巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析1讲解课件

第十章 巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析,小组成员：叶蕾 杨婷婷,主要内容：,药物结构、理化性质 鉴别试验 杂质检查 含量测定 体内药物分析,一、巴比妥类药物的结构分析,基本结构：,1.环状丙二酰脲类 2. R1=R2=H时， 为巴比妥酸。 3.多为巴比妥酸的 5,5-二取代物， 少数为1,5,5- 三取代物或C2为 硫取代。,第一节 巴比妥类药物的分析,代表药物：,5,5-二取代,R1 R2,巴比妥,苯巴比妥,戊巴比妥,异戊巴比妥,司可巴比妥 (速可眠),1,5,5-三取代,甲苯巴比妥,己琐巴比妥,1,5,5-三取代,硫喷妥钠,C2上S取代,二、理化性质,（一）弱酸性,二级电离：,#19. （五）紫外吸收光谱,（二）水解反应,红色石蕊试纸变蓝,应用：鉴别巴比妥类药物 JP（15）采用此反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥,1、巴比妥类药物,2、巴比妥类药物钠盐,（三）与重金属离子的反应,1.与银盐的反应,白色沉淀,应用：鉴别、含量测定（Ch.P）,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#23. 幻灯片 23,2.与铜盐的反应(Zwikker试验),注意：,a.巴比妥类药物呈紫堇色或生成紫色沉淀 鉴别试验（Ch.P）,b. 含S巴比妥类药物显绿色 硫喷妥特征反应,d. 吡啶作用： 1) 吸收H+使巴比妥类易解离 2) 孤对电子生成配位体,c.可区别巴比妥类与硫代巴比妥类药物； 5，5-二取代基不同的巴比妥类药物生成 的化合物在氯仿中的溶解度不同，可用 于本类药物的鉴别。,3.与钴盐反应(Parri试验),紫堇色,应用：鉴别、含量测定,注意：,反应在无水条件下； 溶剂：无水乙(甲)醇,b. 钴盐：醋酸钴、硝酸钴或氧化钴,c.碱：以有机碱为好异丙胺,4.与汞盐反应,（四）与香草醛反应,丙二酰脲基团中的H,（五）紫外吸收光谱,#10. 幻灯片 10,（六）色谱行为,1.TLC 2.HPLC,（七）显微结晶,生物样品中微量巴比妥类药物的检验,巴比妥：长方形 苯巴比妥：球形 花瓣状 巴比妥铜吡啶：十字形紫色 苯巴比妥铜吡啶：浅紫色细小不规则或类菱形,三、鉴别试验,母核的反应本类药物共有的反应,取代基的反应类内区别,（一）丙二酰脲类鉴别反应母核反应（ChP）,1.银盐反应,取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml， 振摇2min，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液， 即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加 过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。,取供试品约50mg，加吡啶溶液（1 10）5ml，溶解后加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。,2.铜盐反应,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#12. 幻灯片 12,（二）特殊取代基或元素的鉴别反应,1.芳环反应苯巴比妥及钠盐,（1）硝化反应,黄色,（2）硫酸亚硝酸钠反应（苯巴比妥及钠盐Ch.P）,苯巴比妥H2SO4-NaNO2 橙黄色 橙红色,（3）与甲醛硫酸反应（苯巴比妥及钠盐ChP）,2.不饱和取代基的鉴别反应司可巴比妥钠,加成,加成,氧化,3.硫元素的反应硫喷妥钠（Ch.P）,应用：区别硫代巴比妥与巴比妥类,（四）IR,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#43. 幻灯片 43,（三）测定熔点,四、特殊杂质检查,（一）苯巴比妥的特殊杂质检查 1.酸度副产物苯基丙二酰脲 2.溶液澄清度乙醇不溶性杂质 3.中性或碱性物质副产物、分解产物 4.有关物质-HPLC 主成分自身对照 （二）司可巴比妥钠的特殊杂质检查 1.溶液澄清度水不溶性杂质 2.中性或碱性物质副产物、分解产物,五、含量测定,（一）银量法,1.原理,白色,2.测定方法 取供试品用甲醇溶解，加入碳酸钠，照 电位法，用硝酸银滴定液滴定。,3.终点指示,稍过量的Ag+与巴比妥类药物生成白色浑浊 银玻璃电极电位法,4.举例 异戊巴比妥的测定方法（ChP） 取本品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml 使溶解，再加新鲜配制的3%无水碳酸钠溶液 15ml，照电位滴定法，用硝酸银滴定液 （0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸银滴定液 （0.1mol/L）相当于22.63mg的C11H18N2O3。,5.讨论,（1）化学计量关系：1:1,（2）优点: 操作简便、专属性强,（4） Na2CO3的作用,(二)溴量法,1.原理, Br2 (定量过量),1C12H17N2NaO31Br2,司可巴比妥钠（ChP） 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水l0ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.05mol/L)25m1，再加盐酸5m1，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液l0ml，立即密塞，摇匀后用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每lml溴滴定液(0.05mol/L)相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。,2.测定方法,3.讨论,（1）化学计量关系：1:1 （2）密塞目的 （3）为何在近终点时加指示剂 （4）空白试验校正,（三）酸碱滴定法,1.原理,2.测定方法,（1）水乙醇混合溶剂,滴定剂：氢氧化钠,指示剂：麝香草酚酞,终点颜色：淡蓝色,电位法指示终点,（2）胶束水溶液 表面活性剂使巴比妥类药物的酸性增强,滴定剂：氢氧化钠,溶剂：有机表面活性剂：溴化十六烷基三甲基苄铵,指示剂：麝香草酚酞,电位法指示终点,（3）非水溶液 巴比妥类药物的酸性增强,有机溶剂：二甲基甲酰铵、甲醇、丙酮等,滴定剂：甲醇钾（钠）、氢氧化四丁基铵,指示剂：麝香草酚蓝,电位法指示终点,（四）紫外分光光度法,1.原理,巴比妥类药物在碱性介质中电离为具有紫外吸收的结构,2. 特点,（1）专属性强，灵敏度高 （2）用于巴比妥类药物原料及制剂的含量测定 （3）体内药物的检测,3.测定方法,（1）直接紫外分光光度法,a.根据样品溶液的pH值，选用对应的max b.采用对照品法，计算药物含量,取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取 适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶 中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%氢 氧化钠溶液定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液； 另取硫喷妥对照品，加0.4%氢氧化钠溶液溶解并定 量稀释制成每1ml中约含5g的溶液。照分光光度法， 在304nm波长处测定吸收度，根据每支的平均装量 计算。每1mg硫喷妥相当于1.091mg的 C11H17N2NaS。,c.举例：,(2)提取分离后紫外分光光度法 苯巴比妥钠【USP(24)】,可消除干扰物质对测定的影响,（五）HPLC,RP-HPLC HPLC测定苯巴比妥片的含量（ChP）,六、体内药物分析,RP-HPLC同时测定血清中巴比妥类的浓度 GC-MS同时测定人体液中巴比妥药物 HPCE法测定体内尿液中巴比妥和苯巴比妥两种药物 LC-MS联用技术监测巴比妥类药物,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#26. 幻灯片 26,苯巴比妥,第二节 苯并二氮卓类药物的分析 一、基本结构与主要化学性质 1.结构与典型药物： 苯并二氮杂卓类药物为含氮杂原子、六元和七元环双并合而成的有机化合物。 其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的镇静剂。,Contents,一、苯并二氮杂卓类药物的结构与性质,苯环与七元含氮杂环稠合而成的有机药物,N,N,1,2,3,4,5,7,1,4-苯并二氮杂卓类,结构特点： 苯并二氮杂卓类药物为含氮杂原子、六元和七元环并合而成的有机化合物。 其中1，4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的镇静剂。,（一）主要理化性质,1，苯并二氮杂卓母核 弱碱性 药物的pka值与其在不同PH值时主要是以何种形式（质子化分子H2A+；中性分子HA；去质子化分子A-)存在有关。,2.水解性,2.水解 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。 地西泮 水解后茚三酮反应 氯氮卓 水解后芳香第一胺反应 3. UV 吸收特性 较大的共轭体系,地西泮,奥沙西泮,劳拉西泮,(二)典型药物,氯硝西泮,氯氮卓,三唑仑,1. 沉淀反应,氯氮卓 橙红色沉淀 阿普唑仑 盐酸氟西泮 KBiI4 生成橙红色沉淀 氯硝西泮 后者放置后，沉淀颜色变深,二、鉴别试验,（一）、化学鉴别,1. 芳伯胺 (水解后，重氮化-偶合),本类药物如N1位上未取代者，与盐酸共热水解后，生成芳伯胺，可发生重氮化-偶合反应显色,地西泮无此反应,C1位氮原子上有甲基取代，水解产物没有芳伯氨基,橙红色,（二）、特征基团反应,2. 氯化物的鉴别反应,本类药物大多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，生成氯化氢，以5%氢氧化钠溶液吸收，加稀硝酸酸化，并缓缓煮沸2分钟，显氯化物反应。,具有较大共轭体系，利用紫外最大吸收波长，以及最大吸收波长处的吸光度或吸光度比值进行鉴别 红外吸收光谱用于大多数1,4-苯并二氮杂卓类药物的指纹鉴别,(三)吸收光谱特征,(四)色谱法,结构与性质相似，不易区分鉴别。色谱法用于本类药物原料和制剂的专属鉴别,三、特殊杂质检查,氯氮卓主要有关物质,4-氧化-7-氯-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂 -2-酮,3-氧化-6-氯-2-(氯甲基)- 4-苯基喹唑啉,(2-氨基-5-氯苯基)苯甲酮,TLC检查-BP、USP HPLC检查-ChP,氯硝西泮主要有关物质,(2-氨基-5-硝基苯基)(2-氯苯基)甲酮,3-氨基-4-(2-氯苯基)-6-硝基喹啉-2(1H)-酮,氯氮卓中有关物质的检查,示例10-29 USP中氯氮卓有关物质的硅胶薄层TLC检查法：取本品50.0mg，加丙酮2.5ml，振摇，待不溶颗粒下沉后你，取上清液50ul与（2-氨基-5-氯苯基）苯甲酮对照溶液（10ug/ml），4-氧化-7-氯-1，3-二氢-5苯基-2H-1,4-苯并二氮杂卓-2酮对照溶液（100ug/ml）各10ul，分别点于同一硅胶薄层板上，以乙酸乙酯展开（不必预先饱和），喷以硫酸溶液（1mol/L）,在105加热15min后，一次喷以亚硝酸溶液（11000），氨基磺酸铵溶液（1200）及N-（1-萘基）-乙二胺盐酸溶液（11000）。供试品溶液所显杂质斑点，2H-1,4苯并二氮杂卓-2-酮（中间体）含量不得超过0.1%，分解产物（2-氨基-5-氯苯基）苯甲酮含量不得超过0.01%。,示例10-30 BP2003中氯氮卓有关物质的硅胶GF254TLC检查法：避光操作，试液临用前配制。取本品0.10g，加甲苯-甲醇（8：12）溶解并稀释至15ml，作为供试品溶液；精密量取0.5ml加甲苯-甲醇（8：12）稀释至100ml，作为对照液（a）;取（2-氨基-5-氯苯基）苯甲酮对照品5mg，甲苯-甲醇（8：12）溶解并稀释至100ml，作为对照液（b）。吸取对照溶液各5ul，供试品溶液25ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，甲苯-乙酸乙酯-乙醇-二乙胺-水（70：15：10：4：1）展开剂，展开后，晾干，置于紫外灯（254nm）下检视。供试品溶液所显杂色斑点，与对照溶液（a）的主斑点比较，不得更深（0.1%）。喷以1mol/L盐酸溶液现制亚硝酸钠溶液（1100），冷风吹干，再喷以盐酸N-（1-萘基）-乙二胺的乙醇溶液（41000），供试品溶液如显（2-氨基-4氯苯基）苯甲酮的紫色斑点，与对照品溶液（b）主斑点比较，不得更深（0.05%）。,ChP 方法：HPLC 法 条件：填充剂十八烷基硅烷键合硅胶 流动相乙腈-水（50:50） 检测波长254nm,由于不易获得有关物质对照品，ChP2010中对三唑仑采用HPLC法1%溶液主成份自身对照法检查，USP32中则采用GC峰面积归一化法检查有关物质的含量。,三唑仑中有关物质的气相色谱法检查,三唑仑中有关物质的气相色谱法检查,示例,USP32中三唑仑有关物质的GC峰面积归一化检查：取本品，加三氯甲烷溶解并制成每1ml中约含2mg的溶液，作为供试品溶液。照气相色谱法试验，使用玻璃色谱柱（3mm120cm），用酸洗并经硅烷化处理的硅藻土（60-80目）为载体，以三氟丙基甲基聚硅氧烷为固定液，涂布浓度为3%，检测器温