肉蛋制品检测评估以及工作验氮脂肪胆固醇淀粉

1、肉蛋制品检测评估以及工作 验氮脂肪胆固醇淀粉 肉松、肉干、 中式香肠、酱卤肉制品 熟练掌握分析天平、电热干燥箱、恒温水浴锅、 分光光度计、酸度计、干燥器的正确使用方法；掌 握肉蛋及其制品中挥发性盐基氮、脂肪、酸价、过 氧化值、亚硝酸盐、人工合成色素、蛋白质、胆固 醇、淀粉、复合磷酸盐、氯化钠、三甲胺氮及组胺 的测定原理、方法及操作要点；掌握用平板菌落计 数法测定菌落总数的方法和检测技能；掌握以最大 概率数法测定大肠菌群数的方法与技能。 1)无氨蒸馏水。 2)氧化镁混悬液(10gL)：称取1.0g氧化镁，加100水，振摇成 混悬液。 3)硼酸溶液(20gL)：作为吸收液用。 4)甲基红-次甲基蓝

2、混合指示剂：次甲基蓝指示剂(1gL)与甲基红- 乙醇指示剂(2gL)，临用时将上述两种指示液等量混合为混合指示 液。 5)0.010mol/L盐酸标准滴定溶液。 2.试剂 1.原理 1)半微量定氮器。 2)微量滴定管：最小分度0.01mL。 3)其他：研钵、250mL三角烧瓶、150mL烧杯、6玻璃漏斗、滤纸 等。 (1)样品处理将样品除去脂肪、骨及腱后，切碎搅匀，称取约10.0 g，置于锥形瓶中，加100mL水，不时振摇，浸渍30min后过滤，滤液 置于冰箱备用。 4.操作方法 3.仪器 (2)蒸馏滴定将盛有10mL吸收液及56滴混合指示液的锥形瓶置于 冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面

3、下，准确吸取5.0mL上述 样品滤液置于蒸馏器反应室内，加5mL 10gL氧化镁混悬液，迅速盖 塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏5min即停止，吸收 液用(0.010molL)盐酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。 1.原理 6.精密度 5.结果计算 1)饱和碳酸钾溶液：称取50g碳酸钾，加50mL水，微加热助溶，使用 上清液。 2)水溶性胶：取10阿拉伯胶，加10mL水，再加5mL甘油和5无水碳 酸钾(或无水碳酸钠)，研匀。 3)吸收液、指示剂、0.010mol/L盐酸标准滴定溶液(同半微量定氮法)。 1)微量扩散皿(附玻片盖)：直径8，内室直径3.8，皿高1.8 ，内室皿高1.1

4、1.2，如图9-1所示。 3.仪器 2.试剂 2)恒温培养箱(37)。 (1)样品处理同半微量定氮法。 (2)具体操作先将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿内室加入1mL 吸收液，并加指示剂1滴，在皿外室一侧加上述样品浸抽液1mL；另一 侧加饱和碳酸钾溶液1mL，立即加盖，并轻轻转动皿，使两液混合。 盐酸滴定至绿色变蓝紫色。 4.操作方法 图9-1微量扩散皿 6.说明 5.结果计算 1)扩散皿洗涤时先经皂液煮洗后再经稀酸液中和处理，然后再用蒸馏 水冲洗，烘干后才能使用。 2)本法终点容易过量，需注意控制。 3)精密度同半微量定氮法。 (1)原理将试样分散于氯仿-甲醇混合液中，于水浴上轻微沸腾， 氯

5、仿-甲醇混合液与一定的水分形成提取脂类的有效溶剂，在使试样 组织中结合态脂类游离出来的同时增大了与磷脂等极性脂类的亲和性， 从而有效地提取出全部脂类。 (2)仪器 1)具塞三角瓶。 2)电热恒温水浴锅：50100。 3)提取装置(见图9-2)。 1.氯仿-甲醇提取法 4)布氏漏斗：11G-3、过滤板直径40mm，容量60100mL。 5)具塞离心管。 6)离心机：3000rmin。 7)组织捣碎机。 (3)试剂 1)氯仿：体积分数为97以上。 2)甲醇：体积分数为96以上。 3)氯仿-甲醇混合液：按21体积比混合。 4)石油醚。 5)无水硫酸钠：以120135干燥12h。 (4)操作方法 1)

6、提取：准确称取均匀样品5g置于具塞三角瓶内(高水分食品可加适 量硅藻土使其分散)，加入60mL氯仿-甲醇混合液(对于干燥食品 图9-2提取装置 2)回收溶剂：提取结束后，取下烧瓶用布氏漏斗过滤，并且用氯仿- 甲醇混合液洗涤滤器、烧瓶及滤器中试样残渣，滤液、洗涤液一并收 集于具塞三角瓶内，置6570水浴中回收溶剂，至烧瓶内物料呈浓 稠态，而不能使其干涸，然后冷却。 3)石油醚萃取、定量：用移液管加入25mL石油醚，然后加入15g无水 硫酸钠，立即加塞混摇1min，将醚层移入具塞离心沉淀管进行离心分 离(3000rmin)5min。 (5)结果计算 2.5从25mL石油醚中取10mL进行干燥，故乘

7、以系数2.5。 (6)注意事项 1)提取结束后先用玻璃过滤器过滤，再用溶剂洗涤烧瓶，每次用5mL 洗3次，然后用30mL洗涤残渣及滤器，洗涤残渣时可用玻璃棒一边搅 拌试样残渣，一边用溶剂洗涤。 2)回收溶剂也可利用索氏抽提器，提脂瓶需事先恒重后，再把提取液 移入提脂瓶。 3)溶剂回收残留物应具有一定流动性，不能完全干涸，否则脂类难以 溶解于石油醚而使测定值偏低。 4)在用石油醚萃取时，应先加石油醚再加无水硫酸钠，以免影响脂肪 的溶解。 (1)原理试样与稀盐酸共同煮沸，试样中蛋白质及碳水化合物被水 解，细胞壁被破坏，游离出包含的和结合的脂类部分，过滤得到的物 质，干燥，然后用正己烷或石油醚抽提留

8、在滤器上的脂肪，除去溶剂， 即得脂肪总量。 (2)试剂 1)抽提剂：正己烷或3060沸程的石油醚。 2)盐酸：2molL溶液。 3)蓝色石蕊试纸。 4)玻璃珠。 2.酸水解法 (3)仪器及用具 1)试验室常规仪器和设备。 2)绞肉机：孔径不超过4mm。 3)索氏抽提器。 (4)试样的制备取有代表性试样至少200g，于绞肉机中使其均质化 (至少绞两次)并混匀，封闭贮存于一完全盛满的容器中(防止其腐败 和成分变化)，并尽可能提早分析试样。 (5)操作方法 1)酸水解：称取试样35g，精确至0.001g，置于250mL锥形瓶中，加 入2molL盐酸溶液50mL，盖上小表面皿，于石棉网上用火加热至沸

9、腾，继续用小火煮沸1h并不时振摇。 2)抽提脂肪：将烘干的滤纸放入衬有脱脂棉的滤纸筒中，用经抽提剂 润湿的脱脂棉擦净锥形瓶、小表面皿和大表面皿上遗留的脂肪，放入 滤纸筒中。 3)称量：取下接受瓶，回收抽提剂，待瓶中抽提剂剩12mL时，在水 浴上蒸干，于(1032)干燥箱内干燥30min，置干燥器内冷却至室 温，称量。 4)抽提完全程度验证：用第二个内装玻璃珠、已干燥至恒重的接受瓶， 用新的抽提剂继续抽提1h，增量不得超过试样质量的0.1%。 (6)结果计算 (7)允许误差由同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不 得超过0.5。 (8)注意事项 1)放入滤纸筒时高度不要超过回流弯管，否则超

10、过回流弯管以上部分 样品中的脂肪不能提尽造成误差。 2)提取时水浴温度不可过高，回流速度控制在每56min回流一次为 宜。 3)在抽提时，冷却管上端最好连接一个氯化钙管，这不仅可防止空气 中水分的进入，还可避免抽提剂的挥发。 4)浸出物在烘箱内干燥时间不能过长，因为极不饱和脂肪酸会受热氧 化而增加质量。 5)抽提瓶干燥时，瓶口应侧倒放置，使挥发物易与空气形成对流，干 燥较快。 1.索氏提取法 (1)原理试样用无水乙醚、石油醚或正己烷等溶剂抽提后，除去溶 剂，干燥并称量抽提物，即为试样中的游离脂肪。 (2)试剂 1)无水乙醚：沸点34.4。 2)石油醚：沸程3060。 3)正己烷：沸点68.7。

11、 4)海砂：化学纯，粒度0.650.85mm，SiO2的质量分数为99。 5)无水硫酸钠。 (3)仪器及用具 1)试验室常规仪器和设备。 2)绞肉机：孔径不超过4mm。 3)索氏抽提器。 (4)试样制备同本节总脂肪测定中试样的制备。 (5)操作方法 1)试样装入滤纸筒：称取25g试样(精确至0.001g)，可取测定水分 后的试样置于小烧杯中，加入适量海砂(或无水硫酸钠)，用玻璃棒混 合均匀，全部移入滤纸筒中。 2)干燥：把滤纸筒移入电热式干燥箱中，于103干燥1h。 3)抽提：将滤纸筒放入索氏抽提器的抽提筒内，连接已经干燥至恒重 的接受瓶，加入无水乙醚(石油醚或正己烷)至瓶内容积的处，于水浴

12、上加热，每56min回流一次，共抽提68h。 4)称量：取下接受瓶，回收溶剂，待接受瓶中溶剂剩12mL时在水浴 上蒸干，于100105的烘箱中烘至恒重。 5)第二次抽提：用第二个干燥至恒重的接受瓶，再用新的溶剂抽提1h， 以验证抽提是否完全，增量不超过试样质量0.1。 (6)结果计算 (7)允许误差由同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不 得超过0.5。 (8)注意事项 1)加入无水硫酸钠的目的是为了将样品干燥。 2)所用乙醚必须是无水的，含水则可能将样品中的糖及无机物抽出， 造成误差，被测样品也应先干燥。 )其他注意事项同氯仿-甲醇提取法。 (1)原理三氯甲烷浸出物以脂肪计。 (2)试

13、剂中性三氯甲烷(内含无水乙醇)。 (3)仪器 2.三氯甲烷冷浸法 1)脂肪浸抽管：玻璃制品，管长150mm，内径18mm，缩口部填脱脂棉， 见图9-。 图9-脂肪浸抽管 2)脂肪瓶：标准磨口，容量为150mL。 (4)操作方法称取2.002.50g均匀样品置于100mL烧杯中，加约15 g无水硫酸钠粉末，以玻璃棒搅匀，充分研细，小心移入脂肪浸抽管 中，用少许脱脂棉拭净烧杯及玻璃棒上附着的样品，将脱脂棉一并移 入脂肪浸抽管内。 (5)结果计算同索氏提取法。 (6)说明 1)在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 平均值的3。 2)本法适用于蛋及蛋制品中脂肪含量的测定。 1)胆

14、固醇：其提纯方法为称取约6胆固醇，加入60mL无水乙醇，在 沸水浴中加热到溶解，置于冰箱中冷却，待结晶后倾去上清液。 2)硫酸铁铵储备液：溶解4.463硫酸铁铵FeNH4(SO4）212H2O 于100mL 85(质量分数)磷酸中。 3)硫酸铁铵显色剂：取10mL硫酸铁铵储备液用浓硫酸稀释至100mL， 将此液放置在硅胶干燥器内，备用。 4)胆固醇标准溶液：准确称取重结晶胆固醇100mg，溶于冰醋酸中， 并稀释至100mL。 2.试剂 1.测定原理 )胆固醇标准使用液：取胆固醇标准液10mL，用冰醋酸稀释到100mL。 )500g/L氢氧化钾溶液。 )石油醚：重蒸馏。 )氯仿：重蒸馏。 )甲醇

15、：重蒸馏。 )50g/L氯化钠溶液。 )纯氮气(纯度为99.99%)。 1)721型分光光度计。 2)电热恒温水浴。 3.试剂 3)电动振荡器。 4)具玻塞试管(10mL、25mL)。 5)绞肉机。 (1)样品的处理和提取市售的肉类除去皮、筋，将肥瘦肉分开，分 别在绞肉机中绞碎，肥肉绞23次，瘦肉绞34次，按下列步骤进行 样品提取。 (2)样品分析吸取2mL样品氯仿提取液，置于带塞的25mL比色管内， 在65水浴中用氮气吹干(吹时用水泵在另一端抽气)直抽到无氯仿气 味为止(一般需45min)。 4.操作方法 (3)标准曲线的绘制吸取胆固醇标准使用液0.0mL、0.4、0.8 、1.0、1.2m

16、L置于25mL带塞比色管中。 1)氯仿提取液必须吹干，否则易出现混浊。 2)皂化必须完全，否则会出现混浊，一般6065皂化1.5即可避 免。 3)在皂化时加入氯化钠可防止产生乳状，并加强石油醚的分离。 6.说明 5.结果计算 )氢氧化钾酒精溶液：氢氧化钾溶于L(体 积分数)酒精中。 )氢氧化钾溶液。 )表面皿。 )容量瓶。 )古代坩埚。 )恒温水浴锅。 )高温炉。 3.仪器 2.试剂 1.原理 1)该法适用于蛋白质、脂肪含量较高的肉蛋制品，如午餐肉、灌肠等 食品中淀粉的测定。 2)测定肉蛋制品中淀粉的含量也可以采用容量法。 6.说明 5.结果计算 4.操作方法 1)200g/L三氯醋酸溶液。

17、2)甲苯：试剂级，用无水硫酸钠脱水，再用0.5mol/L硫酸振摇，除去 干扰物质，最后再用无水硫酸钠脱水使其干燥。 3)苦味酸甲苯溶液 储备液：将2干燥的苦味酸(试剂级)溶于100mL无水甲苯中，即 成为20g/L苦味酸甲苯溶液。 应用液：将储备液稀释成为0.2g/L苦味酸甲苯溶液，即可应用。 2.试剂 1.原理 三甲胺(CH3)3N是鱼肉类食品由于细菌的作用，在腐败过程中，将 氧化三甲胺(CH3)3N还原而产生的，系挥发性含氮物质，将此项物 质抽提于无水甲苯中，与苦辣酸作用，形成黄色的苦味酸三甲胺盐， 然后与标准管同进比色，即可测得检样中三甲胺氮含量。 4)11碳酸钾溶液。 5)10%(体积

18、分数)甲醛溶液：先将甲醛(试剂级，体积分数为36%38%) 用碳酸镁振摇处理并过滤，然后稀释成为体积分数为的甲醛溶 液。 6)无水硫酸钠。 7)三甲胺氮标准溶液：称取盐酸三甲基胺(试剂级)约0.5，稀释至1 00mL，取其5mL再稀释至100mL，取最后稀释液5mL用微量或半微量凯 氏蒸馏法准确测定三甲胺氮的质量，并计算出每毫升的含量；然后稀 释使每毫升含有100 图9-4Maijel Gerson反应瓶 1)25mL Maijel Gerson反应瓶(见图9-)。 2)100mL或150mL玻塞三角瓶。 3)100mL量筒。 4)微量或半微量凯氏蒸馏器。 5)分光光度计。 (1)样品处理将取

19、得的被检样20(视样品新鲜程度确定取样量)剪 细研匀，加水70mL移入玻塞三角瓶中，并加200g/L三氯醋酸10mL，振 摇，沉淀蛋白质后过滤，滤液即可供测定用。 4.操作方法 3.仪器 (2)测定取上述滤液5mL(亦可视样品新鲜程度确定，但必须加水补 足至5mL)置于Maijel Gerson反应瓶中，加10%(体积分数)甲醛溶液1m L、甲苯10mL和1碳酸钾溶液3mL，立即盖塞，上下剧烈振摇60次。 5.结果计算 (1)仪器绞肉机、电热恒温水浴锅、索氏抽提器、电热恒温干燥箱。 (2)试剂3060沸程石油醚、2molL盐酸溶液、玻璃珠。 1)数据记录：将试验数据填入下表。 3.数据记录及处

20、理 2.操作步骤 1.仪器及试剂 表格 2)按式(-)计算肉中总脂肪的含量。 (1)仪器绞肉机、碱式滴定管、250mL锥形瓶、分析天平。 (2)试剂0.050molL氢氧化钾标准滴定溶液、中性乙醚-乙醇(2 1)混合溶剂、10gL酚酞乙醇溶液。 2.操作步骤 1.仪器及试剂 1)数据记录：将试验数据填入下表。 表格 2)按式(-)计算广式腊肉的酸价。 (1)仪器表面皿、100mL容量瓶、古氏坩埚、恒温水浴锅、高温炉。 (2)试剂氢氧化钾酒精溶液(50g氢氧化钾溶于1000mL 95%(体积分 数)酒精中)、2molL氢氧化钾溶液。 1.仪器及试剂 3.数据记录及处理 1)数据记录：将试验数据填入下表。 表格 2