水产品中孔雀石绿残留检测前处理方法研究与优化.doc

水产品中孔雀石绿残留检测前处理方法研究与优化 曹秀梅 （秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心，河北秦皇岛066000） 摘要：采用高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿的残留量，参考GB/T20361-xx的方法，将前处理步骤部分进行了优化，将样品前处理的匀浆提取改为样品涡动和离心；增加50mL实验用水，去掉二次萃取乙腈，不用过滤膜过滤直接上机进行测定。结果表明：经添加回收实验，回收率在80%左右，本方法操作简便，消除了乳化现象，提高回收率，偏差小。 关键词：水产品；孔雀石绿；前处理；优化 水产品营养丰富，味道鲜美，深受人们喜爱。近年来水产养殖业迅猛发展，水产品中药物残留对人类健康的危害已成为当今突出的食品安全问题1，许多商者为了增加收益，在水产品中添加孔雀石绿药物对其新鲜度和完好性进行防御。孔雀石绿是带有金属光泽的绿色结晶体，可用于治理鱼类、鱼卵寄生虫、真菌或细菌感染，在养殖与运输中被常常用到，是廉价、疗效好的药物，然而其具有难代谢、残留时间长、高毒性、高残留、可致癌、致畸形等多种副作用，危害人们的身体健康，被许多国家纷纷禁止使用。为了防止滥用孔雀石绿，许多国家也都制定了相应的法规措施及检测标准。目前对孔雀石绿的检测主要有高效液相色谱法，有的省部级单位开始用液质联用检测仪，虽然有较低的检测限，但是仪器价格昂贵，技术要求较高。而且，我们在采用国标GB/T20361-xx的荧光检测方法实验过程中发现了一些问题，为提高检测工作效率，保障检测结果的准确性、可靠性，我们在此基础上进行了部分改进。经过研究能满足水产品孔雀石绿残留量测定的要求，可为保护广大消费者的身体健康、为农业执法提供重要的技术保障。 1实验部分 1.1仪器与设备 岛津LC20A液相色谱仪，荧光检测器；高速离心机：TGL-20M；旋转蒸发仪。 1.2色谱条件 参照GB/T20361-xx2的色谱条件。 1.3样品制备 参照GB/T20361-xx2的样品提取、萃取、净化等步骤，结合优化步骤进行处理操作，符合检测标准要求。 2结果与讨论 实验结果以色谱图中保留时间定性，外标法定量。 2.1样品提取改进 本方法将GB/T20361-xx中的1000r/min匀浆提取30s改为加标静置10min，防止用匀浆机匀浆增加加标损失，影响回收率，并用3000r/min涡动2min，4000r/min离心3min，使孔雀石绿提取完全，增加它的溶出效果，从而增加实验的回收率效果。 2.2样品萃取改进 因GB/T20361-xx方法萃取乳化现象严重，第二次萃取分层不明显，因此第一次萃取加入50mL水；由于乙腈对水的溶解度较大，第二次将5mL乙腈去掉，不用离心第二次分层效果非常明显，缩短了时间，提取分离效果也提高了。 2.3样品过滤膜改进 由于市面上的滤膜质量参差不齐，有时出现一些滤膜的杂峰3，干扰出峰，使得谱图不美观，所以本方法将过柱提取液直接于刻度管中定容上机测定，节约了成本，提高了效率。 2.4标准曲线及加标回收情况 以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标做标准曲线，在0.1500ng/mL线性范围内良好，线性范围良好。标准品谱图见图1。 取大菱鲆7份样品，分别按加入1mL500ng/mL；2mL500ng/mL标准工作液，进行加标回收实验，每个溶度重复3次，另外一份为空白对照，按照改进的方法进行测定，结果如表1。 3结论 本实验在GB/T20361-xx的基础上进行了改进。将样品前处理的匀浆提取改为样品涡动和离心；提高了目标物的溶出效果，减少了匀浆带来的损失，提高了回收率，同时在萃取步骤增加50mL实验用水，去掉5mL乙腈，减少了试剂的使用，防止了乳化现象的出现，增加了萃取分层的效果；实验最后不用过滤膜过滤直接上机进行测定，节省了消耗品的成本，也避免了杂峰的干扰。结果表明，经改进的方法用于检测水产品中的孔雀石绿成分，简便、偏差小、提高了回收率、提高了工作效率。而且通过从事检测工作不同工作年限的试验人员的多次比对，回收率也能达到80%左右，说明改进后的方法适用于水产品中的孔雀石绿成分残留量的检测。 参考文献： 1郑斌.水产品中几种常用药物残留的液相色谱检测方法研究D.青岛：中国海洋大学，xx 2GB/T20361-xx.水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱