胸交感神经阻滞降低大鼠低氧性肺动脉高压的机制.doc

胸交感神经阻滞降低大鼠低氧性肺动脉高压的机制 大鼠脑神经干细胞向胆碱能细胞分化的效应标记免疫分析与临床，（）刘彩玉，王春芳，呼钟理，等脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰的表达对的影响中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五届会员代表大会论文集，王菲和基因在脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中表达的研究太原山西医科大学，侯天勇，伍亚民，龙在云，等维甲酸和因子联合诱导神经干细胞分化为胆碱能神经元及其体内移植的实验研究中华神经医学杂志，（）易松敏，蔚洪恩，邓春圣，等信号在神经干细胞向胆碱能神经元分化过程中的作用实用骨科杂志，（），刘彩玉脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰的表达对关键基因的影响太原山西医科大学，康霞神经干细胞移植治疗帕金森病的效果观察中国实用神经疾病杂志，（）马全红神经干细胞移植对神经系统疾病的治疗中华神经创伤外科电子杂志，（）（）（）胸交感神经阻滞降低大鼠低氧性肺动脉高压的机制于世寰刘凤岐张春玲鲁?王立峰孙文广路伟娜（哈尔滨医科大学附属第一医院呼吸内科；心内科；病理科；营养咨询科黑龙江哈尔滨）【摘要】目的研究胸交感神经阻滞（）降低大鼠低氧性肺动脉高压（）的机制。 方法选择健康雄性大鼠只，随机分为常氧组、低氧组、低氧罗哌卡因组、低氧生理盐水组各只。 常氧组在常氧常压下饲养周，其余组大鼠在自制常压低氧（）舱内饲养周，同时低氧罗哌卡因组和低氧生理盐水组给与胸段硬膜外腔置管分别注入罗哌卡因和生理盐水各行胸段（胸）交感神经阻滞术（）。 用放射免疫分析法测定大鼠血清环磷酸鸟苷（）和血清肿瘤坏死因子（）含量；和蛋白印迹法测定大鼠肺组织反应元件结合蛋白（）的基因表达和蛋白质表达。 结果低氧罗哌卡因组大鼠血浆水平增加和血清水平降低，与低氧组、低氧生理盐水组比较差异显著。 低氧罗哌卡因组大鼠肺小动脉血管的基因表达和蛋白质表达均降低，而低氧组、低氧生理盐水组表达增加。 结论可降低大鼠血清水平，升高血浆水平。 同时能逆转肺小动脉的基因和蛋白质过表达现象，这可能是降低和改善血管重构重要的分子学机制之一。 【关键词】大鼠低氧性肺动脉高压胸交感神经阻滞肿瘤坏死因子环磷酸鸟苷反应元件结合蛋白，【】（）（），（），【】；基金项目黑龙江省自然科学基金项目（面上项目）（编号）肺动脉高压（，）导致的肺心病是目前第位最为常见的心脏疾病，使患者逐渐出现心输出量下降、右心房压力上升以及右心室舒张末压力升高表现，最终导致肺心病右心衰竭和死亡。 确诊后平均存活时间仅为年，尽管多种药物据说可以改善预后，但三年内病死率仍高达。 因此的治疗始终都是一个亟待解决的重要课题，也是困扰临床医生的医学难题。 在肺动脉高压患者中低氧性肺动脉高压（，）是肺心病发生发展最常见因素，因此控制是治疗肺心病的一个重要环节。 孙桂芳等利用交感神经阻滞治疗扩张性心肌病，人体和动物实验，已证明可改善扩张性心肌病心力衰竭患者的心功能分级，缩小扩大的心腔，逆转心脏重构；能显著改善扩张性心肌病心力衰竭患者的右心收缩功能。 于世寰等利用胸交感神经阻滞（）干预低氧性肺动脉高压大鼠发现可以减低大鼠平均肺动脉高压，并且逆转低氧性肺动脉高压的右心室肥厚和肺血管重构现象，但干预发生机制目前国内外未曾见报道。 因此本实验欲利用来干预实验性大鼠，探讨治疗的相关机制。 材料与方法实验动物健康雄性大鼠（清洁级）只，体质量（）（中国医科大学动物学部提供）。 试验方法和步骤低氧性肺动高压大鼠模型的制备选择健康雄性大鼠只，随机分为四组常氧组大鼠暴露于环境空气，氧浓度为，常压（个大气压）条件下饲养（）；低氧组大鼠暴露于低氧环境（）饲养（）；低氧罗哌卡因组大鼠暴露于低氧环境并罗哌卡因（次）治疗（）；低氧生理盐水组大鼠暴露于低氧环境并生理盐水（次）治疗（）。 低氧暴露大鼠放入自制常压低氧舱内饲养，大鼠暴露于环境空气或放置于密闭常压低氧舱内，氧浓度稳定在（），舱内氧气和二氧化碳比率每天检测。 胸交感神经阻滞术低氧罗哌卡因组和低氧生理盐水组给与硬膜外腔置管行胸段（胸）交感神经阻滞（）术，第二日经硬膜外留置管每天分别注入罗哌卡因和生理盐水，每注入一次，夜间停止给药。 环磷酸鸟苷（）血浆和肿瘤坏死因子（）血清留取和测定术后各组大鼠以异戊巴比妥钠（）行腹腔麻醉后，行颈动脉或心脏穿刺取血，取血液放入有抗凝剂的试管（抗凝剂为），用离心机，离心，提取血浆，放入试管中，置于冰箱待测。 另取血液放入没有抗凝剂的试管中，凝固分离血清，亦置于冰箱待测。 采用放射免疫法，按照试剂盒操作说明书步骤，测定待测大鼠血浆的含量和血清的含量。 法测定反应元件结合蛋白（）表达处死大鼠，取各组右肺下叶肺组织约，法提取实验各组大鼠肺组织总，用的琼脂糖胶电泳判断样品完整性，用紫外分光光度计测定样品纯度。 法进行扩增，选用基因作为内参对照，内参基因和目的基因引物序列分别是和；和反应条件预变性，预变性，退火（），延伸，延伸，总共个循环。 琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统分析处理，计算与的灰度比值（强度面积强度面积）。 测定的蛋白表达取保存于冰箱的各组右肺下叶组织约，加入制备蛋白样品。 凝胶电泳法经过电泳、转膜、杂交、荧光显影，分离目的蛋白，利用管家基因的蛋白表达量作为内参，以待测样品目的蛋白条带的灰度除以该样品内参条带的灰度值，得到目的蛋白的相对表达量。 统计学分析计量资料数值用均数标准差（珋）来描述，统计分析应用软件包，每个参数采用单因素方差分析进行比较，组间两两比较采用检验。 为差异有统计学意义。 结果大鼠血浆和血清含量变化给予低氧处理后水平降低，低氧暴露组大鼠应用罗哌卡因后血浆水平恢复至正常水平，而生理盐水对照组水平未见明显变化。 给予低氧处理后水平升高，低氧罗哌卡因组血浆水平较低氧组有所升高，但是仍低于常氧组，而生理盐水组水平变化不明显。 见表。 表各组大鼠血浆和血清含量变化（珋）组别只数（）（）常氧组低氧组低氧罗哌卡因组低氧生理盐水组值值注与常氧组比较，；与低氧组比较，；与低氧罗哌卡因组比较，。 对各组大鼠肺组织血管表达的影响给予低氧处理后表达上调，应用罗哌卡因后低氧罗哌卡因组表达较低氧组下调，而生理盐水组未见明显变化。 见表。 表各组大鼠肺组织血管表达的影响（珋）组别只数常氧组低氧组低氧罗哌卡因组低氧生理盐水组值值注与常氧组比较，；与低氧组比较，；与低氧罗哌卡因组比较，。 临床和实验医学杂志年月第卷第期对各组大鼠肺组织血管蛋白表达的影响结果显示，与常氧组相比，低氧组和低氧生理盐水组大鼠肺组织中蛋白呈高表达现象，而低氧罗哌卡因组大鼠肺组织的蛋白表达显著降低。 见图。 图法检测各组大鼠肺组织血管蛋白表达注常氧组；低氧组；低氧罗哌卡因组；低氧生理盐水组讨论是许多肺脏疾病常见的并发症，例如慢性阻塞性肺疾病，很显然慢性缺氧的存在与相关，并且慢性缺氧在引起心肌营养不良中扮演一个重要角色。 多项研究均支持低氧可诱导肺动脉高压及血管重建，既往研究中也发现，低氧环境下暴露的大鼠引起的增高，且伴随着肺血管重建。 这些发现与目前临床研究相一致，在慢性缺氧情况下，肺动脉中的各种细胞（例如平滑肌细胞、成纤维细胞）快速增长，促成血管壁增厚，我们既往研究的组织学表现也支持缺氧可引起炎症和白细胞浸润导致血管壁增厚。 经进一步研究我们又发现了慢性低氧暴露大鼠的血清水平升高，表明存在着系统性炎症反应。 这一发现也说明了缺氧刺激了炎症介质的释放，例如一氧化氮和细胞因子等，。 心脏交感神经参与了心脏功能和外周循环的调节，据文献记载，肺血管系统是受自主神经系统支配的，目前越来越多的证据表明慢性缺氧会激发交感神经活动导致肺血管收缩，在缺氧期间，氧敏感的化学感受器（在颈动脉体和脑干）受刺激导致人类交感神经传出增加，导致血管收缩性物质释放增多，血管收缩剂的增加是被认为可以抵消低氧诱导的血管扩张和维持的动脉压力。 长期慢性缺氧是提供化学反射激活的原因。 因此，与慢性缺氧相关的肺脏疾病疾病，由于交感神经对肺血管刺激的恶性循环从而引起了肺动脉高压。 用胸膜外麻醉方式的心区交感神经阻滞已有报道，该研究认为干预了心肌营养不良的恶性循环。 我们既往研究也发现，显著改善了慢性缺氧情况下的和肺血管重构，这结果也表明了降低了低氧诱导的交感神经的兴奋性，从而导致的降低。 为进一步探讨胸交感神经阻滞（）对实验性低氧性肺动脉高压大鼠肺血流动力学和病理形态学改变的机制，本研究测定了各组大鼠血浆的含量和血清含量，观察到大鼠低氧组含量明显低于常氧组。 经干预后低氧罗哌卡因组血浆含量明显增加，与低氧组比较差异具有统计学意义（）。 这说明缺氧后含量的降低可引起慢性缺氧性肺血管收缩和肺小动脉增厚，机制可能是通过增加血浆的含量来减轻低氧性肺血管收缩，逆转肺血管的重建从而降低的水平。 这也进一步证实了慢性低氧引起细胞信号转导通路各组份的遏制性变化导致的肺血管舒张性降低，可能是形成肺动脉高压的重要机制的理论，。 本研究还观察到低氧组血清含量明显高于常氧组，经干预后血清明显下降，低氧罗哌卡因组明显低于低氧组，与常氧组比较差异无统计学意义。 慢性低氧暴露大鼠的血清水平升高表明慢性低氧存在着系统性炎症反应，即缺氧刺激了炎症介质的释放。 干预后减少可能是通过抑制交感神经过度激活，使血中儿茶酚胺降低，抑制肾素血管紧张素系统，血管紧张素水平下降，从而打破炎性因子间作用的恶性循环，改善了炎症反应，从而减少炎性细胞因子的分泌如等，。 反应元件结合蛋白（）是一种重要的核转录因子，其调节启动子中具有基因转录。 这种核转录因子具有调节广泛的生物学功能，是细胞内多种信号通路的一种关键成分。 目前研究认为是低氧应答的转录因子，它的表达认为可反映平滑肌的增殖程度，是需在缺氧情况下激活低氧诱导因子的翻译而起作用，低氧通过激活特定的、的氧感受器，导致控制基因转录激活的各种转录因子如的产生或下调，从而诱导许多促有丝分裂因子的产生。 本实验结果显示，在慢性缺氧情况下，无论表达水平还是蛋白表达水平均上调，经干预后发现表达下调，说明可消除低氧诱导的上调现象，同时也说明了实验性大鼠肺小动脉管壁增厚、血管重塑可能与过表达有关，而可逆转因过表达所造成的肺血管重塑。 其机制可能是阻断了交感神经传导通路，使去甲肾上腺素释放减少，腺苷酸环化酶激活减少，影响了信号传导通路所致，。 结论总之，本实验说明胸交感神经阻滞术降低低氧性肺动脉高压是通过作用于自主交感神经，阻断了交感神经传导通路，从而打破炎性因子间作用的恶性循环，进而改善了低氧相关性炎症反应。 对于慢性低氧性性肺动脉高压引起的慢性肺源性心脏病的治疗，胸交感神经阻滞术可成为将来具有巨大潜力的有效的新的治疗方法。 胸交感神经阻滞术降低低氧性肺动脉高压的机制除此之外，可能还存在其他炎性因子对信号转导通路功能的，影响，今后作者将继续进一步深入地研究。 参考文献，（），（），（）孙桂芳，刘凤歧胸段硬膜外阻滞治疗重度心力衰竭临床麻醉医学杂志，（）于世寰，刘凤岐，张春玲，等胸交感神经阻滞对低氧性肺动脉高压大鼠的影响中国急救医学，（），（），（），（），（），（），（），（），（），（），（），（），（）（）（）三叉神经痛模型大鼠的疼痛状况与脑内兴奋性氨基酸递质表达的相关性刘艳春韦彦锋李家伟（延安大学咸阳医院口腔科陕西咸阳；陕西西安交通大学医学院口腔医院颌面外科陕西西安）基金项目陕西省科技计划资助项目编号（）【摘要】目的探讨三叉神经痛（）模型大鼠的疼痛状况与脑内兴奋性氨基酸递质表达的相关性。 方法健康大鼠只随机分为对照组只与模型组只，模型组于大鼠背部皮下注射硝酸甘油建立模型，对照组在大鼠背部皮下注射生理盐水。 观察与记录大鼠不同时间段的行为与疼痛状况，采用免疫组化法检测谷氨酸的表达并进行相关性分析。 结果模型组大鼠在造模后内都出现挠头、爬笼、耳红等症状，对照组大鼠未出现上述行为变化，表明造模成功。 在不同时间段内