组il

10、-6（252.01610.116pg/ml）减低；rsv+dex+hta125组 h2o2（101.57513.9mfi）较rsv+dex组h2o2（89.21911.32mfi）增加。阻断中性粒细胞tlr4对bud作用没有影响。 结论 dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，抑制中性粒细胞的功能，减轻炎症反应，阻断tlr4可协同dex发挥抗炎作用，逆转dex抑制中性粒细胞吞噬杀伤作用。正文内容 研究背景呼吸道合胞病毒（rsv）为副粘病毒科肺炎病毒属、有包膜、非节段性的单负链rna病毒。作为引起婴幼儿下呼吸道感染最重要和常见的病毒病原体，rsv感染呼吸道上皮细胞后，诱导产生大量细胞因子、

11、趋化因子、活性氧等活性介质，导致婴幼儿喘息性疾病的发生。近年来发现toll样受体（tlr）在抗病原微生物免疫防御反应中起重要作用，通过识别细菌、病毒和环境中相应抗原的保守结构，启动天然免疫应答，tlr在联系天然免疫和获得性免疫中起桥梁作用。以往研究大多集中在探讨tlr在细菌感染中的作用，随着研究的深入，tlr在病毒感染中的作用日益受到关注。其中，tlr4通过识别rsv融合蛋白（f）蛋白，在rsv感染的发生发展中起着重要作用。我们的研究结果证实rsv感染后气道上皮细胞tlr4表达增加，增加了上皮细胞对随后的环境刺激因素如脂多糖（lps）的敏感性，明显增强炎症反应。 rsv引起的呼吸道感染患儿气道

12、聚集大量中性粒细胞，在清除病原微生物的同时也导致了自身细胞的损伤和死亡。中性粒细胞表达除tlr3以外所有的tlrs。研究证实tlr4表达对中性粒细胞的聚集、黏附、凋亡、细胞因子或趋化因子以及活性氧产生起重要调控作用。教育部新世纪优秀人才支持计划（ncet-06-0775）资助 迄今为止尚没有治疗rsv感染的特效药，采用糖皮质激素尤其是地塞米松（dexamethasone，dex）治疗rsv引起的喘息性疾病存在争议。一方面，dex可下调心、肺组织及单核细胞tlr4表达，抑制nf-b活性及tnf-等炎症因子产生，促进中性粒细胞凋亡发挥抗炎作用保护机体，另一方面，dex改变th1/th2细胞偏移，促

13、进th2发育，可能加重变态反应性炎症。目前尚未见dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达、炎症因子分泌以及杀菌功能影响的相关研究报道。 本研究拟从rsv感染对中性粒细胞tlr4表达与功能影响，进一步探讨rsv感染免疫发病机理，体外观察dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及功能的影响，为寻找防治rsv感染后气道炎症产生的新方法提供理论依据。 第一部分 rsv对中性粒细胞tlr4表达及功能影响 目的探讨rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及il-6、il-8和h2o2水平变化，进一步明确tlr4信号通路在中性粒细胞功能发挥中的作用。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，设：rsv感染组、

14、tlr4阻断组及对照组。其中：rsv感染组加入rsv病毒悬液共同培养，tlr4阻断组预先加入tlr4阻断剂hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。采用流式细胞仪检测中性粒细胞表面tlr4表达，及h2o2产生，培养18h后离心收集上清液，采用elisa方法检测中性粒细胞产生il-6和il-8水平。 结果（1）rsv感染后，tlr4阳性中性粒细胞为28.7985.266较对照组tlr4阳性中性粒细胞（17.4765.853）明显增高；中性粒细胞il-6和il-8的表达均明显增加，rsv感染组il-6和il-8分别为466.0336.4

15、78 pg/ml和1528.9672.55 pg/ml，明显高于对照组（il-6：21.20515.059pg/ml；il-8：399.34267.45pg/ml）；rsv感染后中性粒细胞产生h2o2为105.2239.633mfi，较对照组（h2o2：39.0041.30mfi）明显增加。（2）阻断中性粒细胞tlr4信号传导，rsv感染诱导的il-6产生减少（阻断组il-6：391.30743.45pg/ml；rsv感染组il-6：466.0336.478 pg/ml），中性粒细胞产生h2o2增加（阻断组h2o2：116.78712.059 mfi；rsv感染组h2o2：105.2239.6

16、33 mfi），il-8产生没有显著影响。 结论 rsv感染可上调中性粒细胞tlr4表达，诱导il-6、il-8及h2o2产生，tlr4信号通路影响rsv感染后中性粒细胞il-6和h2o2产生。 目的地塞米松（dex）治疗rsv感染引起的喘息性疾病的有效性存在争议。动物模型证实dex可通过影响中性粒细胞功能发挥抗炎作用，保护肺组织。本研究旨在探讨dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，细胞因子il-6、il-8分泌以及h2o2产生的影响，并施以阻断剂干预，阐明dex对中性粒细胞的作用与tlr4信号通路的关系，为dex的应用提供理论依据。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，计数，分成五

17、组：rsv组、dex组、rsv+dex组、rsv+dex+hta125组及对照组。rsv组加入rsv病毒悬液共同培养，dex组只加入dex，rsv+dex组加入dex和rsv病毒悬液共同培养，rsv+dex+hta125组预先加入hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液和dex共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。同时，以布地奈德（bud）作为不同激素对照进行上述试验。1h后流式细胞仪检测中性粒细胞tlr4表达，2h后流式细胞仪检测中性粒细胞h2o2产生，18h后离心收上清液elisa试剂盒检测中性粒细胞分泌的il-6、il-8。 结果（1）dex下调rsv感染后中性

18、粒细胞tlr4表达：rsv+dex组tlr4阳性中性粒细胞为23.5724.191较rsv组tlr4阳性中性粒细胞（28.7985.266）明显降低；（2）dex显著减少rsv感染的中性粒细胞产生il-6、il-8和h2o2：rsv+dex组il-6、il-8和h2o2分别为377.8612.51pg/ml、724.97656.82pg/ml和89.2211.32mfi，明显低于rsv组（il-6：557.603.34 pg/ml；il-8：1089.55828.57pg/ml；h2o2：105.229.63mfi）。bud下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，减少il-6产生，但对il-8

19、和h2o2没有影响。（3）阻断tlr4，dex对rsv感染中性粒细胞诱导产生il-6的抑制作用进一步增强，逆转dex对rsv感染中性粒细胞h2o2产生的抑制作用：rsv+dex+hta125组il-6（238.4215.37pg/ml）较rsv+dex组il-6（252.01610.116pg/ml）减低；rsv+dex+hta125组 h2o2（101.57513.9mfi）较rsv+dex组h2o2（89.21911.32mfi）增加。阻断中性粒细胞tlr4对bud作用没有影响。 结论 dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，抑制中性粒细胞的功能，减轻炎症反应，阻断tlr4可协同de

20、x发挥抗炎作用，逆转dex抑制中性粒细胞吞噬杀伤作用。研究背景呼吸道合胞病毒（rsv）为副粘病毒科肺炎病毒属、有包膜、非节段性的单负链rna病毒。作为引起婴幼儿下呼吸道感染最重要和常见的病毒病原体，rsv感染呼吸道上皮细胞后，诱导产生大量细胞因子、趋化因子、活性氧等活性介质，导致婴幼儿喘息性疾病的发生。近年来发现toll样受体（tlr）在抗病原微生物免疫防御反应中起重要作用，通过识别细菌、病毒和环境中相应抗原的保守结构，启动天然免疫应答，tlr在联系天然免疫和获得性免疫中起桥梁作用。以往研究大多集中在探讨tlr在细菌感染中的作用，随着研究的深入，tlr在病毒感染中的作用日益受到关注。其中，tl

21、r4通过识别rsv融合蛋白（f）蛋白，在rsv感染的发生发展中起着重要作用。我们的研究结果证实rsv感染后气道上皮细胞tlr4表达增加，增加了上皮细胞对随后的环境刺激因素如脂多糖（lps）的敏感性，明显增强炎症反应。 rsv引起的呼吸道感染患儿气道聚集大量中性粒细胞，在清除病原微生物的同时也导致了自身细胞的损伤和死亡。中性粒细胞表达除tlr3以外所有的tlrs。研究证实tlr4表达对中性粒细胞的聚集、黏附、凋亡、细胞因子或趋化因子以及活性氧产生起重要调控作用。教育部新世纪优秀人才支持计划（ncet-06-0775）资助 迄今为止尚没有治疗rsv感染的特效药，采用糖皮质激素尤其是地塞米松（dex

22、amethasone，dex）治疗rsv引起的喘息性疾病存在争议。一方面，dex可下调心、肺组织及单核细胞tlr4表达，抑制nf-b活性及tnf-等炎症因子产生，促进中性粒细胞凋亡发挥抗炎作用保护机体，另一方面，dex改变th1/th2细胞偏移，促进th2发育，可能加重变态反应性炎症。目前尚未见dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达、炎症因子分泌以及杀菌功能影响的相关研究报道。 本研究拟从rsv感染对中性粒细胞tlr4表达与功能影响，进一步探讨rsv感染免疫发病机理，体外观察dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及功能的影响，为寻找防治rsv感染后气道炎症产生的新方法提供理论依据。 第

23、一部分 rsv对中性粒细胞tlr4表达及功能影响 目的探讨rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及il-6、il-8和h2o2水平变化，进一步明确tlr4信号通路在中性粒细胞功能发挥中的作用。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，设：rsv感染组、tlr4阻断组及对照组。其中：rsv感染组加入rsv病毒悬液共同培养，tlr4阻断组预先加入tlr4阻断剂hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。采用流式细胞仪检测中性粒细胞表面tlr4表达，及h2o2产生，培养18h后离心收集上清液，采用elisa方法检测中性粒细胞产生il-6和il-

24、8水平。 结果（1）rsv感染后，tlr4阳性中性粒细胞为28.7985.266较对照组tlr4阳性中性粒细胞（17.4765.853）明显增高；中性粒细胞il-6和il-8的表达均明显增加，rsv感染组il-6和il-8分别为466.0336.478 pg/ml和1528.9672.55 pg/ml，明显高于对照组（il-6：21.20515.059pg/ml；il-8：399.34267.45pg/ml）；rsv感染后中性粒细胞产生h2o2为105.2239.633mfi，较对照组（h2o2：39.0041.30mfi）明显增加。（2）阻断中性粒细胞tlr4信号传导，rsv感染诱导的il-

25、6产生减少（阻断组il-6：391.30743.45pg/ml；rsv感染组il-6：466.0336.478 pg/ml），中性粒细胞产生h2o2增加（阻断组h2o2：116.78712.059 mfi；rsv感染组h2o2：105.2239.633 mfi），il-8产生没有显著影响。 结论 rsv感染可上调中性粒细胞tlr4表达，诱导il-6、il-8及h2o2产生，tlr4信号通路影响rsv感染后中性粒细胞il-6和h2o2产生。 目的地塞米松（dex）治疗rsv感染引起的喘息性疾病的有效性存在争议。动物模型证实dex可通过影响中性粒细胞功能发挥抗炎作用，保护肺组织。本研究旨在探讨de

26、x对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，细胞因子il-6、il-8分泌以及h2o2产生的影响，并施以阻断剂干预，阐明dex对中性粒细胞的作用与tlr4信号通路的关系，为dex的应用提供理论依据。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，计数，分成五组：rsv组、dex组、rsv+dex组、rsv+dex+hta125组及对照组。rsv组加入rsv病毒悬液共同培养，dex组只加入dex，rsv+dex组加入dex和rsv病毒悬液共同培养，rsv+dex+hta125组预先加入hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液和dex共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。同时，以布

27、地奈德（bud）作为不同激素对照进行上述试验。1h后流式细胞仪检测中性粒细胞tlr4表达，2h后流式细胞仪检测中性粒细胞h2o2产生，18h后离心收上清液elisa试剂盒检测中性粒细胞分泌的il-6、il-8。 结果（1）dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达：rsv+dex组tlr4阳性中性粒细胞为23.5724.191较rsv组tlr4阳性中性粒细胞（28.7985.266）明显降低；（2）dex显著减少rsv感染的中性粒细胞产生il-6、il-8和h2o2：rsv+dex组il-6、il-8和h2o2分别为377.8612.51pg/ml、724.97656.82pg/ml和89.

28、2211.32mfi，明显低于rsv组（il-6：557.603.34 pg/ml；il-8：1089.55828.57pg/ml；h2o2：105.229.63mfi）。bud下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，减少il-6产生，但对il-8和h2o2没有影响。（3）阻断tlr4，dex对rsv感染中性粒细胞诱导产生il-6的抑制作用进一步增强，逆转dex对rsv感染中性粒细胞h2o2产生的抑制作用：rsv+dex+hta125组il-6（238.4215.37pg/ml）较rsv+dex组il-6（252.01610.116pg/ml）减低；rsv+dex+hta125组 h2o2（1

29、01.57513.9mfi）较rsv+dex组h2o2（89.21911.32mfi）增加。阻断中性粒细胞tlr4对bud作用没有影响。 结论 dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，抑制中性粒细胞的功能，减轻炎症反应，阻断tlr4可协同dex发挥抗炎作用，逆转dex抑制中性粒细胞吞噬杀伤作用。研究背景呼吸道合胞病毒（rsv）为副粘病毒科肺炎病毒属、有包膜、非节段性的单负链rna病毒。作为引起婴幼儿下呼吸道感染最重要和常见的病毒病原体，rsv感染呼吸道上皮细胞后，诱导产生大量细胞因子、趋化因子、活性氧等活性介质，导致婴幼儿喘息性疾病的发生。近年来发现toll样受体（tlr）在抗病原微生物

30、免疫防御反应中起重要作用，通过识别细菌、病毒和环境中相应抗原的保守结构，启动天然免疫应答，tlr在联系天然免疫和获得性免疫中起桥梁作用。以往研究大多集中在探讨tlr在细菌感染中的作用，随着研究的深入，tlr在病毒感染中的作用日益受到关注。其中，tlr4通过识别rsv融合蛋白（f）蛋白，在rsv感染的发生发展中起着重要作用。我们的研究结果证实rsv感染后气道上皮细胞tlr4表达增加，增加了上皮细胞对随后的环境刺激因素如脂多糖（lps）的敏感性，明显增强炎症反应。 rsv引起的呼吸道感染患儿气道聚集大量中性粒细胞，在清除病原微生物的同时也导致了自身细胞的损伤和死亡。中性粒细胞表达除tlr3以外所有

31、的tlrs。研究证实tlr4表达对中性粒细胞的聚集、黏附、凋亡、细胞因子或趋化因子以及活性氧产生起重要调控作用。教育部新世纪优秀人才支持计划（ncet-06-0775）资助 迄今为止尚没有治疗rsv感染的特效药，采用糖皮质激素尤其是地塞米松（dexamethasone，dex）治疗rsv引起的喘息性疾病存在争议。一方面，dex可下调心、肺组织及单核细胞tlr4表达，抑制nf-b活性及tnf-等炎症因子产生，促进中性粒细胞凋亡发挥抗炎作用保护机体，另一方面，dex改变th1/th2细胞偏移，促进th2发育，可能加重变态反应性炎症。目前尚未见dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达、炎症因子分泌

32、以及杀菌功能影响的相关研究报道。 本研究拟从rsv感染对中性粒细胞tlr4表达与功能影响，进一步探讨rsv感染免疫发病机理，体外观察dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及功能的影响，为寻找防治rsv感染后气道炎症产生的新方法提供理论依据。 第一部分 rsv对中性粒细胞tlr4表达及功能影响 目的探讨rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及il-6、il-8和h2o2水平变化，进一步明确tlr4信号通路在中性粒细胞功能发挥中的作用。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，设：rsv感染组、tlr4阻断组及对照组。其中：rsv感染组加入rsv病毒悬液共同培养，tlr4阻断组预先加入tlr4阻断

33、剂hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。采用流式细胞仪检测中性粒细胞表面tlr4表达，及h2o2产生，培养18h后离心收集上清液，采用elisa方法检测中性粒细胞产生il-6和il-8水平。 结果（1）rsv感染后，tlr4阳性中性粒细胞为28.7985.266较对照组tlr4阳性中性粒细胞（17.4765.853）明显增高；中性粒细胞il-6和il-8的表达均明显增加，rsv感染组il-6和il-8分别为466.0336.478 pg/ml和1528.9672.55 pg/ml，明显高于对照组（il-6：21.20515.05

34、9pg/ml；il-8：399.34267.45pg/ml）；rsv感染后中性粒细胞产生h2o2为105.2239.633mfi，较对照组（h2o2：39.0041.30mfi）明显增加。（2）阻断中性粒细胞tlr4信号传导，rsv感染诱导的il-6产生减少（阻断组il-6：391.30743.45pg/ml；rsv感染组il-6：466.0336.478 pg/ml），中性粒细胞产生h2o2增加（阻断组h2o2：116.78712.059 mfi；rsv感染组h2o2：105.2239.633 mfi），il-8产生没有显著影响。 结论 rsv感染可上调中性粒细胞tlr4表达，诱导il-6、

35、il-8及h2o2产生，tlr4信号通路影响rsv感染后中性粒细胞il-6和h2o2产生。 目的地塞米松（dex）治疗rsv感染引起的喘息性疾病的有效性存在争议。动物模型证实dex可通过影响中性粒细胞功能发挥抗炎作用，保护肺组织。本研究旨在探讨dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，细胞因子il-6、il-8分泌以及h2o2产生的影响，并施以阻断剂干预，阐明dex对中性粒细胞的作用与tlr4信号通路的关系，为dex的应用提供理论依据。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，计数，分成五组：rsv组、dex组、rsv+dex组、rsv+dex+hta125组及对照组。rsv组加入rsv病毒

36、悬液共同培养，dex组只加入dex，rsv+dex组加入dex和rsv病毒悬液共同培养，rsv+dex+hta125组预先加入hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液和dex共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。同时，以布地奈德（bud）作为不同激素对照进行上述试验。1h后流式细胞仪检测中性粒细胞tlr4表达，2h后流式细胞仪检测中性粒细胞h2o2产生，18h后离心收上清液elisa试剂盒检测中性粒细胞分泌的il-6、il-8。 结果（1）dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达：rsv+dex组tlr4阳性中性粒细胞为23.5724.191较rsv组tlr4阳性

37、中性粒细胞（28.7985.266）明显降低；（2）dex显著减少rsv感染的中性粒细胞产生il-6、il-8和h2o2：rsv+dex组il-6、il-8和h2o2分别为377.8612.51pg/ml、724.97656.82pg/ml和89.2211.32mfi，明显低于rsv组（il-6：557.603.34 pg/ml；il-8：1089.55828.57pg/ml；h2o2：105.229.63mfi）。bud下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，减少il-6产生，但对il-8和h2o2没有影响。（3）阻断tlr4，dex对rsv感染中性粒细胞诱导产生il-6的抑制作用进一步增强

38、，逆转dex对rsv感染中性粒细胞h2o2产生的抑制作用：rsv+dex+hta125组il-6（238.4215.37pg/ml）较rsv+dex组il-6（252.01610.116pg/ml）减低；rsv+dex+hta125组 h2o2（101.57513.9mfi）较rsv+dex组h2o2（89.21911.32mfi）增加。阻断中性粒细胞tlr4对bud作用没有影响。 结论 dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，抑制中性粒细胞的功能，减轻炎症反应，阻断tlr4可协同dex发挥抗炎作用，逆转dex抑制中性粒细胞吞噬杀伤作用。研究背景呼吸道合胞病毒（rsv）为副粘病毒科肺炎病

39、毒属、有包膜、非节段性的单负链rna病毒。作为引起婴幼儿下呼吸道感染最重要和常见的病毒病原体，rsv感染呼吸道上皮细胞后，诱导产生大量细胞因子、趋化因子、活性氧等活性介质，导致婴幼儿喘息性疾病的发生。近年来发现toll样受体（tlr）在抗病原微生物免疫防御反应中起重要作用，通过识别细菌、病毒和环境中相应抗原的保守结构，启动天然免疫应答，tlr在联系天然免疫和获得性免疫中起桥梁作用。以往研究大多集中在探讨tlr在细菌感染中的作用，随着研究的深入，tlr在病毒感染中的作用日益受到关注。其中，tlr4通过识别rsv融合蛋白（f）蛋白，在rsv感染的发生发展中起着重要作用。我们的研究结果证实rsv感染

40、后气道上皮细胞tlr4表达增加，增加了上皮细胞对随后的环境刺激因素如脂多糖（lps）的敏感性，明显增强炎症反应。 rsv引起的呼吸道感染患儿气道聚集大量中性粒细胞，在清除病原微生物的同时也导致了自身细胞的损伤和死亡。中性粒细胞表达除tlr3以外所有的tlrs。研究证实tlr4表达对中性粒细胞的聚集、黏附、凋亡、细胞因子或趋化因子以及活性氧产生起重要调控作用。教育部新世纪优秀人才支持计划（ncet-06-0775）资助 迄今为止尚没有治疗rsv感染的特效药，采用糖皮质激素尤其是地塞米松（dexamethasone，dex）治疗rsv引起的喘息性疾病存在争议。一方面，dex可下调心、肺组织及单核细

41、胞tlr4表达，抑制nf-b活性及tnf-等炎症因子产生，促进中性粒细胞凋亡发挥抗炎作用保护机体，另一方面，dex改变th1/th2细胞偏移，促进th2发育，可能加重变态反应性炎症。目前尚未见dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达、炎症因子分泌以及杀菌功能影响的相关研究报道。 本研究拟从rsv感染对中性粒细胞tlr4表达与功能影响，进一步探讨rsv感染免疫发病机理，体外观察dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及功能的影响，为寻找防治rsv感染后气道炎症产生的新方法提供理论依据。 第一部分 rsv对中性粒细胞tlr4表达及功能影响 目的探讨rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及il-6、

42、il-8和h2o2水平变化，进一步明确tlr4信号通路在中性粒细胞功能发挥中的作用。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，设：rsv感染组、tlr4阻断组及对照组。其中：rsv感染组加入rsv病毒悬液共同培养，tlr4阻断组预先加入tlr4阻断剂hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。采用流式细胞仪检测中性粒细胞表面tlr4表达，及h2o2产生，培养18h后离心收集上清液，采用elisa方法检测中性粒细胞产生il-6和il-8水平。 结果（1）rsv感染后，tlr4阳性中性粒细胞为28.7985.266较对照组tlr4阳性中性

43、粒细胞（17.4765.853）明显增高；中性粒细胞il-6和il-8的表达均明显增加，rsv感染组il-6和il-8分别为466.0336.478 pg/ml和1528.9672.55 pg/ml，明显高于对照组（il-6：21.20515.059pg/ml；il-8：399.34267.45pg/ml）；rsv感染后中性粒细胞产生h2o2为105.2239.633mfi，较对照组（h2o2：39.0041.30mfi）明显增加。（2）阻断中性粒细胞tlr4信号传导，rsv感染诱导的il-6产生减少（阻断组il-6：391.30743.45pg/ml；rsv感染组il-6：466.0336.

44、478 pg/ml），中性粒细胞产生h2o2增加（阻断组h2o2：116.78712.059 mfi；rsv感染组h2o2：105.2239.633 mfi），il-8产生没有显著影响。 结论 rsv感染可上调中性粒细胞tlr4表达，诱导il-6、il-8及h2o2产生，tlr4信号通路影响rsv感染后中性粒细胞il-6和h2o2产生。 目的地塞米松（dex）治疗rsv感染引起的喘息性疾病的有效性存在争议。动物模型证实dex可通过影响中性粒细胞功能发挥抗炎作用，保护肺组织。本研究旨在探讨dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，细胞因子il-6、il-8分泌以及h2o2产生的影响，并施以阻断

45、剂干预，阐明dex对中性粒细胞的作用与tlr4信号通路的关系，为dex的应用提供理论依据。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，计数，分成五组：rsv组、dex组、rsv+dex组、rsv+dex+hta125组及对照组。rsv组加入rsv病毒悬液共同培养，dex组只加入dex，rsv+dex组加入dex和rsv病毒悬液共同培养，rsv+dex+hta125组预先加入hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液和dex共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。同时，以布地奈德（bud）作为不同激素对照进行上述试验。1h后流式细胞仪检测中性粒细胞tlr4表达，2h后流式细胞

46、仪检测中性粒细胞h2o2产生，18h后离心收上清液elisa试剂盒检测中性粒细胞分泌的il-6、il-8。 结果（1）dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达：rsv+dex组tlr4阳性中性粒细胞为23.5724.191较rsv组tlr4阳性中性粒细胞（28.7985.266）明显降低；（2）dex显著减少rsv感染的中性粒细胞产生il-6、il-8和h2o2：rsv+dex组il-6、il-8和h2o2分别为377.8612.51pg/ml、724.97656.82pg/ml和89.2211.32mfi，明显低于rsv组（il-6：557.603.34 pg/ml；il-8：1089.

47、55828.57pg/ml；h2o2：105.229.63mfi）。bud下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，减少il-6产生，但对il-8和h2o2没有影响。（3）阻断tlr4，dex对rsv感染中性粒细胞诱导产生il-6的抑制作用进一步增强，逆转dex对rsv感染中性粒细胞h2o2产生的抑制作用：rsv+dex+hta125组il-6（238.4215.37pg/ml）较rsv+dex组il-6（252.01610.116pg/ml）减低；rsv+dex+hta125组 h2o2（101.57513.9mfi）较rsv+dex组h2o2（89.21911.32mfi）增加。阻断中性粒细

48、胞tlr4对bud作用没有影响。 结论 dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，抑制中性粒细胞的功能，减轻炎症反应，阻断tlr4可协同dex发挥抗炎作用，逆转dex抑制中性粒细胞吞噬杀伤作用。研究背景呼吸道合胞病毒（rsv）为副粘病毒科肺炎病毒属、有包膜、非节段性的单负链rna病毒。作为引起婴幼儿下呼吸道感染最重要和常见的病毒病原体，rsv感染呼吸道上皮细胞后，诱导产生大量细胞因子、趋化因子、活性氧等活性介质，导致婴幼儿喘息性疾病的发生。近年来发现toll样受体（tlr）在抗病原微生物免疫防御反应中起重要作用，通过识别细菌、病毒和环境中相应抗原的保守结构，启动天然免疫应答，tlr在联系天

49、然免疫和获得性免疫中起桥梁作用。以往研究大多集中在探讨tlr在细菌感染中的作用，随着研究的深入，tlr在病毒感染中的作用日益受到关注。其中，tlr4通过识别rsv融合蛋白（f）蛋白，在rsv感染的发生发展中起着重要作用。我们的研究结果证实rsv感染后气道上皮细胞tlr4表达增加，增加了上皮细胞对随后的环境刺激因素如脂多糖（lps）的敏感性，明显增强炎症反应。 rsv引起的呼吸道感染患儿气道聚集大量中性粒细胞，在清除病原微生物的同时也导致了自身细胞的损伤和死亡。中性粒细胞表达除tlr3以外所有的tlrs。研究证实tlr4表达对中性粒细胞的聚集、黏附、凋亡、细胞因子或趋化因子以及活性氧产生起重要调

50、控作用。教育部新世纪优秀人才支持计划（ncet-06-0775）资助 迄今为止尚没有治疗rsv感染的特效药，采用糖皮质激素尤其是地塞米松（dexamethasone，dex）治疗rsv引起的喘息性疾病存在争议。一方面，dex可下调心、肺组织及单核细胞tlr4表达，抑制nf-b活性及tnf-等炎症因子产生，促进中性粒细胞凋亡发挥抗炎作用保护机体，另一方面，dex改变th1/th2细胞偏移，促进th2发育，可能加重变态反应性炎症。目前尚未见dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达、炎症因子分泌以及杀菌功能影响的相关研究报道。 本研究拟从rsv感染对中性粒细胞tlr4表达与功能影响，进一步探讨rs

51、v感染免疫发病机理，体外观察dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及功能的影响，为寻找防治rsv感染后气道炎症产生的新方法提供理论依据。 第一部分 rsv对中性粒细胞tlr4表达及功能影响 目的探讨rsv感染后中性粒细胞tlr4表达及il-6、il-8和h2o2水平变化，进一步明确tlr4信号通路在中性粒细胞功能发挥中的作用。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，设：rsv感染组、tlr4阻断组及对照组。其中：rsv感染组加入rsv病毒悬液共同培养，tlr4阻断组预先加入tlr4阻断剂hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验

52、。采用流式细胞仪检测中性粒细胞表面tlr4表达，及h2o2产生，培养18h后离心收集上清液，采用elisa方法检测中性粒细胞产生il-6和il-8水平。 结果（1）rsv感染后，tlr4阳性中性粒细胞为28.7985.266较对照组tlr4阳性中性粒细胞（17.4765.853）明显增高；中性粒细胞il-6和il-8的表达均明显增加，rsv感染组il-6和il-8分别为466.0336.478 pg/ml和1528.9672.55 pg/ml，明显高于对照组（il-6：21.20515.059pg/ml；il-8：399.34267.45pg/ml）；rsv感染后中性粒细胞产生h2o2为105

53、.2239.633mfi，较对照组（h2o2：39.0041.30mfi）明显增加。（2）阻断中性粒细胞tlr4信号传导，rsv感染诱导的il-6产生减少（阻断组il-6：391.30743.45pg/ml；rsv感染组il-6：466.0336.478 pg/ml），中性粒细胞产生h2o2增加（阻断组h2o2：116.78712.059 mfi；rsv感染组h2o2：105.2239.633 mfi），il-8产生没有显著影响。 结论 rsv感染可上调中性粒细胞tlr4表达，诱导il-6、il-8及h2o2产生，tlr4信号通路影响rsv感染后中性粒细胞il-6和h2o2产生。 目的地塞米松

54、（dex）治疗rsv感染引起的喘息性疾病的有效性存在争议。动物模型证实dex可通过影响中性粒细胞功能发挥抗炎作用，保护肺组织。本研究旨在探讨dex对rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，细胞因子il-6、il-8分泌以及h2o2产生的影响，并施以阻断剂干预，阐明dex对中性粒细胞的作用与tlr4信号通路的关系，为dex的应用提供理论依据。 方法取健康体检儿童全血，分离中性粒细胞，计数，分成五组：rsv组、dex组、rsv+dex组、rsv+dex+hta125组及对照组。rsv组加入rsv病毒悬液共同培养，dex组只加入dex，rsv+dex组加入dex和rsv病毒悬液共同培养，rsv+dex+

55、hta125组预先加入hta125培养0.5h后再加入rsv病毒悬液和dex共同培养，对照组用培养基或生理盐水代替rsv悬液进行实验。同时，以布地奈德（bud）作为不同激素对照进行上述试验。1h后流式细胞仪检测中性粒细胞tlr4表达，2h后流式细胞仪检测中性粒细胞h2o2产生，18h后离心收上清液elisa试剂盒检测中性粒细胞分泌的il-6、il-8。 结果（1）dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达：rsv+dex组tlr4阳性中性粒细胞为23.5724.191较rsv组tlr4阳性中性粒细胞（28.7985.266）明显降低；（2）dex显著减少rsv感染的中性粒细胞产生il-6、i

56、l-8和h2o2：rsv+dex组il-6、il-8和h2o2分别为377.8612.51pg/ml、724.97656.82pg/ml和89.2211.32mfi，明显低于rsv组（il-6：557.603.34 pg/ml；il-8：1089.55828.57pg/ml；h2o2：105.229.63mfi）。bud下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，减少il-6产生，但对il-8和h2o2没有影响。（3）阻断tlr4，dex对rsv感染中性粒细胞诱导产生il-6的抑制作用进一步增强，逆转dex对rsv感染中性粒细胞h2o2产生的抑制作用：rsv+dex+hta125组il-6（238

57、.4215.37pg/ml）较rsv+dex组il-6（252.01610.116pg/ml）减低；rsv+dex+hta125组 h2o2（101.57513.9mfi）较rsv+dex组h2o2（89.21911.32mfi）增加。阻断中性粒细胞tlr4对bud作用没有影响。 结论 dex下调rsv感染后中性粒细胞tlr4表达，抑制中性粒细胞的功能，减轻炎症反应，阻断tlr4可协同dex发挥抗炎作用，逆转dex抑制中性粒细胞吞噬杀伤作用。研究背景呼吸道合胞病毒（rsv）为副粘病毒科肺炎病毒属、有包膜、非节段性的单负链rna病毒。作为引起婴幼儿下呼吸道感染最重要和常见的病毒病原体，rsv感染

58、呼吸道上皮细胞后，诱导产生大量细胞因子、趋化因子、活性氧等活性介质，导致婴幼儿喘息性疾病的发生。近年来发现toll样受体（tlr）在抗病原微生物免疫防御反应中起重要作用，通过识别细菌、病毒和环境中相应抗原的保守结构，启动天然免疫应答，tlr在联系天然免疫和获得性免疫中起桥梁作用。以往研究大多集中在探讨tlr在细菌感染中的作用，随着研究的深入，tlr在病毒感染中的作用日益受到关注。其中，tlr4通过识别rsv融合蛋白（f）蛋白，在rsv感染的发生发展中起着重要作用。我们的研究结果证实rsv感染后气道上皮细胞tlr4表达增加，增加了上皮细胞对随后的环境刺激因素如脂多糖（lps）的敏感性，明显增强炎症反应。 rsv引起的呼吸道感染患儿气道聚集大量中性粒细胞，在清除病原微生物的同时也导致了自身细胞的损伤和死亡。中性粒细胞表达除tlr3以外所有的tlrs。研究证实tlr4表达对中性粒细胞的聚集、黏附、凋亡、细胞因子或趋化因子以及活性氧产生起重要调控作用。教育部新世纪优秀人才支持计划（ncet-06-0775）资助 迄今为止尚没有治疗rsv感染的特效药，采用糖皮质激素尤其是地塞米松（dexamethasone，dex）治疗rsv引起的喘息性疾病存在争议。一方