培养基质量控制作业指导书

1、培养基质量控制作业指导书文件编号：WLCDC/ZD7651、目的：为加强我屮心检验科实验室的工作管理，保证实 验室的检测质量，特制定此作业指导书；2、范围：适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、 使用过程屮的质量控制。3、职责：3、1检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程屮 进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。3、2科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质 量控制。4、生产企业提供的材料培养基生产厂家随产品应提供下列 文件：培养基、独立成分、添加成分名称；批号；使用前的pH； 储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株；技术数据清单； 质控证书/必要的安全、危害数据。

2、5、验收实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记 录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。6、贮存及使用前质量确认6、1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。6、2验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清 单”，使用前对容器密闭性进行复查。6、3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查， 通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基 的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应 再使用。6、4制备好的成品培养基应建立“成品培养基目录清单”， 每次使用前应检查：颜色是否发生变化

3、?/是否蒸发/脱水?/是否有 微生物生长？等。如果发生上述异常情况，则不应再使用。7、制备好的成品培养基的质量控制新购的不同批次的商品 化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的 测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录 单”。7、1物理指标控制1）测试20C25C的pH值2）琼脂层 厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质；凝胶稳定 性、粘稠度和湿度。7、2微生物学指标控制可根据要求选用定量方法、半定量方 法或定性方法（详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作 方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”。

4、7、3微生物污染的控制从每批制备好的培养基屮选取至少一 个（或1%）平板或试管，置于37C或按特定标准屮规定的温度培 养 18ho8、生长特性8、1生长率将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固 体和液体培养基屮，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低 限值。1）定量方法生长率PR的计算：PR二NS/NO NS：从一个或 多个待测培养基平板上得到的菌落总数。N 0：从一个或多个规定 的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应NlOOcfu ） o要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0、7,该 类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最 低应为0、1；每平板（或每试管

5、）的接种水平为10CFU lOOCFUo2）半定量方法半定量方法采用生态测量技术在平板上划 线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G, G值不应超 过标准规定的允许范围。3）定性方法定性方法采用划线法观察。选择性 将浓度为104CFU/mL106CFU/mL的非目标菌工作 菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性 应达到规定值。定量方法选择因子SF： SF二DO Parker S生长率 37C24-48h 金黄色葡萄球菌 ATCC6538/25923 TSA 定量 PR2O、5 黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外有透明带 选择性37C48h 大肠杆菌ATCC25922/

6、8739定性全部抑制特异性 37C24-48h表皮葡萄球菌ATCC12228 定性 黑色/灰色 菌落，周围为一混浊带，其外无透明带MYP S生长率30C24- 48h腊样芽胞杆菌ATCC11778 TSA定量PR20、7具沉淀带的粉 色菌落选择性37C48h大肠杆菌ATCC25922 定性全部抑 制特异性37C48h枯草芽胞杆菌ATCC6633 定性一 不具沉淀带的粉色菌落培养基用途培养条件测试菌株参 考培养基控制方法判定标准特征反应VRBG （结晶紫中性红胆 盐葡萄糖琼脂）S生长率37C24h大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA定量PR20、5带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落鼠伤

7、寒沙门菌ATCC14028选择性37C20h粪链球菌ATCC29212/19433 一定性全部抑制一一 VRBL （紫红胆汁乳糖）S生长率 30C20h大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA定量PR20、5带有或不 带沉淀带的淡紫色菌落选择性30C20h粪链球菌 ATCC29212/19433 定性全部抑制特异性30C20h铜 绿假单胞菌ATCC27853 定性无色至浅棕色菌落CT-SMAC （改良山梨醇麦康凯琼脂）S生长率37C24h大肠杆菌0157： H7 ATCC43894/43895 TSA 定量 PR20、5 透明菌落，表面 淡黄棕色，菌落直径约1mm选择性37C24h金黄色葡

8、萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特异性37C24h大肠杆菌 ATCC11775/25922 定性粉色菌落BGBLB （煌绿乳糖胆 盐肉汤）L生长率 30C24-48h 大肠杆菌 ATCC25922/8739 TSA 半定量浊度2+,导管1/3产气产气并浑浊弗氏柠檬酸杆菌 ATCC25922/8739选择性粪链球菌ATCC29212/19433定性不生长 EC L生长率44C2448h大肠杆菌ATCC25922 半 定量 浊度2+,导气管1/3产气 产气并浑浊 选择性44C2448h 铜绿假单胞菌ATCC27853b 定性不生长 EC-MUG/ LS- MUG L生长率44C244

9、8h大肠杆菌ATCC25922 半定量 浊度2+,导气管1/3产气产气并浑浊，产生荧光选择性 44C2448h铜绿假单胞菌ATCC27853b 定性不生长 乳糖胆盐发酵培养L生长率37C24h大肠杆菌ATCC25922 半定量导气管1/3产气产气并变黄色选择性37C24h鼠伤 寒沙门菌ATCC14028 定性不产气、仍为紫色LST （月 桂酸肉汤）L生长率37C24h大肠杆菌ATCC25922 半定 量导气管1/3产气一一选择性37C24h福氏志贺氏菌 CMCC51572 定性表2计数用非选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准 特征反应PCA （平板计数琼脂）S生长率

10、30C72h大肠杆菌 ATCC25922/8739 TSA定量PR20、7 金黄色葡萄球菌 ATCC6538枯草芽抱杆菌ATCC6633表3选择性增菌培养基培养 基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应EEL生长率37C24h大肠杆菌ATCC25922/8739半定量VRBG 10CFU粉红至红色菌落，有或没有沉淀带鼠伤寒沙门菌 ATCC14028选择性粪肠球菌ATCC29212全部抑制RVS L生长 率41、5C24h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量XLD或其他选择 性培养基上1OCFU 肠炎沙门氏菌ATCC13076铜绿假单胞菌 ATCC27853 选择性 41、5C24h大肠杆

11、菌ATCC25922半定量TSA 全抑制 粪链球菌ATCC29212 TSA上V10CFU SC （亚硒酸盐胱氨酸）L生长率37C24h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量XLD或 其他选择性培养基上1OCFU不同培养基上菌落特征不同（见标 准）+大肠杆菌ATCC25922 +铜绿假单胞菌ATCC27853b选择性 37C24h大肠杆菌ATCC25922半定量TSA上V10CFU 粪链 球菌ATCC29212 TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）L生长率37C24h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量XLD或 其他选择性培养基上1OCFU不同培养基上菌落特征不同（见标 准）伤寒沙门菌CMCC5007

12、1选择性37C24h大肠杆菌ATCC25922 TSA上V10CFU 碱性蛋白月东水L生长率37C24h霍乱弧 菌CMCC16109半定量TCBS或其他选择性培养基上1OCFU不同 培养基上菌落特征不同（见标准）副溶血性弧菌CMCC20001选择 性 37C24h 大肠杆菌 ATCC25922/8739 TSA 上V10CFU 福氏 志贺氏菌CMCC515727、5%氯化钠肉汤L生长率37C24h金黄色葡萄球菌 ATCC6538半定量B-P平板或其他培养基上10CFU不同培养基上 菌落特征不同（见标准）表4非选择性增菌培养基培养基用途 培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应BHI生长率 37

13、C24h金黄色葡萄球菌ATCC6538定性浊度12 蛋白月东 盐L稀释2025C45min大肠杆菌ATCC25922定量+/-50%菌 落数/至（+/-50%原始菌落数一一金黄色葡萄球菌ATCC25923表 4非选择性增菌培养基（续）培养基用途培养条件测试菌株 控制方法判定标准特征反应乳糖蛋白月东肉汤L生长率 37C24h大肠杆菌ATCC25922 定性导气管1/3产气选择性 37C24h鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性 SCDLP液体培 养基L生长率37C24h铜绿假单胞菌ATCC27853定性浊度 12大肠杆菌ATCC25922金黄色葡萄球菌ATCC6538液体沙氏培养基L生长率26C

14、5天白色念珠菌CMCC98001定性 浊 度12 真菌培养基L生长率26C5天白色念珠菌 CMCC98001定性浊度12 表5选择性分离培养基培养基 用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应亚硫酸 酸钳琼脂（BS） S生长率37C48h鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性良好生长（2）菌落呈黑色，有金属光泽 福氏志贺氏菌CMCC51572菌落呈棕 色选择性大肠杆菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01） 无典型菌落 粪链球菌ATCC29212/19433全部抑制（0） XLD S 生长率37C24h鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性 良好生长（2）菌落呈黑色福氏志贺氏菌CMCC5

15、1573菌落呈无色选择性大 肠杆菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01）无典型菌落粪 链球菌ATCC29212/19433全部抑制（0）血琼脂平板S生长率 37C2448h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923定性良好生长（3 溶血,透明溶血环 粪链球菌ATCC29212定性 良好生长a溶血， 草绿色溶血环TCBS S生长率37C2448h霍乱弧菌 CMCC16109定性良好生长菌落较大，呈黄色副溶血性弧菌 CMCC20001定性良好生长菌落较大，呈绿色4号琼脂S生长 率37C2448h霍乱弧菌CMCC16109定性 良好生长 菌落较大、 扁平透明、湿润、中心带有黑色 非01群

16、霍乱弧菌CMCC17045定 性良好生长菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色选择性 37C24h大肠杆菌ATCC25922/8739定性全部或部分抑制（0 1）一一表5选择性分离培养基（续）培养基用途培养条件 测试菌株控制方法判定标准特征反应伊红美兰琼脂S生长 率37C24h大肠杆菌ATCC25922/8739定性良好生长菌落紫黑 色带金属光泽鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性良好生长菌落灰白 色半透明福氏志贺氏菌CMCC51573定性 良好生长 菌落灰白色半 透明TSI（三糖铁琼脂）S生长率37C24-48h大肠杆菌ATCC25922/8739定性 良 好生长斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性 普通变形杆菌CMCC49001定性良好生长斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳 性福氏志贺氏菌CMCC51573定性良好生长底层变黄，斜面变 红，不产气，硫化氢阴性 鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性 良好生 长底层变黄，斜面变红，产气，硫化氢阳性表6非选择性分离 培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特 征反应 营养琼脂S生长率37C24h大肠杆菌ATCC25922定性 良好生长(2)鼠伤寒沙门菌ATCC14028c小肠耶尔森氏菌ATCC23