复合蛋白酶水解四棱豆条件的研究精品资料

1、Bffrto治且ro褐txE11 S?BFO畀S袒 -*r氐f1fcl|EFrWW5Tn四O (DBr牙 -*峯fr褐CLW呈FCD皿fKFsT曲r袒把T寄a篠r*r&frUO CXI sW腼1忙rKWoS州fU怒rS報rF褐rW怒a些芒KBTffr砾M.肝 姚HWrfWOM駅IIfflO d袒W6褐褐W變CXI) TS TrnWI二ITfCXI三四)UrFOCXIx OCXI1-3试验方法131四棱豆蛋白质溶液的制备称取适量的四棱豆用水浸泡24h后剥皮按料水比17的比例加入蒸八、馏水用组织捣碎机打浆3miin然后用洁净的纱布过滤将所得四棱豆蛋白质滤液在电炉上加热30min即自制的四棱豆蛋白质

2、溶液待其/、冷却后测疋其/、蛋白质含量并储存在冰箱中备用。13-2四棱豆蛋白质溶液的酶解取适量的蛋白质溶液用2m()I/L的NaOH和H2SO#溶液调节至试验设疋的pH值加入疋量的复合蛋白酶放入设制一一一疋温度的电热恒温水浴锅中进行反应水解至预疋时间后将酶解液沸水浴钝化蛋白酶5miin。冷却放置一一一段时间后再测疋氨基态氮含量。133水解度的测疋方法粗蛋白含量的测疋:采用GB/T155892:*008。氨基态氮测疋采用ZBK660387氨基态氮测疋法。水解度的计算方法:水解度(DH)=(游离氨基氮/总氮)X-00%0 0134酶解条件的单因素试验(1)酶用量对酶解反应的影响在pH值为6-0酶解

3、温度50酶解时间为4h的酶解条件下以水解度为指标设计酶用量为1%、2%、3%、4%、5%、6%考察不同复合蛋白酶用量(以蛋白质溶液质量为基准下同)对酶解反应的影响。酶解温度对酶解反应的影响在复合蛋白酶用量为5%pH值60酶解时间为4h的酶解条件下设制温度分别为40 r、45r、5Cr、55、60以水解度为指标考察不同温度对酶解反应的影响。酶解时间对酶解反应的影响在酶解温度为50pH值为6-0和复合蛋白酶用量为5%的酶解条件下酶解时间为1h、2h、3h、4h、5h、6h以水解度为指标考察不同时间对酶解反应的影响。pH值对酶解反应的影响在酶解时间为5h、酶解温度为50、复合蛋白酶用量为5%的酶解条

4、件下设计pH值为4、5、6、7、8、9以水解度为指标考察不同pH值对酶解反应的影响。135复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质的正交试验为了确疋复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质的最佳条件在单因素试验的基础上进行正交试验。选择酶解温度、pH、复合蛋白酶用量和酶解时间作为正交试验的4个因素进行4因素3水平的正交试验因素水平表见表101-3-6复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质的最佳条件验证试验重复上述4因素3水平正交试验验证复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质的最佳条件是否正确2结果与分析21四棱豆乳浊液中蛋白质的含量将四棱豆去皮以料水比1 :7打成浆过滤重复3次取样测疋此时乳浊液的蛋白质含量o由表2可知四棱豆在以料水比为1 :7

5、的情况下四棱豆乳浊液的蛋白质含量为2-89%D o22复合蛋白酶水解四棱豆蛋白的单因素试验221酶用量对酶解反应的影响用复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质溶液时酶用量对酶解反应有很大影响酶用量对酶解反应的试验结果见图1从图1可以看出当复合蛋白酶用量小于时，一四棱豆蛋白一质溶液一的一水解度随着复一合.蛋.白.酶一用.量.增.加.迅.速.增.大.当.复一合.蛋.白.酶用量大-于5%时-四-棱豆蛋白质溶液的水-解度随一*酶用.量.增.加-并一没.有.显.著一增.大.-这.是.丄酶一量一增.加-，-酶一与-底物一作.用一得一更一充.分一提一高一了-酶一对不一溶性蛋白的作一用匕匕 厶冃力一随着酶量的继续增加-，

6、-酶与底物一的作-用达.到饱和一，-反应达到一最n大，一即一使一再一增一加一酶一量一，一四一棱一豆一蛋一白一质一溶一液一的一水一解度变化也不-会明显1因此,考虑到经济一成本以一及-对一资一源一的一有-效一利一用一，一复一合-蛋一白_酶一用一量一为一时一，一酶一解一反一应一效一果一最一为一理一想一2亠2亠2酶解温度对一酶解反应一的影响酶解温度一对一复一合-蛋一白-酶一活一性一的一影一响一很一大一随一着一温一度一的一升一高一，-酶一催一化一反一应一速一度-加一快一亠至一达一到一最一大一反一应一速一率-为-止一，-高一温一时一酶一反一应一速-度-减一小一，-这一是-酶一本一身-由一丄高-温一变一性一

7、所致一试验一结一果一见一图一2-亠从一图一2可一以看出一，-当温度为50时，-四一棱豆蛋白质溶-液-的-水-解一度-达一到-最-高-值-当一低一丄时一亠随-着-温-度-的一提-高-蛋-白一酶-的一酶-活一增-加一亠酶-对一底-物一的作用效果增强,四棱豆蛋白质溶液的水解度随之增加J当温度高于50时酶活性逐渐降低四棱豆蛋白质溶液的水解度降低同时过高的温度会使酶的活性中心结构被破坏导致酶变性部分或全部失去催化活性因此初步确疋最适酶解温度为502-2-3酶解时间对酶解反应的影响酶解时间也是影响复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质溶液的重要影响因素之一一一合适的酶解时间能一够有效地提高生产效率节省成本试验结果见图

8、3。从图3可以看出当酶解时间小于5h时四棱豆蛋白质溶液的水解度随着时间的增加逐渐增大J当酶解时间大于5h时四棱豆蛋白质溶液的水解度随着时间的延长变化不大这是因为随着时间的延长底物不断减少酶解充分13L因此最适提取时间为5h224pH值对酶解反应的影响同温度一一一样pH值对复合蛋白酶的活性影响也很大过酸过碱都会影响酶蛋白的构象甚至会使酶变性失活。当pH值变化不是很剧烈时酶虽未变性但活力会受到影响从而抑制或促进酶解反应。试验结果见图4从图4可以看出pH值对水解度的影响较.大当pH值小于或大于7-0时复合蛋白酶的活性受到抑制致使水解度降低在pH值为7-0时四棱豆蛋白质溶液的水解度达到最大值因此复合蛋

9、白酶水解四棱豆蛋白质时调节pH值为7-0左右时效果最佳23复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质最佳水解条件优化本试验选择酶解温度、pH、复合蛋白酶用量和酶解时间作为正交试验的4个因素进行4因素3水平的正交试验正交试验结果见表3由表3可知酶解试验中影响四棱豆水解效果的主次因素为:DCBA说明在用复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质的酶解条件中因素D即酶解时间为最重要因素J其/、次分别是因素C和因素B即复合蛋白酶用量和酶解时的pH值J因素A即酶解温度为不重要因素复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质的最佳酶解优化工-艺参数为A1B2C2D2即:酶解温度为45pH值为7-0复合蛋白酶用量为5%酶解时间为5h。2-4复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质最佳水解条件验证结果验证试验结果表明:在复合蛋白酶用量为5%、酶解温度45、pH值70、酶解时间5h的水解条件下用复合蛋白酶水解四棱豆蛋白质溶液获得的酶解液的水解度最高达到18