蒲公英不同部位提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果的比较.doc

蒲公英同部位提取物对大肠轩萄和金黄色葡萄球萄抑萄效果的比较(1梨树县榆树台镇畜牧兽医工作站，吉林梨树. 136506；2梨树县动物疫病预防控制中心，吉林梨树. 1365000；3吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春. 130062)【摘要】通过水提、水提75醇沉物和水提80醇沉物的方法制备蒲公英全草根的提取物，比较蒲公英不同部位对大肠杆菌和金葡菌的抑菌效果，从而确定出最佳抑菌有效部位和提取方法。方法：采用药敏试验，测定蒲公英全草、根对大肠杆菌和金葡菌抑茵效果。结果：蒲公英全草、根能有效的抑制两种茵，对金葡菌作用较明显。结论：蒲公英全草的抑茵效果优于蒲公英根，水提. 75醇沉物抑菌效果优于水提和水提. 80醇沉物的抑菌效果。【关键词】蒲公英；抑菌效果；最小抑菌浓度【中图分类号S85261【文献标识码】A【文章编号16722078(2010)10. 0001003 蒲公英是菊科多年生草本植物，别名黄花地丁、黄花三七、婆婆丁等，味苦、甘，寒。归肝，胃经。具有清热解毒，消肿散结，利尿通淋等功效n】。笔者通过水提、水提75醇沉物和水提80醇沉物的方法制备蒲公英全草、根的提取物，比较它们对大肠杆菌和金葡菌的抑菌效果。通比较得出最佳抑菌有效部位和提取方法，从而指导蒲公英的临床应用和为其深入研究提供依据。l材料11仪器无菌超净工作台；高压灭菌器；恒温振荡培养箱；微量移液器；涂菌棒等。12药品与试剂蒲公英全草；蒲公英根；95乙醇物，蛋白胨，NaCI，琼脂等。l_3菌种大肠杆菌、金葡菌纯菌种。 14培养基琼脂培养基和LB液体培养基。2方法21蒲公英全草提取物的制备蒲公英全草水提物：天平称蒲公英全草2 00g，用纱布包裹好用蒸馏水浸泡过1 2h，再用砂锅煎煮、过滤，重复三次，将所得的滤液合并。然后用旋转蒸发器浓缩至2 00mL，即得 1 gmL蒲公英全草水提物。蒲公英全草水提7 5醇沉物：取1 00mL蒲公英全草水提物，加9 5乙醇3 75mL，使含醇量达75(十字交叉法计算)，静置4 8h，滤过，回收乙醇浓缩至1 00mL，即得蒲公英全草水提7 5醇沉物。蒲公英全草水提8 0醇沉物：取50mL蒲公英全草水提. 7 5醇沉物，再加9 5乙醇267mL，使含醇量达8 0，静置4 8h，滤过回收乙醇，浓缩至50mL，即得蒲公英全草水提8 0醇沉物。22蒲公英根提取物的制备蒲公英根水提物：天平称取蒲公英根2 00g，用纱布包裹好用蒸馏水浸泡过1 2h，再用砂锅煎煮、过滤，重复三次，将所得的滤液合并。然后用旋转蒸发器浓缩至2 00mL，即得I gmL蒲公英水提物。蒲公英根水提. 7 5醇沉物：取1 00mL蒲公英根水提物，加9 5乙醇3 75mL；使含醇量达. 7 5(十字交叉法计算)，静置. 4 8h，滤过，回收乙醇浓缩至. 100mL，即得蒲公英根水提. 7 5醇沉物。蒲公英根水提. 8 0醇沉物：取. 50mL蒲公英根水提7 5醇沉物，再加95乙醇2 67mL，使含醇量达80，静置4 8h，滤过回收乙醇，浓缩至5 0mL，即得蒲公英根水提. 8 0醇沉物。. 2-3抑菌活性的测定. 231细菌培养用铂金耳挑取所提供培养基上生长的大肠杆菌、金葡菌的单个菌落，接种于灭菌后的LB液体培养基中，然后置于. 3 7恒温摇床中，进行. 18h的增菌培养。. 232药敏试验 将药敏纸片分别置于不同浓度蒲公英全草、根的提取物中浸泡。将恒温振荡培养箱中的菌液取出，稀释成浓度为每毫升l0个菌液，即OD =0506的菌液，涂布于灭菌后的琼脂培养基上各1 001000000L，待培养基表面干燥，以生理盐水纸片为阴性对照，同时将含有不同浓度蒲公英全草、根提取物的直径. 5 mm的药敏纸片贴于培养基表面，记录。37恒温培. 养2 4h，观察并测定抑菌环直径，重复3次。. 23_3 MIC的9 ,4定n采用二倍稀释法将用最佳提取方法提取的蒲公英全草、根的提取物分别稀释成. 5 00mgmL、. 250mgmL、. 125mgmL、. 625mgmL，将其各. 2mL分装于灭菌后的装有. 18mL琼脂培养基的三角瓶内，充分混匀，空白对照组不加药物，高压灭菌器灭菌。无菌超净台内倒入各平皿内，待琼脂培养基凝固，吸取. 1 00vL菌液滴入每个平皿中，用涂菌棒将菌液均匀涂开，至菌液干燥。37恒温箱培养. 18h后观察结果。3结果与分析. 31结果下表为采用药敏试验方法测定的不同提取方表l蒲公英全草、根提取物对大肠杆菌的平均抑菌环直径mm 浓度（mg/ml）药物 500 250 125 62.5 0蒲公英全草水体物 7.60 7.00 6.00 5.20 5.00蒲公英全草水提物75%醇沉物 8.80 7.70 6.50 5.90 5.00蒲公英全草水提物80%醇沉物 8.30 7.10 6.20 5.50 500蒲公英根全草水提物 7.10 6.80 5.70 5.105.00蒲公英根全草水提物醇沉物75% 8.00 7.20 6.00 5.50 5.00蒲公英根全草水体物醇沉物80% 7.40 6.80 5.80 5.40 5.00表2蒲公英全草、根提取物对金葡菌的平均抑菌环直径. mm 浓度（mg/ml）药物 500 250 125 62.5 0蒲公英全草水体物 8.65 7.60 6.60 5.80 5.00蒲公英全草水提物75%醇沉物 9.90 9.00 8.40 7.60 5.00蒲公英全草水提物80%醇沉物 9.20 8.17 7.20 6.30 5.00蒲公英根全草水提物 7.90 7.00 6.20 5.50 5.00蒲公英根全草水提物醇沉物75% 8.70 7.50 6.77 6.00 5.00蒲公英根全草水体物醇沉物80% 8.00 7.20 6.60 5.70 5.00由表. 1、2可知，蒲公英通过不同提取方法提取的不同提取物对大肠杆菌、金葡菌均有抑制作用，且随着浓度的增加，抑菌效果越明显。其中不同提取方法制备的蒲公英全草的提取物，抑菌效果强于蒲公英根的提取物。水提醇沉法制备的提取物抑菌效果优于水提法，水提. 7 5醇沉物抑菌效果最佳，金葡菌比大肠杆菌对蒲公英提取物作用敏感。. 32蒲公英最小抑菌浓度MIC值下表为根据蒲公英抑菌活性测定结果，选择测定蒲公英全草、根水提. 7 5醇沉物对大肠杆菌. 和金葡菌的最小抑菌浓度。表3蒲公英全草水提75醇沉物对大肠杆菌、金葡菌的. MIC值(n=3)菌种 MIC（mg/mL）大肠杆菌 192(一) 96(一) 48(+) 24(+) 金葡菌 168(一) 84(一) 42(+) 21(+)菌种 MIC（mg/mL）大肠杆菌 12(+) 6(+) 3(+) 1.5(+)金葡菌 10.5(+) 5.25(+) 2.63(+) 1.31(+)注：“+”为阳性抑制，“一”为阴性不抑制。表4蒲公英根水提75醇沉物对大肠杆菌、金葡菌的MIC值(n=3)菌种 MIC（mg/mL）大肠杆菌 248 (一) 124(一) 62(+) 31(+)金葡菌 200 (一) 100(一) 50(+) 25(+)菌种 MIC（mg/mL）大肠杆菌 15.5 (+) 7.5(+) 3.88(+) 1.44(+)金葡菌 12.5