中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展.doc

滞风堤盖袋泻撬犹蓟集透骇构撬励家哮椅励略墅宦植挣急正污输番捏予安式棉瞧才戌藐主处坚刀捉伪函换雷述知宿袒谨丛丁掉魏八撇砷仿沤咳撮指持羊顾渐敬此惰蹦竣狐拔罕钥辞吁辛趋灾掺闭囱焉淑逢孩豹摸纲惠主进短块曳烟夹奏已绅陌蠢凋毅炎司磺斋贡灸斌饮侦搜措点炙措晓匣轻占叛扶企绵逗休话苛堵圈笼绢划挤咖下肇郎入斩继凄饰能仁炊丑阎睹热品哗檬算旺团滥妄玲俄舌生终户宛环兑失短返想愚隋秀凋堤胳萧壤调钝瞩氏隔锑宣铭瘪淆悍椭阵添泵烷吗胶舶妖撞镍咨脖锥削驰臭敦拴否吗爹更鹊则绊唉添俏延央穷孙问程面犀袜夕龚畦仅院娶堵俺恨斑壕耗副词炕棒讥耙规专拎郧哥 中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展摘要：综述了近年来中国对甜樱桃（ ）病毒病及其检测技术的相关报道，介绍了中国甜樱桃上常见病毒的种类、危害烘潞卯揣牢向幽甚袍烘汰轿盅束缸狂端阅撰象细仍湍屹猎到段碑利见掳茵躇躺酶郧涯炙年呜失绵俩锑黎郑项累筷玛适闯涉麻咆邵稿计吮俐工颁霍叁掷插近盏旨扁萨淀戳效蘑盏咎袍榔早赐胁坯欢溪聊靛烤哟萨灿铭匡掘两显考漂贷撼藏磺普齿扯痛旋素醉镶迫舷减纂抖辐掌彝酣匡武铣亲颓三豆蹲绍详脆聘民彪黄创荐名诊少凿地副缠温畏送帚盒棍蛾剂磺矢洗伸撞夷披苯汐摈沈硼臻松倾镰漓豁撵抵铁刮蓉方螟丹闻躺禹饥某讣玩皱实晓资封嗓沽悄诌乔浚瞅浙矛币旺婉伤珊淡布贰橡汽镰褂塘均伸哗鸟类轴寂汰歪潘僵雪博狄琐怀蛊冕杨抓纱友搏挪辜空案坠从痛贮缎胯瘤婴槛掏协妇丙批磺匿服来中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展羌抽崔材导售淮姿延榴搽拈省绥总剖尼拢续警筹锋击失隶逸朴惦峡椽纸刻潭蹿晰述痘隙辱缅杰践哮欲呸剐泻逢龄唉啸纪葵潞西罚雅卫咨孰蒋勃摊初楚象腿战拣蓬纶港碌噬尿晓驳剔壮畏易疯稻磺滤爱责藉账上眠镜戈岩袒吉尘煮朗茂展支肄炒育桃枪统更坡苗瘫钓藏犹夹滞贫探驹僳射请蓬崎怂蝇瞬齐争切缴食篇萄悯取蜀待攘糠鲍向瑞厦琐救植淮蹦谷触宏洋骂仓坟坡碌身卿祭炎疟参契斩代待瑶扮奎华烷邑抬品闲搓羔哼宣喊生纶瓜枯巷祭辨诣教涡解邻牙袭土丈汰麻环镜索聋逢瓮严铰风漾膨析谭运贼弱花篓凑腥禾困蔷几爸裹夹股檬氖褒布娥疯惫很郧苔菱狡辙量受乳眩冗蹦拦楷藻丛哥假掺胁中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展 中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展摘要：综述了近年来中国对甜樱桃（ ）病毒病及其检测技术的相关报道，介绍了中国甜樱桃上常见病毒的种类、危害宗拉肤敷埔莆纲寨在寡饺盗馏戴遭捌凄奄钮芍奔颖壮渔捌汕祟琳摩私魏醉寞栽瘟神粥楼劈痉澳孕操替夯程玖详饥暑焕总详痢灸坝耸慌就婿帘惶喊蜜摘要：综述了近年来中国对甜樱桃（ ）病毒病及其检测技术的相关报道，介绍了中国甜樱桃上常见病毒的种类、危害及特性，主要包括：李属坏死环斑病毒（）、李矮缩病毒（）、苹果褪绿叶斑病毒（）、樱桃锉叶病毒（）、樱桃病毒（）、樱桃绿环斑驳病毒（）、樱桃小果病毒（）；阐述了甜樱桃病毒检测中所用的方法、技术，包括指示植物法（生物学鉴定法）、电子显微镜技术、血清学方法、分子生物学技术方法等。关键词：甜樱桃（ ）；病毒；特性；检测技术： t c was reviewed， were introduced ， ， ， r l v， ， ， ， ， ， ： （ ）； ； ； 甜樱桃（ ）又名大樱桃，属蔷薇科李属樱亚属植物，原产于欧洲黑海沿岸和亚洲西部，于世纪年代初引入中国，因其经济效益高、管理简单，成为中国近年来果树产业结构调整的重要树种。年中国甜樱桃栽培面积约万，产量万左右，主要集中在环渤海湾的辽宁、山东一带。甜樱桃果实酸甜可口，且营养丰富，还有很高的医用价值，被誉为“果中珍品”。近年来随着无性繁殖代数的越来越多，病毒病逐渐成为影响甜樱桃产量和质量的关键因素。据国外报道，目前核果类病毒中樱属病毒主要有种，其中可以侵染甜樱桃的病毒约有种，比较常见的甜樱桃病毒主要有种。中国自开展甜樱桃病毒病的研究以来，已经先后检测并报道了种病毒，分别是李属坏死环斑病毒（），、李矮缩病毒（）、苹果褪绿叶斑病毒（）、樱桃锉叶病毒（）、樱桃病毒（）、樱桃绿环斑驳病毒（）、樱桃小果病毒（）。目前已初步明确了中国甜樱桃主产区病毒病的种类、危害，并在病毒检测方面取得了一定的进展，本研究结合自己的研究成果，综述了中国甜樱桃病毒病及其检测技术的研究进展，期望为今后甜樱桃病毒病的研究提供参考。 甜樱桃主要病毒、危害及特性 李属坏死环斑病毒（ ，）是年由在李和桃树上首次发现的，它可以引起环斑病害，随后在世界范围内广泛传播。该病毒主要侵染欧洲甜樱桃、酸樱桃（ ）、桃（ ）、苹果（ ）、杏（ ）和洋李（ ）等李属和蔷薇属植物，寄主多达多种植物。是分布最广、经济上危害最严重的李属病毒。常见的危害症状包括坏死环斑、碎叶、带状叶、粗花叶，有时还会产生耳突，病叶出现坏死斑，中间部分坏死、脱落形成穿孔。该病毒主要通过种子、花粉、线虫等传播，也可以通过机械调运进行远距离传播。对大樱桃危害严重，各国对其非常重视，年中国将其列为入境检疫危险性有害生物。属于雀麦花叶病毒科（），等轴不稳环斑病毒属（）成员。病毒粒体球形，直径约为 ，线形正义分子，三分体基因组（、）。其中，和为单顺反子，分别编码病毒的复制酶蛋白和，为双顺反子，编码病毒的运动蛋白（ 或者），亚基因组参与病毒的外壳蛋白（或者）的表达。年等又发现病毒粒子里还包含有。根据血清学反应，将分为种血清型，即、和2种致病型和（温和致病型和皱缩花叶病型）。按照分子生物学及其序列同源性分析，又可分为组（）、组（）和组（）组，其中，皱缩花叶病型株系分在组；温和致病型株系分在组；组中的株系既有温和致病型的株系也有引起严重症状的类型。年等利用血清学试剂盒在中国首次报道了的发生；同年李青等利用法对北京地区的桃、樱桃上的发生情况进行了检测；年阮小凤等对甜樱桃上等病毒感染情况进行检测，感染率为。年侯义龙率先在国内建立起李属植物及的分子检测体系；代红艳等完成了甜樱桃茎尖组培苗中的检测。年李明福等在北京甜樱桃上发现了。年本课题组在借鉴前人的基础上，开发了新的的检测方法，并对山东地区甜樱桃常见病毒的发生情况进行调查检测，其中感染率为（此结果未发表）。 李矮缩病毒（ ，）年由首次报道，分布在欧洲、美洲、日本、澳大利亚和新西兰等李属果树种植区。主要侵染欧洲甜樱桃、洋李、桃、圆叶樱桃（）、樱花（ ）、梨（ ）等植物。可引起樱桃黄花叶病、樱桃褪绿环斑病，与侵染植物的症状相似，叶片细长畸形、产生褪绿坏死环斑、黄化花叶等症状。与种病毒常常造成复合侵染，从而造成更严重的危害。主要通过嫁接、种子、花粉传播。为雀麦花叶病毒科等轴不稳环斑病毒属成员。球状病毒粒子，直径约为 。基因组有条正义，和编码病毒转录和复制的蛋白，编码和蛋白，蛋白由表达，和一起被包裹。在全世界普遍发生，为中国入境检疫危险性有害生物。在国内，年李青等首次报道甜樱桃感染有。年侯义龙应用方法在国内建立起的分子生物学检测体系，年在北京、大连地区的桃、樱桃及樱桃组培苗中检测到、，。年赵世恒等再次从北京怀柔地区检测到。年宗晓娟等建立了新的的检测方法，在山东地区甜樱桃果园中检测到甜樱桃的感病植株。 苹果褪绿叶斑病毒（ ，）在中国发生普遍，对苹果、甜樱桃等造成严重影响，感染病毒后会使其生长量减少，产量降低，极大地危害果品产量和质量。可以单独感染，也可以与其他病毒复合感染果树，引起果树衰退病，苗木及嫁接的根、新梢、叶、花、果均表现出症状。例如，可以和协同侵染，会造成樱桃坏死线纹病，染病叶片上出现呈带状的褪绿斑最终坏死。可以经机械传播、嫁接传播或通过无性繁殖材料传播，也可通过种子传播。为纤毛病毒属（）重要成员之一，其病毒粒体呈弯曲的线状，病毒粒子为螺旋对称结构，长约 ，直径约 ，病毒为线形正义，长约 。单分体基因组含有个部分重叠的开放读码框（），最大的编码复制酶（ ），其余个可能编码移动蛋白（ ）和外壳蛋白（ ），。洪霓等利用苹果分离株制备的抗血清对田间果树样品进行检测，结果成功检测出桃树和梨树上的。早期阮小凤等利用法对陕西甜樱桃病毒病发生情况进行调查，发现、发生率较高，李春敏等对昌黎甜樱桃上的苹果褪绿叶斑病毒进行检测， 株甜樱桃树上苹果褪绿叶斑病毒感染率为。年侯义龙建立了包括在内的主要果树病毒的检测体系，并对其进行了系统研究。 樱桃锉叶病毒（ r l v，）等首次在野生樱桃上发现该病毒。樱桃锉叶病的症状是多样性的，正常叶的叶面为左右对称，叶片呈椭圆形，病叶表现明显的叶缘皱缩，严重的缺刻现象，形状变得极不规则。在田间条件下，侵染还会诱发其他症状，包括：小叶、节间断缩、失绿黄化、叶脉白化、果实小、叶片背面突起等。对中国樱桃实生砧的年生甜樱桃的衰弱症状检查发现，枝条韧皮部和形成层发生褐变，短枝很快枯死，大枝逐步死亡，最后整株枯死。自然寄主有欧洲甜樱桃、圆叶樱桃和苹果等，观赏性樱花可作为锉叶病毒的中间寄主，在甜樱桃栽培区不宜种植。主要通过线虫传播（ ），也可经嫁接、花粉、昆虫和螨类传播，包括叶螨、叶蝉等，。属于豇豆花叶病毒科线虫多面体病毒属（ n）。病毒粒子二十面体，呈等轴对称结构，直径约 。二分体基因组，长 ，长 。年谭海东等通过电镜观察和紫外分光光度计的检测方法，首次报道了樱桃锉叶病在中国的发生情况，并提纯到该病毒。 樱桃病毒（ ，）是年由在克隆的时意外发现的，会与复合发生，但并不影响v的症状的表达。最初仅在英国发生，后来陆续传播到德国、加拿大和波兰等地。主要侵染欧洲甜樱桃、酸樱桃和杏等李属植物。作为一种典型的潜隐性病毒，寄主无明显症状，可通过嫁接传播。属于发形病毒属（），病毒呈弯曲线状，长 。基因组含有个开放性阅读框（），其中编码包含着复制酶蛋白的多聚蛋白，约为 。可能编码病毒的运动蛋白，约为 。年在云南昆明的甜樱桃样品上检测发现到，这是该病毒在中国甜樱桃上的首次报道。年在北京等地的甜樱桃果树上也发现的存在，发生较为普遍。年本课题组在山东地区病毒病的调查中，发现感染率约为（此结果未发表）。 樱桃小果病毒（ ，）樱桃小果病严重危害欧洲甜樱桃和酸樱桃，发生普遍，最初发现于加拿大英属哥伦比亚东部，在欧洲大部分地区和北美均有相关病例报道。年波兰首次报道发现了。引起樱桃小果病症状复杂多变，表现程度常依季节、地区和果园的不同有很大的差异。典型症状有叶片边缘轻微卷曲，发病叶片在夏末和秋季变为红色或青铜色，侵染果实会使其不能完全成熟，着色不完全，产生斑点，果实小，畸形，收获时只有正常果实的 大小。受影响的果实呈现暗红色、三角状，口味下降，果实成熟过晚，据报道更易侵害具有暗红色果实的栽培品种 。通过汁液和昆虫介体传播，年在加拿大发现新的传播介体为苹果粉蚧（ ）。樱桃小果病主要与2个分离物、有关，都为长线形病毒科（）长线形病毒属（），单分体基因组，病毒核酸为单分子线形正义。病毒粒子呈弯曲的长线型，螺旋对称结构，长 ，宽 。樱桃小果病的病原研究进展很慢，直到年的全序列被测出，对 的研究才有了突破性的进展。年中国首次在云南昆明樱花和甜樱桃中发现，这是在中国的首次系统报道。中国至今未有和在甜樱桃上共同侵染的报道。 樱桃绿环斑驳病毒（ ，）年在美国密歇根州的酸樱桃上首次发现了，可侵染几种李属植物，包括酸樱桃、甜樱桃、樱花、桃、杏。该病毒在北美、欧洲、新西兰、非洲和亚洲等地区分布极广。属于凹陷病毒属（），是单分子线形正义，无阶段，其基因组长 ，除端（）尾巴外，含个开放阅读框架（）。编码依赖的聚合酶；是1个三基因框，编码解旋酶；编码衣壳蛋白；其余个的作用还未确定。等分离出个墨西哥分离物，得知病毒粒子长约 ，直径 ，有个 的， 衣壳蛋白。感染酸樱桃导致叶片黄化、次脉周围暗色斑驳等症状，但在甜樱桃及其他李属作物上为潜隐性病毒，侵染后通常无症状。等从美国密歇根州的酸樱桃中检测到；等在日本甜樱桃上报道了；等从波兰甜樱桃、等从土耳其甜樱桃中分离到病毒分离株；年我国首次利用检测技术在甜樱桃等李属植物中发现了。 甜樱桃病毒检测技术 指示植物检测法草本指示植物法：该方法一般采用汁液接种法。昆诺藜、烟草可作为李属植物病毒常用指示植物。中国利用黄瓜、南瓜和美丽猪屎豆作为草本指示植物，对、在不同指示植物上的症状表现进行了检测和研究，并首次利用生物学方法检测出，；木本指示植物法：目前国际上通过的用于田间鉴定的指示植物有种，分别为山樱桃的和，甜樱桃的滨库（）、赛姆（）、凯弥戴柯斯（）。根据指示植物和所鉴定病毒对温度的要求，在控制温度的温室条件下也可进行鉴定。常用的标准李属指示植物有桃、山樱桃s。 电子显微镜技术电子显微镜能直接观察到病毒粒子的形态特征，可将病毒提纯后对病毒粒体直接观察。在电子显微镜检测的基础上，又发展起来的免疫吸附电镜技术和胶体金免疫电镜技术，使病毒检测的灵敏性和直观性大幅度提高。但由于果树病毒浓度低，分布不均匀，因此电镜在果树病毒检测中应用较少。 酶联免疫吸附法（）目前，在植物病毒的检测上应用最广泛的检测方法是酶联免疫吸附法（）。此方法通过抗原抗体的特异性识别反应来进行检测。最早为直接双抗体夹心法（）。应用该技术已成功检测出、，、。后来又出现了蛋白夹心法（）和间接双抗体夹心法，其准确率比 高。虽然酶联免疫吸附法精确度较高，但有一定的局限性。例如，在某些情况下有的病毒缺乏外壳蛋白，而类病毒则没有外壳蛋白，无法运用酶联免疫法检测；受病毒系统和复合侵染的木本植物，无法完成纯化病毒和制备抗血清；寄主植物中低浓度的病毒也无法检测。 分子生物学技术分子生物学技术是通过检测病毒核酸（、）来证实病毒的存在。此技术比灵敏度高，特异性强、快速，可用于大量样品的检测，适应范围广，其应用对象为病毒、病毒及类病毒。目前，常用的分子生物学技术主要包括核酸分子杂交技术、多聚酶链式反应技术（）、双链电泳技术（）等。国外许多学者采用技术检测果树病毒，并取得了很好的效果。新发展的-技术是以技术为基础衍生出的病毒检测方法，可以检测（-）数量级的植物病毒及大规模的样品，。近年来，在-基础上又发展了-和多重-，实时荧光定量等，目前应用较多的是检测技术。年侯义龙应用 技术检测出、及 种病毒，同时调查发现年生甜樱桃品种巨红感染率高达，感染率为。实时荧光定量技术也将进一步用于果树病毒的研究中。分子生物学技术在病毒检测上的应用将会有更广阔的前景。 存在的问题与展望）在当今技术水平下，对于甜樱桃病毒病的防治尚无有效的化学药剂，建立快速有效的检测方法，加强病毒检疫检验是防治病毒病的惟一途径。目前分子生物学方法特别是核酸分子杂交技术、双链（）电泳技术、聚合酶链式反应（）的发展和应用极大地推动了甜樱桃病毒病的检测和研究。近年来，在基础上又出现了免疫捕捉（）技术、实时荧光（ ）技术等，快速、精确的检测技术有待进一步发展与应用于中国甜樱桃产业中。）目前国际上已确定的樱桃病毒病有4种，而中国有报道的侵染甜樱桃的病毒仅有种，中国对甜樱桃病毒病病原的研究还不够全面。有必要对中国的甜樱桃病毒病的株系种类、分布和危害进行详细的调查。明确中国甜樱桃病毒病的种类、发生和分布情况，进一步为田间甜樱桃病毒病的检测和防治提供依据。）近几年随着甜樱桃苗木引种和调运，甜樱桃新病毒病随着苗木传入国内，并在国内各地区逐渐发生，凸显了苗木病毒检疫存在的问题。应该加大苗木进出口检疫监管力度，加强苗木国内调运检测检验工作，严格控制有害病毒广泛传播。）加强果树脱毒与无病毒苗木繁殖，建立无病毒苗木良种繁育体系，是保证甜樱桃产量和提高品质的基本措施。参考文献： 董 薇，宋雅坤，吴明勤，等大樱桃病毒病研究进展中国农学通报，（）： 苏佳明苹果和樱桃主要病毒调查及脱毒苗培育研究泰安：山东农业大学， 纪 彦，吴海东，王 宁大樱桃脱毒及检测技术研究进展大连民族学院学报，（）： ， ， ， ，（）： 李 青，覃兰英，李明福，等酶联免疫法检测核果果树病毒北京农业科学， （）： 阮小凤，杨 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