【毕业学位论文】（Word原稿）龙胆中环烯醚萜类成分及其提取物工艺研究野生动植物保护与利用硕士论文

密级： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 龙胆 中环烯醚萜类成分及其 提取物工艺研究 on on I 摘 要 本文以 粗糙龙胆 （ 为试材， 采用 常规方法结合现代植物化学分离手段， 对其部分化学成分分离及结构鉴定 ， 建立龙胆提取工艺 及 龙胆 提取物 龙胆资源的高效开发及可持续利用 提供 理论及方 法学 参考 。为此，开展本项研究 ， 并取得了如下进展： 常压、 中压 ） 柱 色谱 对 龙胆提取物过 大孔树脂 的 10%、 20%、 50%乙醇洗脱部分进行中压柱层析及常 压 柱层析分离，得到六个化合物 理化鉴定 和 有机波谱鉴定 ， 确定 其 化合物分别为 ： 胆苦苷（ 化合物 同分异构体 ， 推测化合物 别为下述三种化合物其中之一，346356) 3) 2,3,62,33 同时 从时间、耗能、前处理等方面 ， 对常 压 柱层析 、中压柱层析、高速逆流色谱 三种方法制备龙胆苦苷 进行了比较 ， 得出高速逆流色谱法 是 较 有效 的一种方法 。 龙胆中龙胆苦苷进行了制备性分离。以氯仿 正丁醇 5:4:2:4）为溶剂系统，下相作流动相，主机正转，转速 820r/速 2mL/定相保留率 38%，龙胆苦苷保留时间为 320 380 测 ，纯度可达 。 声提取时间、料液比为三因素，进行 4)因素、水平正交设计，确定以 50%乙醇为溶剂、料液比 1:8、超声清洗 30最 优 提取工艺， 得膏率为 龙胆苦苷含量 纹图谱 。 色谱条件： 色谱柱 50 以流动相 A：甲醇， B：水 ,梯度洗脱， 0 30A： 20 80%； 30 45A： 80 20%； 45 55A： 2020%； 检测波长 270流速 1mL/温 35 。 根据 10 批次供试品测定结果，经与参照物对照 ， 以 及比较所有测定和记录的色谱图，标定共有指纹峰 10 个， 指纹图谱相似度均 大于 本文创新点： 学成分进行制备性分离研究，并建立 二氯甲烷 为 龙胆环烯醚萜类 化学成分分离提供技术参考。 离制备龙胆苦苷。 建立一种分离龙胆苦苷的新方法。 胆提取物 纹图谱。 给龙胆提取工艺提供质量标准。 关键词 ： 龙胆 ， 环烯醚萜 ， 提取工艺 on we a as We 0%,20%,50% of 1, A6 by 3 of 3 4656) A5,43) 2,3,62,33 in of we 2. 5:4:2:4） as We 20r/8%;20 of 3. 9(34) by is 0%, 0:8. 4. 50 B 0 30A 20 80%； 30 45A 80 20%； 45 55A 2020%。 =270mL/5 to of we of as in . to we up of by 2. to up a of 3. we 录 第一章 引言 . 1 胆科植物化学成分研究进 展 . 1 烯醚萜、裂环环烯醚萜及其苷类 . 1 萜类 . 5 酮 类 . 6 酮 . 7 物碱 . 8 糖 . 9 机酸、醇类 . 9 他 . 10 胆科药理作用研究进展 . 11 脏的保护作用 . 11 胃 . 12 炎、抗菌、利尿作用 . 12 疗甲状腺机能亢进作用 . 12 血糖、降血压作用 . 12 中枢神经系统的作用 . 13 疫反应 . 13 副作用 . 13 他作用 . 13 研究的目的意义 . 14 第二章 龙胆化学成分分离纯化及鉴定 . 15 验材料和仪器 . 15 料与试剂 . 15 验仪器 . 15 验方法 . 16 孔树脂富集龙胆中龙胆苦苷的研究 . 16 孔树脂筛选 . 16 胆化学成分提取分离 . 17 取分离 . 17 度检测 . 19 构鉴定 . 22 结 . 26 第三章 龙胆苦苷高速逆流色谱制备工艺研究 . 27 验材料与仪器 . 27 料与试剂 . 27 验仪器 . 27 验方法 . 28 品制备 . 28 V 剂系统筛选 . 28 品处理 . 29 速和流速的筛选 . 29 度对分离效果的影响 . 29 效成分分离 . 29 测纯度 . 30 验结果 . 30 结 . 32 第四章 龙胆提取工艺研究 . 33 胆提取工艺研究 . 33 验材料与仪器 . 33 验方法 . 34 验结果 . 36 胆提取物 纹图谱构建 . 38 验方 法 . 38 验结 果 . 39 结 . 44 第五章 讨论 . 45 胆化学成分分离 制备 研究 . 45 胆提取工艺研究 . 45 第六章 结论 . 46 参考文献 . 47 致谢 . 52 附录 . 53 作者简历 . 63 文缩略表 英文缩写 英文全称 中文名称 临界流体萃取 波提取 仿生提取法 速逆流色谱 效液相色谱 UV 紫外光谱法 磁共振法 谱法 GC 相色谱法 层色谱 效毛细 管电泳法 超滤技术 中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 1 第一章 引言 龙胆科龙胆属 (物全世界约 500种， 我国有 247种 , 以龙胆类和秦艽类药用植物最多 ,分布于欧洲、亚洲、澳大利亚北部、新西兰及整个北美 ,并沿安第斯山脉达合恩角和美洲北部。分布遍及全国 ,主要生长于高山、流石滩、高山草甸和灌丛中。此外 ,此属中还有大量植物作为民族用药和民间用药 ,具有良好的药理效果。秦艽类主要功效是祛风湿、清湿热、止痹 痛 ,用于风湿痹痛 ,筋脉拘挛 ,骨节烦痛 ,日哺潮热 ,小儿疳积发热等。龙胆类主要功效清热燥湿、清泻肝火 ,用于治疗湿热黄疸、胆囊炎、食欲不振、目赤、尿路感染、带状疱疹和甲状腺机能亢进等。 胆科植物化学成分研究进展 目前国内外已研究过许多种龙胆属植物的化学成分 ,做了大量的分离鉴定、药理和临床研究，龙胆科药用植物的化学成分主要有：环烯醚萜及裂环烯醚萜类、 口 山 酮苷类、黄酮类、三萜类、生物碱类及其他类。 烯醚萜、裂环环烯醚萜及其苷类 环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物，根据目前发现的母核结构可分为两类：第一 种为 C 7和 构成六碳环烯醚萜类；第二类为 C 7和 构成裂环烯醚萜类，此类又可分为 7与 胆属植物含有大量的裂环环烯醚萜类和环烯醚萜类化合物 ,主要以其苷类形式存在 ,味苦 ,可作为健胃剂的有效成分，最为常见的是 龙胆苦苷 (当药苷 (当药苦苷 (。 2004年王世盛等用常规柱色谱及制备高效液相色谱方法进行分 离纯化 ,从龙胆科獐牙菜属植物抱茎獐牙菜的水溶性部分得到獐牙菜苦苷 (当药苦甙 )、龙胆苦苷和獐牙菜苷 (当药甙 )； 1994年张颖君等采用常规柱色谱从龙胆科植物黑边假龙胆甲醇提取物的石油醚萃取部分分离得到马钱子酸 ； 1996年郁关平等从翅萼龙胆甲醇提取物中用反相 别是翅萼龙胆苷 b； 2002年李玉林等采用硅胶柱层析分离和 化 , 从龙胆科獐牙菜属植物红直獐牙 (溶性部分得到落干酸 ( 1996年张聿梅等首次从毛獐牙菜中经硅胶及聚酰胺柱层析分到龙胆苦甙 ； 2002年潘莉等从龙胆科獐牙菜属植物祁连獐牙菜（ 草 90%乙醇提取液中采用硅胶柱层析进行分离纯化龙胆苦苷 ； 1994年刘艳红从秦艽的甲醇水溶部分分离得到秦艽苷 A、哈巴苷；1994年刘艳红从藏药乌奴龙胆的全草种分离得到 5个环烯醚萜苷命名为乌奴龙胆苷 2003年陈千良从陕西产秦艽中水溶部分分离了 61992年骆跃华等从狭叶獐牙菜中分离了 4酯獐中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 2 牙菜苦苷、狭叶獐牙菜苦苷（ 狭叶獐牙菜苷（ 2004年周乐从秦岭龙胆全草的乙醇提取物中分离得到 1994年 1995年孔德云等从伸梗獐牙菜分离得到 21996年 （ ）、大叶秦艽苷 B（ ）； 1996年 （ ）、 红 花 龙 胆 苷 B （ ）、 红 花 龙 胆 苷 C（ ）； 1996年 间 1997年 7香豆酰马钱酸； 1998年 10大叶秦艽苷；有人还分离了 6 萄 糖 基 獐 牙 菜 苷 、 三 花 苷（ 、 大叶苷 C () 、大叶苷D( 2978年 1983 年从 分离出裂环烯醚萜苷1994年从 1997年从 1998 年从 分离 出的2还有特殊类型的化合物 ,1992年从 裂环环烯醚萜类和环烯醚萜类化合物还有 木鳖苷 )类系列化合物、叶珊瑚苷 )类化合物。1998年从 990年 4 (2R)1990年 1994年从 81991年 种环烯醚萜 6= 1O,)； 6=H,R 1,=H)； 6= 1,)； 6=H,R 1,H, =R 3=H,)； =R 3=H, 从龙胆属植物中还分离出上述化合物的一系列衍生化合物 ,1990年 分离出 6 1993年从 分离出31990年 1996年 -(o,-(2,36-(2,3 龙胆苦苷 ( 当药苷 ( 当药苦苷 (中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 3 哈巴苷 秦艽苷 A（ 花苷（ e） 乌 奴 龙 胆 苷 A（ 中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 4 乌 奴 龙 胆 苷 B( 乌 奴 龙 胆 苷 C( 乌 奴 龙 胆 苷 D（ R=H） 2乌 奴 龙 胆 甙 E（ R= 6 三 花 龙 胆 甙 （ R=H） 大叶秦艽苷 A( R=H） 7R= 大 叶 秦 艽 苷 B（ R= 大叶苷 C (e C) 大叶苷 D() 中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 5 番木鳖苷 ( 桃 叶 珊 瑚 苷 （ e e 萜类 1994年张颖君等从龙胆科植物黑边假龙胆 （ 甲醇提取物正丁醇萃取部分分离得到 齐敦果酸 ( 1993年近藤嘉和从秦艽根种分离得到甲基褐煤酸酯 (褐煤酸 ( 1994年林克勤等从东北龙胆地上部分中分离得到熊果酸，用氯仿 开 2003年 个三萜类化合物 ,已知化 合物分别为香树素、羽扇醇、乌发醇 3根二醇 3 2,3312烯 2,332 桦木醇 、 32003年 个新的三萜化合物 1,23,112002年潘莉等从龙胆科獐牙菜属植物祁连獐牙菜全草 90%乙醇提取液中采用硅胶柱层析进行分离纯化齐墩果酸、乌苏酸 ； 2003年陈千良从陕西产秦艽中酯溶部分分离了栎瘿酸 (国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 6 有人 还 分 离了 齐 墩 果 酸 （ 栎瘿酸 ( 山酮类 龙胆 口 山酮及异龙胆 口 山酮是龙胆科植物一个很有用的化学分类特征 ,它与黄酮性质相似 ,在龙胆属中主要以 苷 的形式存在 ,它们的苷类绝大部分存在于龙胆科植物中，但苷元分布的科属较广，这类成分从结构上看其母核是一种苯并色原酮，其某些性质与黄酮类相近，由于这些化合物具有一定的药理活性而引起人们关注，如良 好的中枢神经抑制，心血管兴奋作用及利胆和抑制结核杆菌的作用等，因此，口 山酮类化合物越来越引起人们的研究兴趣。 1981年 山酮， 即 1， 73 山酮； 2004年王世盛等用各种柱色谱方法进行分离纯化 ,从龙胆科獐牙菜属植物抱茎獐牙菜的水溶性部分得到 13,5 山酮 16) 1,8- 三甲氧基 口 山酮 喃 葡 萄 糖 、 1- 羟基 ,5- 三甲氧基 口 山酮16) 2002年李玉林等采用硅胶柱层析分离和 从龙胆科獐牙菜属植物红直獐牙菜 的 水溶性部分得到 3种苷类成分 :81,53 山酮 (81,3,5三羟基 口 山酮 (13,7,8 山酮 ( 1999年英国 从日本产植物蔓龙胆地上部中分 得 5个 口 山酮苷分别命名为蔓龙胆 口 山酮苷 时还分得已知的 口 山酮 2002年潘莉等从龙胆科獐牙菜属植物祁连獐牙菜全草 90%乙醇提取液中采用硅胶中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 7 柱层析进行分离纯化出 15个化合物 ,分别鉴定为 :1,73,8 山酮、1,83,7 山酮、 1,7,83 山酮、 1,3,7,8 山酮、 173,8 山酮、 183,7 山酮、 71,83 山酮、1喃木糖 (16) 喃 葡 萄 糖 基 - 二 甲 氧 基 口 山 酮 、1喃木糖 (16) 喃 葡 萄 糖 基 - 二 甲 氧 基 口 山 酮 、816) 3 山酮 。 口 山酮的母核 1,73 山酮 酮 龙胆属的许多植物中得到的黄酮类化合物绝大多数为异荭草苷 （ 、异牡荆苷 (系列衍生化合物。 1994 年张颖君等从龙胆科植物黑边假龙胆甲醇提取物的石油醚萃取部分分离得到獐牙菜酚苷； 2004 年 王世盛等用各种柱色谱方法进行分离纯化 ， 从龙胆科獐牙菜属植物抱茎獐牙菜的水溶性部分得到芒果苷 (异荭草苷、当药黄素 (当药醇苷 ( 52002 年李玉林等采用硅胶柱层析分离和 化 ，从龙胆科獐牙菜属植物红直獐牙菜水溶性部分得到一种 异荭草苷； 2005年许旭东等从龙 胆科獐芽菜属植物毛獐芽菜干燥全草乙醇提取物的醋酸乙酯部分和正丁 醇部分进行柱色谱分离，根据光谱数据和理化性质确定各化合物的结构 ，首次分离得到 6 种成分 ， 分别 果苷、 1,3,5,82002 年潘莉等从龙胆科獐牙菜属植 物祁连獐牙菜全草 90%乙醇提取液中采用硅胶柱层析进行分离纯化得到木犀草 素 ； 2004 年 杨维霞从秦岭龙胆中分离了水飞蓟素异构体 ； 有人分离了苦参酮（ 、 苦参酚（ 异牡 荆 苷 ； 1996 年郭圣森等近年来从粗茎龙胆中先后分离得到了 黄酮类化合物 ； 1978 年从 分离出 2-(=2-(=H； 1979 年从 分离 31980 年从 离出 i 4- 1979 分离 21992 年从 分离 1980中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 引 言 8 年 从 离出异牡荆甙 ， 1979 分离出 2 分离出 7 1997 从 分离的 其它类型的有 1979 年从 分离出 71980 年从 离到 1983年 分 离出的 1984 年 从 分 ,7,34-( 异荭草苷 ( 异牡荆苷 ( 苦参酮（ 苦参酚 ( 物碱 2002年字敏等以氯仿 冲溶液 ( 3: 为溶剂系统 ,上相为固定相 ,下相为流动相 ,从龙胆科獐牙菜属植物红河青叶胆的生物碱中分得5 个成分 ,其中 3 个成分与碘化铋钾试